SPON2在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义_胡学义.pdf

0 0 9CARCINOGENESIS，TERATOGENESIS&MUTAGENESIS论著癌变畸变突变2023 年 1 月第 35 卷第 1 期收稿日期：2022-09-08；修订日期：2022-12-02基金项目：湖北省卫生健康委面上项目(WJ2021M063)；湖北省卫生健康委指导项目(WJ2021F052)作者信息：胡 学 义，E-mail：。*通 信 作 者，魏涧，E-mail：wei-SPON2在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义胡学义，沈丰，武伦，苏才武，魏涧*(湖北医药学院附属国药东风总医院普外科，湖北十堰442000)SPON2 expression in papillarythyroid carcinomas andits clinical significanceHU Xueyi,SHEN Feng,WU Lun,SU Caiwu,WEI Jian*(Sinopharm Dongfeng General Hospital,Hubei Universityof Medicine,Shiyan 442000,Hubei,China)【摘要】目的：探讨脊椎蛋白2(SPON2)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及其临床意义。方法：收集PTC及其癌旁组织新鲜手术标本7例，用实时荧光定量PCR(qPCR)检测PTC及其癌旁组织中SPON2 mRNA的表达情况。并选取20192020年间病理科存档PTC石蜡标本68例，采用免疫组织化学SP法检测SPON2蛋白在PTC中的表达情况；并使用Kaplan Meier-Plotter数据库分析SPON2mRNA表达水平与甲状腺癌患者的预后关系。使用GEPIA数据库分析SPON2 mRNA表达水平与甲状腺癌临床分期之间的关系。使用TIMER数据库分析SPON2 mRNA表达水平与甲状腺癌免疫细胞之间的关系。结果：qPCR结果显示，PTC组织SPON2 mRNA相对表达水平为1.7050.724，明显高于癌旁组织的0.9290.278，差异具有统计学意义(P=0.036)。免疫组化结果显示，SPON2蛋白表达于细胞质及细胞外基质中，在PTC中的表达显著高于癌旁组织，差异具有统计学意义(P0.01)。通过GEPIA数据库分析发现，SPON2 mRNA表达差异与甲状腺癌临床分期相关(P=0.002)。Kaplan Meier-Plotter数据库显示，在502例甲状腺癌病例中，SPON2mRNA高表达较低表达患者的生存预后更差(P=0.026)。TIMER数据库分析显示，SPON2 mRNA表达与甲状腺癌肿瘤纯度无明显相关(P=0.135)，而与B细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞浸润以及M2巨噬细胞标志物CD68、CD163、CD206呈正相关(均为P0.01)。结论：SPON2在PTC组织中高表达，SPON2高表达甲状腺癌患者预后不良，SPON2可能通过M2巨噬细胞及其他免疫细胞促进甲状腺癌进展。SPON2可能成为临床上新的甲状腺癌诊断标志物。【关键词】脊椎蛋白2；甲状腺癌；甲状腺乳头状癌；免疫细胞；预后；免疫组化中图分类号：R736.1文献标志码：A文章编号：1004-616X(2023)01-0009-06doi：10.3969/j.issn.1004-616x.2023.01.002【ABSTRACT】OBJECTIVE：To investigate expression of spondin 2(SPON2)in papillary thyroid carcinomas(PTC)and its clinical significance.METHODS：Seven fresh surgical specimens of PTC and adjacent tissueswere collected.real-time quantitative PCR(qPCR)was used to detect mRNA expression of SPON2 in thetissues.From 2019-2020，68 cases of PTC paraffin specimens were collected from the Department of Pathologyand expression of SPON2 protein in the specimens were detected using the immunohistochemical SP method.Prognostic relationships between SPON2 mRNA expression levels and thyroid cancers were evaluated using theKaplan Meier-Plotter database.Relationships between SPON2 mRNA expression levels and clinical stages wereanalyzed using the GEPIA database.Relationships between SPON2 mRNA expression levels and thyroid cancerimmune cells were analyzed using the TIMER database.RESULTS：The qPCR results showed that the mRNAexpression levels of SPON2 were significantly higher in PTC tissues(1.705 0.724)than in paraneoplastictissues(0.9290.278)(P=0.036).Immunohistochemical results showed that SPON2 protein was expressed in thecytoplasm and the extracellular matrix，and their expressions were significantly higher in PTC than in itsparacancerous tissues(P0.001).Analysis of the GEPIA database revealed that differences in SPON2 mRNAexpression correlated with clinical stages of the cancers(P=0.002).The Kaplan Meier-Plotter database showedthat，in502thyroidcancercases，prognosticsurvivalwasworseinpatientswithhighSPON2mRNA论著癌变畸变突变0 1 0CARCINOGENESIS，TERATOGENESIS&MUTAGENESISVol.35No.1Jan.2023expressionsthanwithlowexpressions(P=0.026).TIMERdatabaseanalysisshowedthatSPON2mRNAexpressions did not correlate significantly with thyroid cancer tumor purity(P=0.135)，but positively andsignificantly correlated with B cells，CD8+T cells，CD4+T cells，macrophages，neutrophils，dendritic cellinfiltration，and the M2 macrophage markers CD68，CD163，and CD206(P75%以上记 4 分；观察染色强度，不着色记 1分，弱染色记2分，中等强度染色记3分，强染色记4分。综合两者结果，以细胞阳性比例与染色强度乘积得分判断结果：积分4 分为阴性，乘积4 分则为阳性。论著癌变畸变突变0 1 1CARCINOGENESIS，TERATOGENESIS&MUTAGENESIS2023 年 1 月第 35 卷第 1 期1.5Kaplan Meier-Plotter分析SPON2 mRNA表达与甲状腺癌临床预后的关系使用Kaplan Meier-Plotter(http:/ mRNA表达水平与甲状腺癌患者的预后关系。在平台中选择“start KM Plotter forpan-cancer”，检索“SPON2”基因，肿瘤类型选择“thyroidcarcinoma”，绘 制 甲 状 腺 癌“SPON2”mRNA 表 达 高 低 与 预 后 相 关 的 总 生 存 率(overallsurvival，OS)曲线。1.6GEPIA数据库分析SPON2 mRNA与甲状腺癌临床分期的关系使用GEPIA(http:/gepia.cancer- 择“Expression DIY”中 的“Stageplot”，选择肿瘤名称为“THCA”，然后绘制图形。1.7TIMER数据库分析SPON2 mRNA在甲状腺癌中的表达与免疫细胞浸润的相关性进 入 TIMER(https:/cistrome.shinyapps.io/timer/)数据库8，使用Gene模块及Correlation模块分析在甲状腺癌中SPON2 mRNA表达和免疫细胞浸润及M2巨噬细胞标志物之间的关系。1.8统计学方法采 用 SPSS23.0 统 计 分 析 软 件 处 理 数 据，GraphPad 8软件绘制统计图，Kaplan-Meier法检验比较组间生存率差异，计数资料采用2检验及连续校正卡方检验，计量资料采用配对t检验，P0.05为差异具有统计学意义。2结果2.1PTC中SPON2 mRNA表达水平qPCR结果见图1，显示PTC组织中SPON2 mRNA相对表达水平为1.7050.724，明显高于癌旁组织的0.929 0.278，差 异 具 有 统 计 学 意 义(t=2.698，P=0.036)。2.2PTC中SPON2蛋白的表达与定位免疫组化检测结果见图2，SPON2蛋白表达于细胞质及细胞外基质。68例PTC癌组织中，SPON2阳性表达率为82.35%(56/68)；在配对的PTC癌旁组织中，SPON2 阳性表达率为 19.12%(13/68)。SPON2 蛋白在PTC组织中的表达显著高于相应癌旁组织，差异具有统计学意义(P0.05)。但在GEPIA数据库中(图3)，SPON2 mRNA表达水平与甲状腺临床分期相关，IIIIV期SPON2 mRNA表达水平明显高于III期，差异具有统计学意义(P=0.002)。2.4SPON2 mRNA表达与甲状腺癌患者预后的关系Kaplan Meier-Plotter 在线平台分析结果见图 4，与癌旁组织比较，*P=0.036.图1SPON2 mRNA在PTC及其癌旁组织中表达的差异表168例甲状腺癌患者SPON2蛋白表达与临床病理指标的关系临床病理指标年龄/岁1 cm病灶数/个12淋巴结转移是否SPON2表达阳性4511362033231937阴性1119384482值0.2660.1410.0300.000P0.6060.7070.8631.000A：PTC组织中SPON2呈高表达；B：癌旁组织中SPON2呈低表达.图2SPON2蛋白在PTC组织及其癌旁组织中的表达(200)论著癌变畸变突变0 1 2CARCINOGENESIS，TERATOGENESIS&MUTAGENESISVol.35No.1Jan.2023在数据库502个甲状腺癌病例中，SPON2 mRNA高表达患者较低表达患者的预后更差，OS更短，差异具有统计学意义(P=