LncRNA_LINC01...诱导PC12细胞损伤的影响_符瑾.pdf

epithelial mesenchymal transition and cisplatin resistance via targetingZEB1 in human gastric carcinoma cells J Gene，2019;700:110-9.7Lu TX，othenberg ME.MicroNAJ J Allergy Clin Immunol，2018;141(4):1202-7.8Li XY，Luo QF，Wei CK，et al MiNA-107 inhibits proliferation andmigration by targeting CDK8 in breast cancerJ Int J Clin ExpMed，2014;7(1):32-40.9Wang L，Li KK，Wang C，et al mi-107 regulates growth and metasta-sis of gastric cancer cells via activation of the PI3K-AKT signalingpathway by down-regulating FAT4J Cancer Med，2019;8(11):5264-73.10Xia H，Li Y，Lv XH.MicroNA-107 inhibits tumor growth and me-tastasis by targeting the BDNF-mediated PI3K/AKT pathway in hu-man non-small lung cancer J Int J Oncol，2016;49(4):1325-33.11Trueb B.Biology of FGFL1，the fifth fibroblast growth factor recep-tor J Cell Mol Life Sci，2011;68(6):951-64.12Yang XM，Shi L，Yi CZ，et al Mi-210-3p inhibits the tumor growthand metastasis of bladder cancer via targeting fibroblast growth factorreceptor-like 1 J Am J Cancer es，2017;7(8):1738-53.13Liu XJ，Zhang CF，Wang CH，et al mi-210 promotes human osteo-sarcoma cell migration and invasion by targeting FGFL1 J OncolLett，2018;16(2):2229-36.14Lin SS，Yuan LJ，Niu CC，et al Hyperbaric oxygen inhibits theHMGB1/AGE signaling pathway by upregulating Mir-107 expres-sion in human osteoarthritic chondrocytes J Osteoarthr Cartilage，2019;27(9):1372-81.15Jiao Y，Kong L，Yao Y，et al Osthole decreases beta-amyloid levelsthrough up-regulation of mi-107 in Alzheimers disease J Neuro-pharmacology，2016;108:332-44.16Wang SW，Ding ZY.Fibroblast growth factor receptors in breastcancer J Tumour Biol，2017;39(5):1-10.17Li XK，Wang C，Xiao J，et al Fibroblast growth factors，old kids onthe new block J Semin Cell Dev Biol，2016;53:155-67.18Fan YF，Li HX，Yu ZP，et al Long non-coding NA FGD5-AS1 pro-motes non-small cell lung cancer cell proliferation through sponginghsa-mi-107 to up-regulate FGFL1 J Biosci ep，2020;40(1):1-12.19Chen，Li D，Zheng M，et al FGFL1 affects chemoresistance ofsmall-cell lung cancer by modulating the PI3K/Akt pathway viaENO1 J J Cell Mol Med，2020;24(3):2123-34.2022-03-29 修回(编辑张艳利)LncNA LINC01503 调控 mi-331-3p/Nrf2/Keap1 信号通路对缺氧诱导 PC12 细胞损伤的影响符瑾文立陈丽丽(海南医学院附属海南医院康复医学中心高压氧科，海南海口570311)摘要 目的探讨长链非编码 NA(LncNA)LINC01503 对缺氧诱导的 PC12 细胞增殖、凋亡、氧化应激的影响及其对 mi-331-3p/核因子相关因子(Nrf)2/Kelch 样 ECH 相关蛋白(Keap)1 信号通路的调控作用。方法采用缺氧诱导 PC12 细胞建立细胞损伤模型，分别将 si-NC、si-LINC01503、mi-NC、mi-331-3p mimics、anti-mi-NC、anti-mi-331-3p、si-LINC01503 与anti-mi-NC、si-LINC01503 与 anti-mi-331-3p 转染至 PC12 细胞 48 h 后进行缺氧处理 24 h;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qT-PC)法检测 LINC01503、mi-331-3p 的表达量;噻唑蓝(MTT)、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡率;检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量;双荧光素酶报告实验检测 LINC01503 与 mi-331-3p 的靶向关系;Western 印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、裂解半胱天冬酶(Cleaved-caspase)-3、Nrf2、Keap1 蛋白表达量。结果缺氧诱导的 PC12 细胞中 LINC01503 的表达水平明显升高，mi-331-3p 表达、细胞活力及 CyclinD1 蛋白水平明显降低，凋亡率及Cleaved-caspase-3、Nrf2、Keap1 蛋白水平、MDA、LDH 的含量明显升高，而 SOD 的含量明显降低(均 P 0.05);转染 si-LINC01503 或转染 mi-331-3p mimics 后可明显提高细胞活力、CyclinD1 蛋白水平及 SOD 的含量(P0.05)，降低凋亡率、Cleaved-caspase-3、Nrf2、Keap1 蛋白水平及 MDA、LDH 的含量(P0.05);双荧光素酶报告实验证实 LINC01503 可充当 mi-331-3p 竞争性内源 NA;共转染 si-LINC01503 与 anti-mi-331-3p 可明显逆转抑制 LINC01503 表达对缺氧诱导的 PC12 细胞增殖、凋亡、氧化应激及 Nrf2/Keap1 信号通路的作用。结论抑制 LINC01503 表达可通过上调 mi-331-3p 的表达而促进细胞增殖及抑制氧化应激、凋亡从而减轻缺氧诱导的 PC12 细胞损伤，其作用机制可能与抑制 Nrf2/Keap1 信号通路的活化有关。关键词 LncNA LINC01503;mi-331-3p;核因子相关因子(Nrf2)/Kelch 样 ECH 相关蛋白(Keap)1 信号通路;缺氧;PC12 细胞中图分类号 363 文献标识码 A 文章编号 1005-9202(2023)03-0710-06;doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2023.03.050第一作者:符瑾(1985-)，女，硕士，主治医师，主要从事神经康复研究。缺血性脑卒中等急性脑血管疾病具有高病发率、高死亡率等特点，已严重威胁人类生命安全，缺血缺氧可引起神经细胞损伤而造成神经系统功能障碍，目前急性脑血管疾病的发病机制尚未阐明，因而探究其发病机制有助于提高其治疗效果及改善患者预后1。长链非编码 NA(LncNA)在缺氧诱导的017中国老年学杂志 2023 年 2 月第 43 卷大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 PC12 中表达异常，沉默 LncNA MEG3 可通过抑制 TIMP2 启动子甲基化而减轻缺氧诱导的 PC12 细胞损伤2。LncNAEFNA3 表达下调通过上调 mi-101a 加重缺氧诱导的 PC12 细胞损伤3。微小 NA-331-3p(mi-331-3p)在脊髓损伤中表达下调，并可通过靶向AP1A 减轻脊髓损伤，Starbase 预测显示 LncNALINC01503 与 mi-331-3p 存 在 结 合 位 点，已 知LINC01503 表达上调可促进胆管癌细胞增殖及侵袭4，5。脑组织氧化应激可激活核因子相关因子(Nrf)2/Kelch 样 ECH 相关蛋白(Keap)1 信号通路从而造成脑组织损伤6。本研究探究 LINC01503对缺氧诱导 PC12 细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响，及其对 mi-331-3p/Nrf2/Keap1 信号通路的调控作用。1材料与方法1.1材料与试剂上海通派生物提供大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 PC12;上海联迈生物提供 Trizol 试剂;北京天根生化提供反转录试剂与荧光定量 PC试剂;上海吉玛制药提供 si-NC、si-LINC01503、mi-NC、mi-331-3p mimics、anti-mi-NC、anti-mi-331-3p;美 国Invitrogen提 供pcDNA3.1、pcDNA-LINC01503、Lipofectamine2000;上海江林生物提供噻唑蓝(MTT)试剂;上海翊圣生物提供细胞凋亡检测试剂盒;南京建成生物提供丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒;美国 Santa Cruz 提供兔抗鼠细胞周期蛋白(Cyc-lin)D1、裂解半胱天冬酶(Cleaved-caspase)-3 抗体;武汉博士德生物提供辣根过氧化物酶(HP)标记的山羊抗兔二抗。1.2方法1.2.1实验分组PC12 细胞培养于含 10%胎牛血清与青霉素-链霉素混合溶液的 DMEM 培养液内，于 37、95%O2、5%CO2恒温培养箱内培养，PC12 细胞接种于 6 孔板(5103个/孔)或 96 孔板(3103个/孔)，置于 37、1%O2、95%N2、5%CO2恒温培养箱内缺氧处理24 h7，记为 hypoxia 组。同时将 正 常 培 养 的 细 胞 作 为 NC 组。采 用 Lipo-fectamine2000 试 剂 分 别 将 si-NC、si-LINC01503、mi-NC、mi-331-3p mimics、anti-mi-NC、anti-mi-331-3p、si-LINC01503 与 anti-mi-NC、si-LINC01503与 anti-mi-331-3p 转染至 PC12 细胞48 h 后进行缺氧处理24 h，分别记为 hypoxia+si-NC 组、hypoxia+si-LINC01503 组、hypoxia+mi-NC 组、hypoxia+mi-331-3p 组、anti-mi-NC+hypoxia 组、anti-mi-331-3p+hypoxia 组、si-LINC01503+anti-mi-NC+hypoxia组、si-LINC015