白藜芦醇激活PI3K_Ak...、IL-1β含量的分子机制_王瑜.pdf

popolysaccharide-induced inflammatory injury in CCD-18co cells bytargeting GDF11 through the TL4/NF-B and JNK/p38 signalingpathways J Histol Histopathol，2020;35(12):1473-816Malcomson FC，Willis ND，McCallum I，et al Diet-associated inflam-mation modulates inflammation and WNT signaling in the rectal muco-sa，and the response to supplementation with dietary fiber J CancerPrev es(Phila)，2020;14(3):337-467Solmaz S，Behzad M，Ali M，et al mi-330 regulates colorectal canceroncogenesis by targeting BACH1 J Adv Pharm Bull，2020;10(3):444-518Hong M，Li S，Tan HY，et al Current status of herbal medicines inchronic liver disease therapy:the biological effects，molecular targetsand future prospects J Int J Mol Sci，2015;16(12):28705-459Qi J，Yu J，Li Y，et al Alternating consumption of beta-glucan andquercetin reduces mortality in mice with colorectal cancer J FoodSci Nutr，2019;7(10):3273-85.10Gibellini L，Pinti M，Nasi M，et al A.Cossarizza，quercetin and canc-er chemopreventionJ Evid Based Complement Alternat Med，2011;2011:59135611Chen X，Dong XS，Gao HY，et al Suppression of HSP27 increasesthe antitumor effects of quercetin in human leukemia U937 cellsJ Mol Med ep，2016;13(1):689-9612Hoca M，Becer E，Kabadayi H，et al The effect of resveratrol andquercetin on epithelial-mesenchymal transition in pancreatic cancerstem cell J Nutr Cancer，2020;72(7):1231-4213Chen，Alvero AB，Silasi DA，et al.Cancers take their toll-the func-tion and regulation of toll-like receptors in cancer cells J Onco-gene，2008;27:225-3314Szajnik M，Szczepanski MJ，Czystowska M，et al TL4 signaling in-duced by lipopolysaccharide orpaclitaxel regulates tumor survival andchemoresistance in ovarian cancerJ Oncogene，2009;28:4353-6315Zhu G，Cheng Z，Lin C，et al MyD88 regulates LPS-induced NF-B/MAPK cytokines and promotes inflammation and malignancy in colo-rectal cancer cells J Cancer Genomics Proteomics，2019;16(6):409-1916Li Y，Lin Z，Chen B，et al Ezrin/NF-B activation regulates epithe-lial-mesenchymal transition induced by EGF and promotes metastasisof colorectal cancer J Biomed Pharmacother，2017;92:140-8.2021-11-27 修回(编辑杜娟)白藜芦醇激活 PI3K/Akt 信号通路与老年缺血性脑卒中大鼠血清 IL-6、IL-1 含量的分子机制王瑜梁超王宝爱徐玉婷(海口市中医医院，海南海口570216)摘要 目的探讨白藜芦醇通过激活磷脂酰肌醇-3 激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(Akt)信号通路调控老年脑缺血卒中大鼠血清白细胞介素(IL)-6、IL-1 含量的分子机制。方法21 月龄雄性老年 SD 大鼠构建老年缺血性脑卒中大鼠模型，用白藜芦醇25 mg/(kgd)处理。36 只大鼠分为 Control 组(正常大鼠)、大脑中动物闭塞(MCAO)组、白藜芦醇组各12 只。2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评价脑梗死体积，进行一般神经系统行为学评分，观察模型构建情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测老年缺血性脑卒中大鼠血清 IL-6 和 IL-1 表达水平;TUNEL 染色观察老年缺血性脑卒中脑组织凋亡水平，Western 印迹检测 PI3K、p-PI3K、Akt 和 p-Akt 蛋白水平。结果与 Control 组相比，MCAO 组脑梗死面积显著增多，神经行为学评分明显升高，血清中 IL-6 和 IL-1 表达水平明显升高，脑组织凋亡水平明显升高及脑组织 PI3K、p-PI3K、Akt 和 p-Akt 的表达水平明显降低(均 P0.05);与 MCAO 组相比，白藜芦醇组脑梗死面积明显降低，神经行为学评分明显降低，血清 IL-6 和 IL-1 表达水平明显降低，脑组织凋亡水平明显降低及脑组织 PI3K、p-PI3K、Akt 和 p-Akt 表达水平明显升高(均 P0.05)。结论白藜芦醇可以通过激活 PI3K/Akt 信号通路抑制老年缺血性脑卒中大鼠血清 IL-6、IL-1 含量，改善神经学功能。关键词 白藜芦醇;磷脂酰肌醇-3 激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(Akt)信号通路;缺血性脑卒中;白细胞介素(IL)-6;IL-1中图分类号 285.5 文献标识码 A 文章编号 1005-9202(2023)03-0656-05;doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2023.03.038基金项目:海南省自然科学基金项目(No 20158371)通信作者:梁超(1984-)，女，副主任医师，主要从事针灸康复研究。第一作者:王瑜(1985-)，女，主治医师，主要从事神经内科研究。缺血性脑卒中的发病率和死亡率很高，危及人类健康，是全球性的公共卫生问题。根据美国心脏协会发布的统计数据，每年在美国大约有 795 000例患者被诊断出患有新发或复发性脑卒中。平均而言，每 40 s 就有 1 例患者被诊断为脑卒中，每 4 min就有 1 例患者死于该病。脑卒中的死亡率为 60%，而缺血性脑卒中约占所有脑卒中病例的 87%1。在老年人群体中，脑缺血卒中给患者造成的影响是巨大的。越来越多的证据表明，脑卒中发作可以触发中枢神经系统(CNS)和全身免疫系统内的炎症级联反应，这是缺血性脑卒中病理进展的关键因素2。磷脂酰肌醇-3 激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(Akt)信号通路在细胞增殖、炎症、分化和细胞凋亡656中国老年学杂志 2023 年 2 月第 43 卷过程中发挥着重要作用 3。减少脑缺血性脑卒中的细胞凋亡和炎症反应对于缺血性脑卒中的改善和治疗可能至关重要。有研究表明 PI3K/Akt 信号通路的激活与缺血/再灌注损伤的保护有关4。白藜芦醇是一种在葡萄、浆果、花生和其他植物中发现的天然多酚，由于其在许多疾病中作为预防和治疗剂的潜在用途而受到广泛关注5。研究发现白藜芦醇可通过抑制神经炎症来调节血浆和肠黏膜细胞因子 包括白细胞介素(IL)-10 和 IL-17A 的水平对急性脑卒中发挥保护作用6。有研究表明，白藜芦醇可通过激活 PI3K/Akt 信号通路抑制骨关节炎相关炎症的发展7。本研究探讨白藜芦醇激活 PI3K/Akt 信号通路抑制血清中炎症因子 IL-6 和 IL-1 的分子机制。1材料和方法1.1实验细胞株和主要试剂21 月龄雄性 SD 大鼠均购买于上海医药工业研究院;2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色液(1%，BP-DL511，南京森贝伽生物科技有限公司);TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(C1088，碧 云 天);IL-6 酶 联 免 疫 吸 附 试 验(ELISA)试剂盒(ab178013)、IL-1 ELISA 试剂盒(ab214025)、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt 抗体、二抗山羊抗兔 IgG 均购自 Abcam 公司。1.2缺血性脑卒中大鼠模型构建36 只大鼠饲养于无特殊病原体级层流架上，恒温(24 26)，恒湿(45%55%)，饲料、饮用水均经高温消毒后使用，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。分组:Control 组(正常大鼠)、大脑中动脉闭塞(MCAO)组、白藜芦醇25 mg/(kgd)处理 组各12 只，线栓法建立 MCAO 模型:大鼠用 2%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉固定，自颈部行1 cm长切口，暴露左颈总动脉、颈外动脉及颈内动脉，结扎颈总动脉近心端和颈外动脉远心端;在颈总动脉上两线结间打一松结，将线栓从颈外动脉插入颈内动脉进而到达大脑中动脉(深度约 12.0 mm)，血管阻塞 1 h 后拔出线栓，缝合皮肤。Control 组只进行手术操作，不插入线栓，作为对照。整个手术过程平均 15 min 完成，术后保持大鼠体温，自由饮水、进食。1.3老年脑缺血卒中大鼠模型构建的评价TTC染色评价脑梗死体积。缺血24、48 h 后，用2%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后处死动物。快速取出脑组织，以 1 mm 的间隔进行冠状切片，用2%的 TTC 染色。梗死体积的计算方法是将所有截面的梗死面积相加，再乘以总厚度。每组取 6 只大鼠进行评估计算后取平均值。一般神经系统行为学评分。灌注后24、48 h，根据一般神经系统评分评估神经系统评分。在一般评分中，评估以下 6 项一般神经功能:头发状况(0 2 分)，耳朵位置(0 2分)，眼睛状况(0 4 分)，自发活动(0 4 分)，姿势(0 4 分)，癫痫行为(0 12 分)，每组取 6 只大鼠进行评估计算后取平均值。统计以双盲方式进行，统计人员未参加建模，不知晓分组信息。1.4ELISA术后 10 d 冰上提取 Control 组大鼠脑组织和 MCAO 组大鼠梗死周围区的皮层脑组织，按1 10 比例加入预冷的匀浆缓冲液，冰上研磨为组织匀浆后离心取上清液。采用 IL-6 和 IL-1 ELISA 试剂盒对各组大鼠脑组织培养上清炎症因子进行检测，试剂盒均购自武汉贝茵莱生物科技有限公司，按照说明书进行操作，用底物四甲基联苯胺(TMB)显色。酶标仪(BioTek，USA)测定 450 nm 波长下测定吸光光度度值，并计算炎症因子浓度。重复 3 次平行实验。1.5TUNEL 染色实验取大鼠脑组织石蜡切片，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精复水，3%H2O2溶液中室温浸泡 10