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转化医学杂志 2022年12月 第11卷 第6期Translational Medicine Journal,Vo1.11 NO.6,Dec 2022microRNA-93-5p联合在早期糖尿病肾病诊断中的研究景鑫，王德琴 缪娴静 摘要 目的 研究尿视黄醇结合蛋白(RBP)、血微小RNA-183(microRNA-183)、微小RNA-93-5p(microRNA-93-5p)联合应用在诊断早期糖尿病肾病(DN)中的价值。方法将医院2019.01-2021.01间收治的133例2型糖尿病(T2DM)患者纳为研究对象，根据其24 h尿蛋白排泄率(UAER)将其分为单纯糖尿病组(T2DM组，UAER30 mg/24 h，n=38)与早期DN组(30 mg/24 hUAER300 mg/24 h，n=46)及临床DN组（UAER300 mg/24h，n=49），并将同期50例健康体检合格者纳为对照组。检测所有被研究对象尿RBP、血microRNA-183、microRNA-93-5p水平，绘制受试者工作特征曲线(ROC)，分析尿RBP、血microRNA-183、microRNA-93-5p联合应用在诊断早期DN中的价值。结果对照组、T2DM组、早期DN组患者尿白蛋白/尿肌酐（UACR）水平均低于临床DN组。对照组、T2DM组患者UACR水平均低于早期DN组，差异均具有统计学意义（P0.05），两组尿RBP水平均低于早期DN组及临床DN组，血microRNA-183及microRNA-93-5p水平均高于早期DN组及临床DN组，且早期DN组尿RBP水平均低于临床组，血microRNA-183及microRNA-93-5p水平均高于临床DN组，差异均具有统计学意义（P0.05）。相关性分析提示，尿RBP水平与UACR水平之间呈正相关，血microRNA-183、microRNA-93-5p水平与UACR呈负相关（P0.05）。绘制ROC曲线发现，尿RBP、血microRNA-183及microRNA-93-5p在诊断早期DN中的AUC均超过0.75，其诊断价值均高于UACR，且尿RBP、血microRNA-183及microRNA-93-5p三者联合应用可有效提高各指标单独应用时的效能，提高早期DN诊断效果。结论尿RBP、血microRNA-183及microRNA-93-5p在诊断早期DN中的效能均高于UACR，三者连个应用可成为诊断早期DN的潜在指标。关键词 视黄醇结合蛋白；microRNA-183；microRNA-93-5p；早期糖尿病肾病 中图分类号 R587.2 文献标志码 A 文章编号 2095-3097（2022）06-0388-04doi:10.3969/j.issn.2095-3097.2022.06.014Combination of urinary RBP,serum microRNA-183,and serum microRNA-93-5phad a good performance in diagnosis of early-stage of diabetic nephropathyJING Xin,WANGD Deqin,MIAO Xianjing(Department of Kidney Endocrinology，Hai an City Peoples Hospital，Haian Jiangsu 226600,China）Abstract Objective To investigate the role of combination of urinary retinol-binding protein(RBP),serum microRNA-183,and serum microRNA-93-5p in diagnosis of early-stage diabetic nephropathy(DN).MethodsOne hundred and thirty-three patients with type 2 diabetes mellitus(T2DM)admitted to our hospital from January 2019 to January 2021 were included,and divided into three groups according to 24h urinary albumin excretion rate(UAER).Theywere diabetes mellitus group(T2DM group,UAER30mg/24h,n=38),early DN group(30mg/24h300 mg/24h,n=49).Meantime,another fifty healthy subjects underwent physicalexamination in our hospital during the same period were enrolled as control group.Urinary RBP,serum microRNA-183and microRNA-93-5p were detected in all subjects.Receiver operating characteristic curve(ROC)was used to evaluatethe performance of combination of urinary RBP,serum microRNA-183,and serum microRNA-93-5p in diagnosis of early-stage DN.Results The urinary albumin/urinary creatinine(UACR)levels of individuals in the control group,T2DMgroup,and early DN group were lower than those in the clinical DN group.The UACR of individucals in the controlgroup and T2DM group were lower than those in the early DN group(P0.05).Urinary RBPof control group and T2DM group was lower than that of the early DN group and clinical DN group,and serum microRNA-183 and microRNA-93-5p levels were higher than those of the early DN group and clinical DN group(P0.05).Urinary RBP level of early DN group was lower than that of the clinical DN group,and serum microRNA-183 and microRNA-93-5p levels were higher than those of the clinical DN group(P0.05).Correlation analysis showed a positive corre基金项目 江苏省卫计委面上科研项目（H2018053）作者单位 226600 江苏 海安，海安市人民医院肾脏内分泌病科（景鑫，缪娴静，王德琴）通讯作者 王德琴，E-mail: 388转化医学杂志 2022年12月 第11卷 第6期Translational Medicine Journal,Vo1.11 NO.6,Dec 2022lation between urinary RBP levels and UACR levels,and a negative correlation between serum microRNA-183,microRNA-93-5p levels and UACR(P0.05）。本 研 究 经 医 院 伦 理 委 员 会 批 准（HKL2022165），所有患者均签署知情同意书。1.2方法（1）采集被研究者 24 h 尿，日立 7600 检测尿RBP水平，所有操作均严格遵照试剂盒相关步骤进行，尿RBP参考范围：00.7 mg/mL。（2）采集被研究者外周静脉血2 mL，3000 r/min离心15 min，取上清液，检测血清microRNA-183及microRNA-93-5p水平。提取RNA及逆转录：取200L 血清，按照德国 GiaGen 公司生产的 miRNeasySerum/Plasma Kit 试剂盒相关说明进行总 RNA 提取，TaqMan MicroRNA Reverse Transcription KitcDNA 合成试剂盒(ABI 公司生产)相关标准合成cDNA，置于-80 冰箱内保存待用。采用 ABI公司生产的 TaqMan-PCR 检测试剂盒 TaqMan Universal Master Mix 检 测 血 清 microRNA-183 及microRNA-93-5p水平。microRNA-183引物上游序列：5-CCTTCACTTTCAGGGTCGAG-3，下游序列：5-CAGTTTGGGACCCCTTTACA-3。microRNA-93-5p引物上游序列：5-AGTCTCTGGCTGACTACATCACAG-3，下游序列：5-CTACTCACAAAACAGGAGTGGAATC-3。内参 U6 上游序列：5-CACGGCAAATTCAACGGCACAG-3，下游引物序列为：5-AGACACCAGTAGCATCCACGAC-3。引物均由上海生物工程有限公司合成。PCR反应总体5 L，包括1TaqMan UniversalMaster Mix、1TaqMan 探针与引物以及 15 ngcDNA，反应条件：95 预变性 30 s，95 15 s，组别T2DM组早期DN组临床DN组对照组FPn38464950男/女21/1726/2030/1931/190.6230.891年龄(岁)63.6512.1364.4310.7863.079.7964.1111.360.1310.941收缩压(mmHg)121.1513.69124.1812.69123.7414.06122.6913.330.4610.710舒张压(mmHg)80.6311.7481.4112.0582.1711.7980.9311.740.1480.931体质量指数(kg/m2)22.413.2623.043.6922.792.9622.573.040.3260.807表1 四组一般资料比较 389转化医学杂志 2022年12月 第11卷 第6期Translational Medicine Journal,Vo1.11 NO.6,Dec 202260 1 min，50个循环，每个样本 PCR 反应重复 3次，设立阳性、阴性以及空白对照，监控检测质量，U6作为内参，分析血清microRNA-183及microRNA-93-5p相对表达水平。1.3 观察指标（1）比较四组肾功能相关指标；（2）比较四组尿RBP、血清microRNA-183及microRNA-93-5p水平；（3）分析血清microRNA-183及microRNA-93-5p水平与肾功能指标之间的相关性；（4）绘制 受 试 者 工 作 特 征 曲 线(receiver operatingcharacteristic,ROC)，分析尿RBP、血清microRNA-183及microRNA-93-5p在诊断早期DN中的价值。1.4 统计学处理采用SPSS 19.0统计软件处理数据。计量资料以均数标准差(