2023年莪术挥发油含量莪术醇的分离　鉴定及含量测定范文.docx

天道酬勤 莪术挥发油含量_莪术醇的别离　鉴定及含量测定 　　摘 要：目的：研究从莪术油中提取莪术醇的方法，建立莪术醇含量分析的新方法。方法：以莪术油为原料，进行减压蒸馏，收集208~216℃的馏分经重结晶得到产品，将其和对照品作差示量热光谱、红外光谱、核磁共振和质谱比照分析确定莪术醇；用高效液相色谱法测定其含量，色谱柱为ODS柱；以乙腈∶水〔15∶85，V∶V〕为流动相；流速为1.0mL/min；检测波长为210nm；柱温为25℃；以外标两点法计算含量。结果：经差示扫描量热光谱、红外光谱、核磁共振、质谱分析鉴定提取的产物是莪术醇，高效液相分析其浓度在10~70μg/mL范围内线性关系良好，相关系数r=0.9999〔n=7〕；精密度试验RSD为0.92%〔n=6〕；平均回收率为99.86%，RSD=0.76%，含量为98.9%，RSD=0.89%〔n=3〕。日内日间差异实验RSD均小于0.78%，说明样品稳定性良好。结论：减压蒸馏法提取莪术醇的工艺流程简单，适合大规模生产，而且纯度高；高效液相色谱法测定莪术醇含量的方法简便、准确、快速，可用于莪术醇及其制剂的质量控制。� 　　关键词：莪术油；莪术醇；减压蒸馏；高效液相色谱法 　　中图分类号：R285.5文献标识码：A 　　文章编号：1673-7717(2023)05-1018-03� 　　An isolation Identification and Quantification of Curcumol 　　� 　　WANG Ting�1, LI Tie�fu�2,LIN Shao�qiang�1,YAO Chong�shun�1, LI Xiao�kun�1� 　　(1.College of Pharmacy,Wenzhou Medical College,Wenzhou 325035,Zhejiang,China;�2.College of Pharmaceutical Engineering,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,Liaoning,China) 　　Abstract:Objective：To investigate a method of isolation of curcumol form Zedoary turmeric oil,and to establish a new method to quantify the content of curcumol.Method：Zedoary turmeric oil was applied for reduced pressure distillation,and the fraction of distillate at 208~216℃ was assembled,recrysted in order to get the product. The products were identified by DSC,IR,NMR and MS in comparison with the curcumol control. The content of curcumol was determined by HPLC. The sample was separated on Diamonsil C18(5μm,200mm×4.6mm)column with the mobile phase of acetonitrile-water (15∶85,volume ratio).The detection was performed at 210nm, the flow rate was 1.0mL/min and the temperature of the column is 25℃.The contents of curcumol were calculated by external standard method. Results：The product is identified as curcumol by DSC,IR,NMR and MS spectra;the calibration curve was linear in the range of 10~70μg/mL and the correlation coefficient was 0.9999;The RSD was 0.92%〔n=7〕in the precision test;The average recovery rate and RSD were 99.86% and 0.76%(n=6),respectively.The contents of curcumol extracted from curcuma oil and RSD were 98.9% and 0.89%(n=3), respectively. The RSD of inter-day and intra-day was under 0.78% that indicated the samples were stable.Conclusion：The method used here to isolate curcumol form Zedoary turmeric oil is simple,suitable applied for large-scale production with high purity; the described HPLC method to determine the content of curcumol is simple,accurate and rapid. It may be applied for quality control in the routine analysis of curcumol and its preparation. 　　Keywords:zedoary turmeric oil;curcumol;reduced pressure distillation;HPLC 　　莪术醇〔curcumol〕又名姜黄环奥醇，为无色针状结晶，其熔点为147～142℃,比旋度〔α〕为40.8℃,折光率n25为1.482,无紫外吸收，亦无荧光发生。易溶于乙醚、氯仿，溶于乙醇，微溶于石油醚，几乎不溶于水，是莪术油中主要的有效成分之一，莪术油制剂被我国1977版药典收藏为抗癌药物，被1995版、2000版、2022版药典收藏为抗病毒药。药典收载的莪术油制剂都是以莪术醇来定量。莪术醇能抑制金黄色葡萄球菌、β-溶血性链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌等的生长[1~2]；对呼吸道合胞体病毒有直接抑制作用,对流感病毒A、A3型有直接灭活作用。另外,对其它病毒如风疹、水痘病毒有直接抑制作用,同时可能对副流感病毒、副黏病毒、柯萨奇病毒等也有抑制作用,但需要进一步验证。临床上主要用于宫颈癌的治疗,采用局部瘤体注射给药,获得了较好疗效[3~4]。 　　目前报道有柱别离法和薄层色谱法[5~6]别离莪术醇，本文采用的减压蒸馏和重结晶相结合的方法提取莪术醇还未见报道。国内外主要是用气相色谱法或高效液相色谱法测定莪术油或莪术油制剂中莪术醇的含量作为莪术油或莪术油制剂的质量标准[7~12]，但未见莪术醇质量标准的报道。本文用高效液相色谱法测定莪术醇的含量，为莪术醇及其制剂质量标准的建立提供参考，为新药莪术醇制剂的开发提供一些实验依据。� 　　1材料与仪器� 　　1.1样品与试剂 　　莪术油〔浙江天瑞药业〕，莪术醇对照品〔中国药品生物制品检定所提供，纯度为99.54%〕，乙腈及甲醇为色谱醇〔天津市康科德科技〕，硅油，石油醚，无水乙醇等试剂为分析级，高效液相色谱用的所有试剂都用微孔滤膜〔0.45μm〕滤过。� 　　1.2仪器 　　SHZ-D〔Ⅲ〕循环式真空泵，DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器，温度计〔量程为0~300℃〕，水浴装置，日立L-7100型高效液相色谱仪，日立L-7420型紫外检测器，DT-230A柱恒温箱，天美色谱工作站，FA1004N电子天平， SB5200DTD超声波清洗机。� 　　2方法与结果� 　　2.1别离　　称取一定量莪术油于圆底烧瓶中进行减压蒸馏，油浴加热，收集208~216℃馏分，将收集的馏分用石油醚少量屡次洗涤，凉干后用无水乙醇重结晶，得到的白色晶体即为产品。重复操作3次，平均收率为2.83%。� 　　2.2鉴定 　　见图1。� 　　2.3.2样品处理 　　精密称定约0.1g莪术醇样品于100mL的量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀，精密吸取5.0mL溶液于25mL量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀，得样品储藏液。� 　　2.3.3线性范围的考察 　　精密称定约0.1g莪术醇对照品于100mL的量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀，精密吸取5.0mL溶液于25mL量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀，得对照品储藏液。精密吸取对照品储藏液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL分别于10mL量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀，微孔滤膜〔0.45μm〕滤过，超声后按上述色谱条件进样分析。以对照品浓度为横坐标〔X〕，对照品峰面积为纵坐标〔Y〕，绘制工作曲线，Y=18222X-15877，对照品溶液在10~70μg/mL内呈良好的线性关系，相关系数为r=0.9999〔n=7〕。� 　　2.3.4精密度试验 　　取同一对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积，平均值为702023，RSD=0.92%。� 　　2.3.5加样回收率试验 　　吸取样品储藏液1.0mL于10mL量瓶中，共9份，分别精密参加一定量的对照品储藏液，用甲醇稀释并定容，摇匀，制成高、中、低3种质量浓度的溶液，微孔滤膜〔0.45μm〕滤过，超声后按上述色谱条件进样分析。结果见表1。� 　　精密吸取样品储藏液2.0mL于10mL量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀，微孔滤膜〔0.45μm〕滤过，超声后按上述色谱条件进样3次，取峰面积平均值，用外标两点法计算莪术醇的含量为98.9%，RSD=0.89%。� 　　2.3.7稳定性试验 见表2。� 　　精密吸取样品储藏液1.0、2.0、3.0mL分别于10mL量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀，制成高、中、低3种质量浓度的样品溶液，微孔滤膜〔0.45μm〕滤过，超声后按上述色谱条件于1天内和1周内重复进样5次，求峰面积平均值，计算日内日间差异〔n=5〕，结果见表2。� 　　3讨 论 　　莪术油是一种混合物，的成分有20多种，用柱别离和薄层别离相对减压蒸馏复杂得多，而且收率小，很难得到高纯度的样品。� 　　 提取样品经差示扫描量热光谱、红外光谱、核磁共振、质谱分析可确定为莪术醇，且与对照品的差示扫描量热光谱、红外光谱、核磁共振、质谱几乎一致，从而确认样品为莪术醇。� 　　莪术醇为半缩酮的氢化奥类化合物，能溶于甲醇，其黏度较乙醇小，因此采用甲醇做溶剂；用紫外扫描发现莪术醇最大吸收波长为202nm，而202nm处溶剂峰多，其在210nm处也有吸收，因此采用210nm为检测波长。� 　　 中国2022版药典上用莪术醇含量来控制莪术油注射剂质量[13]，含量测定采用的是紫外-可见分光光度法，但该法根据莪术醇与香草醛浓硫酸反响后的物质来测量，显色反响的温度和时间难以控制，且香草醛浓硫酸试剂本身不稳定，需临时配制，准确度和精密度都难以保证。与上述方法相比，本法较药典方法有独特优势；文献报道的还有用比色法、红外分光光度法、双波长薄层扫描法及气相色谱法，其中比色法[14]与紫外-可见分光光度法一样涉及反响；双波长薄层扫描法[15]溶媒挥散影响浓度，误差大；红外分光光度法[16]和气相色谱法[7-12]相对其他方法价格昂贵，代价高，高效液相色谱法未涉及反响，准确度和精密度容易保证，误差也小，相对红外分光光度法和气相色谱法花费小，因此，用高效液相法测定莪术醇样品的含