两种苦丁茶黄酮含量及抗氧化活性比较 生物学专业.docx

摘 要 黄酮是一类化合物的总称，它具有抑菌、抗炎、抗肿瘤、抗HIV、抗氧化、抗肿瘤等功效。在木姜子植物中，生物碱、黄酮类、甾体、木质素、内脂、挥发油等在医学研究上比较常用。 黄酮易溶于乙醇等有机溶剂，根据相似相容原理，本实验采用乙醇热回流提法提贵州遵义余庆大叶苦丁茶和遵义余庆小叶苦丁茶（leaf of chinese holly ）中的总黄酮，以芦丁为对照品，以黄酮提取率和抗氧化活性进行试验，在试验的基础上通过测出贵州遵义余庆大叶苦丁茶和小叶苦丁茶黄酮含量的以及抗氧化活性的强弱，最终通过试验比较得出贵州两种苦丁茶总黄酮含量多少以及它们抗氧化的强弱。并采用紫外-可见分光光度法测定贵州两种苦丁茶提取液中总黄酮的含量，最后采用DPPH自由基清除率实验测定黄酮的抗氧化活性。得到试验结果如下:在大叶苦丁茶黄酮提取率为1.356%，小叶苦丁茶黄酮提取率为1.235%，大叶苦丁茶抗氧化活性为75.3，小叶苦丁茶抗氧化活性为73.6 关键词：苦丁茶；回流提取，黄酮含量，抗氧化活性 ABSTRACT Flavonoids are a class of compounds, which have antibacterial, anti-inflammatory, anti-tumor, anti HIV, anti-oxidation, anti-tumor effect. In the plant, the alkaloids, flavonoids, steroids, lignin, internal fat, volatile oil and so on are commonly used in medical research. Flavonoids soluble in organic solvents such as ethanol, according to the similarity principle of compatibility, the experiment of extracting Litsea Guizhou by ethanol extraction (Litsea cubeba (Lour.) Pers) total flavonoids, rutin, the extraction rate of flavonoids as index, ethanol concentration, solid-liquid ratio, extraction temperature single factor test and extraction time as factors, the orthogonal test to investigate the effects of ethanol concentration, extraction time, extraction temperature and solid-liquid ratio on the extraction rate of flavonoids on the basis of single factor test, finally through the orthogonal test the optimum extraction conditions of total flavonoids in Guizhou sericea. UV visible spectrophotometry was used to determine the content of total flavonoids in the extract of ginger and ginger. The free radical scavenging activity of flavonoids was determined by DPPH free radical scavenging rate. The results were as follows: the optimum experimental condition was 70% ethanol as extractant, the ratio of material to liquid was l:20, and 2H was extracted at a temperature of 70 DEG C, the extraction rate was up to 1.252%, and the antioxidant activity was about 78.9. Key words: Litsea; flavonoids; reflux extraction; antioxidant activity; 目 录 1 文献综述 4 1.1概述 4 1.1.1 4 1.1.2 5 1.2研究现状 5 1.2.1 5 1.2.2 6 1.2.3 6 2 绪论 8 2.1研究目的及意义 8 2.1.1 8 2.1.2 8 2.2设计内容及思路 8 2.2.1研究内容 8 2.2.2设计思路 9 2.2.2.1原料预处理 9 2.2.2.2 9 2.2.2.3含量测定 9 3 实验部分 10 3.1实验材料 10 3.2实验仪器及主要试剂 10 3.2.1仪器设备 10 3.2.2主要实验试剂 10 3.2.3主要试剂的配制 10 3.3试验方法 11 3.3.1标准曲线的绘制 11 3.3.3.1对照品溶液的配制 11 3.3.3.2标准曲线的制备 11 3.3.2提取方法研究 11 3.3.3 11 3.3.3.1提取溶剂 11 3.3.3.2料液比 12 3.3.3.3提取温度 12 3.3.4 12 3.3.4.1提取溶剂 12 3.3.4.2料液比 12 3.3.4.3提取温度 13 3.3.5提取参数优化 13 3.3.6 13 4 结果与讨论 14 4.2提取方法研究结果 15 4.3提取影响因素研究结果 15 4.3.1不同乙醇浓度对提取过程的影响 15 4.3.2不同料液比对提取过程的影响 15 4.3.3不同提取温度对提取过程的影响 15 4.3.4提取参数优化结果 18 4.4的含量分析结果 20 5 结论 21 5.1论文取得的成果 21 5.2不足之处 21 5.3展望 21 参考文献 22 致谢 22 18 1 文献综述 1.1 苦丁茶 苦丁茶(Rubus coreanus Maq. Var. corweanus)（Rosaceae）悬钩子属（Rubus Linn）多年生灌木，是药食两用植物。苦丁茶味甘、酸、性温，富含多种营养成分，具有较高的营养价值[1]。插苦丁茶果实、根、叶均可入药，具有补肾固精、平肝明目、活血止血、祛风除湿、明目、除湿解毒等功效，主治阳痿、不孕、目生翳障、风湿痹痛、跌打损伤、骨折、月经不调等疾病。插苦丁茶中含有插苦丁茶甙[2]、覆盆子甙[3]、黄酮[4]等多种生物活性物质。黄酮类化合物具有清除血栓、降血压、降血脂、促进脑部、心脏的血液循环等功效[5]，可用于治疗冠状动脉硬化、预防血液疾病等，可抑制肿瘤、消除体内自由基延缓衰老，可作为天然色素、甜味剂等食品添加剂[6]。黄酮类化合物的提取方法主要有：有机抗氧化活性提取法、微波提取法、超声波提取法、碱性稀醇或碱性水提取法和酶法等[7-11]。微波提取法设备较贵，超声波提取法提取率相对较低，碱性稀醇或碱性水提取法影响因素较多，酶法试剂相对较贵。与其它方法相比，有机抗氧化活性回流提取法，提取率高，设备简单，试剂较便宜，影响回流提取的因素少，可操控性强，更容易实现从试验室到工厂化生产。 Lascombe等[17]在研究尿路上皮细胞肿瘤发现正常尿路上皮组织中不表达苦丁茶黄酮类活性成分，但是随着肿瘤病理分级的增高，E-cadherin表达会减少而苦丁茶黄酮类活性成分表达会增加，证实了钙黏蛋白转换在肿瘤进展过程中起关键作用，可以作为肿瘤进展及预后的一种标志物。Jaggi[18]等对44例抗氧化活性标本进行检测，结果显示苦丁茶黄酮类活性成分阳性率为45%，且肿瘤Gleason grade级别越高，苦丁茶黄酮类活性成分阳性率越高。N - cadherin 的反常表达使得它可以成为检测侵袭性抗氧化活性的生物标记物。 1.2 苦丁茶的功效 苦丁茶是具有多种保健功效的药用资源。目前人们对苦丁茶的认识还远远不够，其应用主要还停留在冲泡直饮方面，药用价值方面的利用还不够。苦丁茶中黄酮类化合物具有抗菌 、消炎、清热解毒、镇静 、利尿等作用外[7], 它是大多数氧自由基的清除剂, 对冠心病、心绞痛等疾病的治疗效果显著 。苦丁茶及其提取物具有降低血压、调节血脂、改善心脑血管的血液循环、杀菌消炎等诸多功效[8]，是一种具有良好开发利用前景的饮用植物。苦丁茶实际上是一类代茶用植物的统称，目前市场上销售的苦丁茶制成品有大叶苦丁茶和小叶苦丁茶之分，两者的原植物品种有较大差异。特别是抗自由基和抗癌 、防癌的作用 ,使黄酮类化合物的研究进入了一个新的阶段.[9]黄酮类化合物安全、无毒, 在医药 、食品加工等方面已被广泛应用。在苦丁茶植物资源、化学组成、药理作用等方面的研究已经取得了一些进展，但是在不同品种的苦丁茶化学成分对比、化学成分与药理作用的关联研究等方面的研究报导甚少[10]。黄酮类化合是广泛分布于各种植物的一类次生代谢产物，是药用植物的主要活性成分之一[11]。 苦丁茶是我国南部及西南部民间的传统饮品，具有有利祛湿、消炎退热、清心明目、提神醒脑的功效[8]。苦丁茶的植物来源可以分为冬青科冬青属（Ilex）和木犀科女贞属（ ），其中冬青属的植物有冬青Nex kudingcha C. J. Tseng、大叶冬青I. latifolia Thunb、枸骨I. cornuta Lindl. et part.等[12]。而木犀科来源的苦丁茶多见于我国南部及西南部地区，原植物有紫茎L.purpurascens Y. C.Yang、丽叶女贞、女贞、粗壮女贞.等[13]。经学者考证，贵州产苦丁茶的原植物以女贞属植物粗壮女贞为主[14]。苦丁茶中含有萜类、黄酮类、多酚类、苯丙素类、挥发油等多种化学成分[15]。黄酮类物质是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，具有多种生物活性功能，如抗氧化、抗菌抗炎、抗病毒、抗过敏、以及血管舒张作用，还具有抑制脂质过氧化等作用[16]。由于黄酮类化合物种类繁多且结构复杂，并具有抗菌消炎、抗氧化、消除人体自由基、抗癌、调节心血管系统、内分泌系统、免疫系统等多种明确的药理作用，一直以来都是国内外研究的热点。 1.3苦丁茶中黄酮 苦丁茶中包括黄酮苷和苷元的总黄酮已成为判定苦丁茶产品质量的标志性物质。由于苦丁茶日常主要用水泡服, 苦丁茶水泡液中的黄酮应以亲水性黄酮苷为主, 但目前常用于提取苦丁茶总黄酮的方法为95%乙醇回流提取2次[17] , 得到总黄酮后，计算出两种苦丁茶总黄酮含量，比较它们黄酮含量差异，用DPPH法测定两种苦丁茶中总黄酮的抗氧化活性得到结论。 研究同时发现，采用现行的黄酮含量分析方法，贵州大叶苦丁茶叶中的黄酮含量比贵州小叶苦丁茶含量多，差距不是太大[18]。产生这种差别的原因尚有待深入研究，但作者推测，产生的主要原因是品种的差异，本实验中，采用紫外分光光度法分析苦丁茶中的黄酮含量虽然比较简便，但是，容易带来分析误差的因素很多，如标准对照品的选择、样品的前处理、苦丁茶叶中其他成分的干扰等。所以，苦丁茶中黄酮含量的测定方法尚有待进一步研究。 目前对贵州两种苦丁茶中总黄酮含量及抗氧化活性比较研究比较少，吕雨晴，许海单，鲍洁以艺福堂大叶苦丁茶（杭州产）分别采用超声提取法，微波辅助提取法，索氏提取法，