2023年栾树花微波萃取黄酮类化合物极其抗氧化性能的研究.doc

分类号： 学校代码：11460 学 号：06410318 南京晓庄学院本科生毕业论文 栾树花微波萃取黄酮化合物极其抗氧化性能的研究 所在院(系)：生物化工与环境工程学院 学生姓名： 朱明娟 指导老师：胡应杰 研究起止日期：二○○九年十月 至 二○一○年五月 二○一○年五月 学位论文独创性声明 本人郑重声明： 1. 坚持以“求实、创新〞的科学精神从事研究工作。 2. 本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果。 3. 本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。 4. 本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。 其他同志对本研究所做的奉献均已在论文中作了声明并表示了谢意 作者签名： 日 期： 栾树花微波萃取黄酮化合物极其抗氧化性能的研究 朱明娟 指导老师：胡应杰 中文 本文首先以栾树花为原料详细研究了微波提取黄酮类化合物的条件，建立了最正确提取工艺，然后对栾树花黄酮类提取物的抗氧化活性进行了研究，这些都为栾树花在保健食品和中药开发与应用奠定了良好的根底。 首先采用微波提取法，研究栾树花中黄酮类黄酮类化合物的提取工艺。在提取工艺中，通过单因素试验考察了微波温度、微波时间、微波功率三个主要因素对栾树花黄酮类化合物提取效率的影响。在单因素的根底上，通过正交试验L9(34)，得到最正确提取条件为微波温度70℃，微波时间为25min，微波功率为700W。此前通过AlCl3法确定黄酮类化合物在510nm处有最大吸收波长。 然后在抗氧化实验中，通过不同浓度的VC、芦丁、硫辛酸、原花青素和栾树花黄酮乙醇提取液的复原能力比拟、对羟基自由基(.OH)的去除能力比拟、对双氧水的去除能力的比拟、以及在猪油体系中抗脂质过氧化的能力比拟。实验证明：栾树花对羟基自由基和双氧水有较强的去除能力，其去除能力随着溶液浓度的增大而增大；栾树花对多不饱和脂肪酸过氧化体系有很强的抑制作用，这种抑制作用也随着反响体系中的溶液浓度的增大而增强；从抑制猪油氧化实验看出，栾树花黄酮提取物具有较强的抗脂质过氧化的能力。 关键词：栾树花；黄酮；提取；抗氧化 目录 文献综述。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。1 1. 前言 2. 材料与方法。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。2 2.1材料 2.2仪器与试剂 2.2.1主要仪器 2.2.2主要试剂 2.3方法 2.3.1总黄酮含量的测定方法 2.3.2栾树花总黄酮的提取方法 2.3.3栾树花总黄酮抗氧化性能的研究方法 3结果与分析 3.1总黄酮测定方法的建立 3.1.1最正确吸收波长确实定 3.1.2标准曲线的建立 3.2微波萃取条件确实定 3.2.1萃取温度对总黄酮得率的影响 3.2.2微波萃取时间对总黄酮得率的影响 3.2.3微波萃取功率对总黄酮得率的影响 3.2.4总黄酮最正确萃取功率 3.3抗氧化试验 3.3.1去除羟基自由基试验 3.3.2去除双氧水试验 3.3.3抗油脂氧化试验 4讨论 5结论 致谢 参考文献 个人简介 导师简介 中文文摘 栾树花。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 黄酮类化合物是指以C6-C3-C6碳骨架为根本组成的一类化合物的总称，这类含有羊杂环的化合物多存在于高等植物和羊齿类植物中；其结构类型之多是由于其每一类别的羟基、甲基等取代基的数量和位置不同所致。黄酮类化合物通常是以游离态或与糖结合成苷的形式存在，如O-糖苷(O-glyco-sides),其苷元与糖以C-O-C方式连接，之外还发现有C-糖苷，如葛根素(puerarin)、葛根素木糖(puerarin xyloside)等。药学科研工作者长期的研究说明，黄酮类化合物具有多种多样的生理活性，并取得了许多很有价值的研究的成果，现在日益受到国内外研究人员的广泛重视。 目前对栾树花黄酮类化合物的研究还未见报道，本研究以南京晓庄学院校内种植的栾树上的栾树花为原料，提取栾树花黄酮，考察栾树花黄酮类化合物的体外抗氧化活性，为栾树花的开发与利用提供有力的理论根底和技术支持。 1.栾树花黄酮的提取工艺研究 (1)先通过不同显色法以及它们的紫外光谱特征，发现利用紫外吸收光谱测定栾树花中黄酮含量宜采用AlCl3法。在提取过程中，通过微波提取的单因素及正交试验，得到从栾树花提取黄酮的最正确微波提取条件为提取温度为70℃，提取时间为25分钟，微波功率为700W。三个因素中影响大小为。。。。。。。 2.栾树花黄酮提取物的抗氧化活性的研究 通过不同浓度的VC、硫辛酸、芦丁、叶黄素黄酮乙醇溶液的去除双氧水能力比拟、对羟基自由基去除能力的比拟以及在猪油体系中抗脂质过氧化的能力比拟。实验证明，栾树花对羟基自由基、双氧水都具有较强的去除能力，去除能力随溶液的的浓度的增大而增大。栾树花黄酮提取物对不饱和脂肪酸(PUFA)过氧化体系有很强的抑制作用，这种抑制作用随着反响体系中溶液浓度的增大而增强。从抑制猪油氧化实验可以看出，它们在猪油油样中的抗氧化能力大小为：。。。。。。。 第一章 绪论 1.1栾树花的研究概况 1.1.1栾树花简介 1.1.2栾树花的开发与利用现状 1.1.2.1栾树花在化工中的应用 1.1.2.2栾树花在农业中的应用 1.2黄酮类化合物 1.2.1黄酮类化合物根本结构和分类 黄酮类化合物(flavonoids)是自然界中广泛存在的一类天然产物。这类含有氧杂环的化合物广泛存在于高等植物体和羊齿类植物体中，它们常以游离态或与糖类合成苷的形式存在，在花、叶、果实等组织中，多为苷类，而在木质部组织中泽多为游离的苷元。 1.2.2黄酮类化合物的提取 黄酮类化合物的提取，主要是根据被提取物质的理化性质和伴生的杂质来选择适合的提取溶液，苷类等一般可用丙酮、乙醇、甲醇、水或某些极性较大的混合物。大多数苷元宜用极性较小的溶剂，如乙醚、氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂来提取，多甲氧基黄酮类苷元，甚至可用苯来提取。本实验采取无水乙醇来提取栾树花中的黄酮类化合物。 (1) 微波提取方法 利用磁控管所产生的每秒24.5亿次超高频率的快速震动，使内分子间相互碰撞、挤压利于有效成分的浸出，具有反响高效性和强选择性、提取时间短、提取效果高等优点。它是近几年来开展起来的新提取技术，受到了人们的广阔重视。例如李莉等[]在提取桑叶中黄酮化合物时比拟微波法提取桑叶总黄酮，发现微波法提取效率比非微波法高。 1.2.3黄酮类化合物含量的测定 1.2.3.1 1.3立题背景与研究内容 1.3.1立题背景 在回归自然的今天，天然抗氧化剂(Natrual Antioxidants)的研究与开发取得了前所未有的进展。近十多年来，天然抗氧化剂已从单纯作为油脂或含脂食品的抗氧化剂，开展到作为体内活性氧的去除剂，从而起到保护人体细胞免受氧化损伤，保护心脑血管循环系统，预防癌症，延缓衰老等效果。天然抗氧化剂在维持机体健康，预防诸多慢性疾病方面的角色，越来越引起国际上极大的关注。该领域的研究已成为生命及营养科学中最令人注目的热点。 栾树是 1.3.2.研究内容 (1)本研究选用了本校南京晓庄学院方山校区校内的栾树花作为提取黄酮类物质的原料，选定无水乙醇作为提取溶剂，通过铝盐显色紫外光谱扫描确立一种栾树花总黄酮含量测定的适宜的方法，并通过单因素试验和正交试验优化了栾树花中总黄酮的提取工艺; (2)以栾树花提取物为材料，进行系统体外抗氧化试验研究，考察了它对羟基自由基、双氧水的去除力，并与其他抗氧化物质进行比拟，如VC、原花青素、硫辛酸、芦丁。并研究了它们在猪油体系中抗脂质过氧化的能力。 1前言 黄酮类化合物的提取，主要是根据提取物的性质及伴存的杂质来选择适合的提取溶剂。苷类和极性较大的苷元，一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水或某些极性较大的混合溶剂进行提取[]。本研究选用了本校南京晓庄学院方山校区校内的栾树花作为黄酮类物质的原料，选定乙醇作为提取溶剂，微波萃取法具有操作简单、提取时间短,提取效率高等优点,近年来已被广泛用作天然产物的提取方法[ 紫甘薯 ] ,用微波萃取法提取栾树花黄酮类化合物尚未见文献报道.本文研究探讨了栾树花黄酮类化合物微波提取的最正确条件,同时对其提取物进行了抗氧化活性研究.在提取过程中，通过单因素试验考察了微波萃取温度、微波萃取时间、微波萃取功率3个主要因素对栾树花中黄酮类化合物提取效率的影响。在单因素实验根底上，通过正交试验L9(34),确定栾树花总黄酮提取的最正确提取工艺，旨在为栾树花总黄酮的进一步研究提供依据。 2.材料与仪器 2.1材料 栾树花，来源于本校南京晓庄学院方山校区园丁种植。 2.2仪器与试剂 2.2.1主要试剂 试剂 规格 厂家 无水乙醇 A.R. 国药集团化学试剂 亚硝酸钠 A.R. 国药集团化学试剂 硝酸铝 A.R. 上海化学试剂 氢氧化钠 A.R. 上海化学试剂 芦丁标准样品 G.R. 中国药品生物制品检定所 2.2.2主要仪器 仪器 型号 厂家 电子天平 分光光度计 微波萃取仪 2.3试验方法 2.3.1总黄酮含量的测定方法 2.3.1.1标准溶液的制备 参考高丽威等[紫心甘薯]的方法，精密称取芦丁标准品20. 0 mg ,置于100 mL 容量瓶中,加60 %的乙醇溶解,定容至刻度,摇匀,即得浓度为0. 2 mg·mL - 1 的标准品储藏液. 2.3.1.2测定波长确实定 参考唐玉莲〔2023〕的方法，准确移取2.3.1.1配制的标准溶液0.0ml、2.0ml于25ml容量瓶中，各加60%乙醇至5ml，然后加10%亚硝酸钠溶液0.7ml，混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液0.7ml，摇匀，放置6min，再加8%氢氧化钠试液5ml，最后用60%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，放置15min，以第一瓶为空白，测定第二瓶在410-550nm波长范围内的吸光度，寻找最正确吸收波长。 2.3.1.3标准曲线的制备 参考苏东林(2023),赵亮(2023)的方法并加以改良