血脂及血浆脂蛋白检验.ppt

第一节第一节 概述概述 第二节第二节 血清总胆固醇测定血清总胆固醇测定 第三节第三节 血清三脂酰甘油测定血清三脂酰甘油测定 第四节第四节 血清高密度脂蛋白胆固醇测定血清高密度脂蛋白胆固醇测定 第五节第五节 血清低密度脂蛋白胆固醇测定血清低密度脂蛋白胆固醇测定 第六节第六节 血清载脂蛋白血清载脂蛋白A1A1和和B B测定测定 第七节第七节 血清脂蛋白电泳分析血清脂蛋白电泳分析 第八节第八节 血清脂蛋白（血清脂蛋白（a a）测定）测定 本章内容概要本章内容概要 血脂及血浆脂蛋白血脂及血浆脂蛋白 脂蛋白代谢紊乱脂蛋白代谢紊乱 一、血脂及血浆脂蛋白一、血脂及血浆脂蛋白 血脂：是指血浆中脂类的总称。属于中性脂肪（甘油三酯和胆固醇）和类脂（磷脂、糖脂、固醇、类固醇）的总称 定义：定义：脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质 与蛋白质结合成脂蛋白的形式存在。（一）血浆脂蛋白的分类（一）血浆脂蛋白的分类 超速离心法：超速离心法：根据脂蛋白在一定根据脂蛋白在一定密度密度的介质中漂浮的介质中漂浮 速率不同而进行分离的方法。速率不同而进行分离的方法。电泳分离法：电泳分离法：根据不同密度的脂蛋白所含蛋白质的根据不同密度的脂蛋白所含蛋白质的 表面表面电荷电荷不同，利用电泳将其分离，不同，利用电泳将其分离，并与血浆蛋白质的迁移率比较以判断并与血浆蛋白质的迁移率比较以判断 其部位。其部位。分离方法分离方法 超速离心法：超速离心法：乳糜微粒乳糜微粒（chylomicron,chylomicron,CMCM）极低密度脂蛋白极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein,very low density lipoprotein,VLDLVLDL）中间密度脂蛋白（中间密度脂蛋白（intermediate density lipoprotein,intermediate density lipoprotein,IDLIDL）低密度脂蛋白低密度脂蛋白（low density lipoproteinlow density lipoprotein，LDLLDL）高密度脂蛋白高密度脂蛋白（high density lipoproteinhigh density lipoprotein，HDLHDL）脂蛋白（脂蛋白（a a）（lipoprotein(a),lipoprotein(a),Lp(a)Lp(a)）乳糜微粒、前乳糜微粒、前-、和和 四条脂蛋白区带四条脂蛋白区带 电泳法电泳法 （二）血浆脂蛋白的组成（二）血浆脂蛋白的组成 组成：组成：蛋白质、三脂酰甘油、磷脂（蛋白质、三脂酰甘油、磷脂（PLPL）、游离胆固醇（）、游离胆固醇（FCFC）及胆）及胆固醇酯（固醇酯（CECE）等成分组成。）等成分组成。其中蛋白质部分称为载脂蛋白（Apo）A ApoA A A B48 ApoB 载脂蛋白（a）B100 C ApoC C C ApoD 近年来，还发现了Lp（a）脂蛋白分类 1.1.乳糜微粒乳糜微粒CM CM 颗粒最大，脂类含量高达颗粒最大，脂类含量高达98%98%，密度极低。，密度极低。由小肠粘膜细胞在由小肠粘膜细胞在吸收食物脂类吸收食物脂类（主要是甘油三酯）时合成，经乳糜导管，胸（主要是甘油三酯）时合成，经乳糜导管，胸 导管到血液。导管到血液。主要功能为运输主要功能为运输外源性外源性甘油三酯。甘油三酯。2.2.极低密度脂蛋白极低密度脂蛋白vldl vldl 主要在肝脏利用脂肪酸和葡萄糖合成。主要在肝脏利用脂肪酸和葡萄糖合成。若食物摄取过量糖或体内脂肪动用过多，均可导致血若食物摄取过量糖或体内脂肪动用过多，均可导致血vldlvldl增高。增高。vldlvldl中脂中脂 类占类占85%85%-90%90%，其密度也很低。，其密度也很低。主要功能为主要功能为vLdLvLdL是运输是运输内源性内源性甘油三酯。甘油三酯。3.3.低密度脂蛋白低密度脂蛋白LdLLdL的结构大致可分为三层：内层的结构大致可分为三层：内层 中层中层 外层外层 游离胆固醇分布于三层之中。游离胆固醇分布于三层之中。4.4.高密度脂蛋白高密度脂蛋白HBL HBL 是一组不均一的脂蛋白是一组不均一的脂蛋白 HBLHBL主要由主要由肝肝合成，合成，小肠小肠也可合成也可合成 HBLHBL按密度大小又可分为按密度大小又可分为HBL1HBL1、HBL2HBL2和和HBL3HBL3。HBL1HBL1又称为又称为HBLcHBLc，仅在摄取高胆固，仅在摄取高胆固醇醇 膳食后才在血中出现，健康人血浆中主要含膳食后才在血中出现，健康人血浆中主要含HBL2HBL2和和HBL3HBL3。HBLHBL主要是将胆固醇从肝外组织转运到肝进行代谢。主要是将胆固醇从肝外组织转运到肝进行代谢。5.5.脂蛋白（脂蛋白（a a）lp(a)lp(a)核心部分由甘油三酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯等脂核心部分由甘油三酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯等脂质质 和载脂蛋白和载脂蛋白b100b100组成，结构类似组成，结构类似LdLLdL lp(a)lp(a)含有两类载脂蛋白，即含有两类载脂蛋白，即apoB100apoB100和和apo(a)apo(a)lp(a)lp(a)是动脉粥样硬化性疾病的一项独立危险因子。是动脉粥样硬化性疾病的一项独立危险因子。（三）血浆脂蛋白的结构与功能（三）血浆脂蛋白的结构与功能 结构：结构：大致为球形颗粒，由两大部分组成 即即疏水性的内核疏水性的内核和和亲水性的外壳（图亲水性的外壳（图1010-1 1）。）。内核内核由不同量的CE与TG组成 表层表层由载脂蛋白、PL及FC组成 FC及PL的极性基团向外露在血浆中，载脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而亲水部分突出于脂蛋白颗粒的表面。血浆脂蛋白的结构与载脂蛋白的功能有密切的联系血浆脂蛋白的结构与载脂蛋白的功能有密切的联系 脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白(Apo)(Apo)载脂蛋白定义载脂蛋白定义：种类：种类：按按19721972年年AlaupovicAlaupovic建议的命名方法，用英文字母建议的命名方法，用英文字母顺序编码，分为顺序编码，分为ApoAApoA、B B、C C、D D、E E、F F、G G、H H、J J等。由等。由于氨基酸组成的差异，每一型又可分若干亚型。于氨基酸组成的差异，每一型又可分若干亚型。功能：功能：维持脂蛋白的结构 例如：例如：ApoA、ApoC、ApoE 调节脂蛋白代谢的关键酶 例如：例如：ApoA、ApoC能激活磷脂酰胆碱胆固醇脂酰基转移酶（LCAT）促进胆固醇的酯化，ApoC激活脂蛋白脂肪酶（LPL），促进 CM和VLDL中三脂酰甘油降解 识别脂蛋白受体 例如：例如：ApoE能识别肝细胞CM残余颗粒受体 ApoB100识别LDL受体 脂蛋白受体脂蛋白受体 定义：定义：脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白糖蛋白。它能以高。它能以高 度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对 脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。脂蛋白与脂蛋白受体的作用：脂蛋白与脂蛋白受体的作用：不仅是运送细胞所必需的脂蛋白，也能消除血和外周组织中不仅是运送细胞所必需的脂蛋白，也能消除血和外周组织中具有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白。具有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白。种类：种类：已有很多种，主要有已有很多种，主要有LDLLDL受体、残粒受体及清道夫受体受体、残粒受体及清道夫受体。LDLLDL受体：受体：不仅能识别ApoB100、ApoE，在细胞结合、摄取和降解LDL及其它含ApoB100的脂蛋白过程中起中介作用，对维持细胞和全身胆固醇平衡起重要作用。各种脂蛋白受体功能各种脂蛋白受体功能 残粒受体：残粒受体：能识别ApoE，是清除血液循环中CM残粒和-VLDL残粒的主要受体，它也能结合含ApoE的HDL。清道夫受体：清道夫受体：主要存在于巨噬细胞表面,介导修饰LDL(包括氧化LDL和-VLDL)从血液循环中清除。二、血浆脂蛋白代谢紊二、血浆脂蛋白代谢紊乱乱 血浆脂蛋白代谢分类血浆脂蛋白代谢分类：外源性代谢途径：外源性代谢途径：指食物中摄入的胆固醇和甘油三酯在 小肠中合成CM及CM代谢的过程。内源性代谢途径：内源性代谢途径：指肝脏合成VLDL，然后转变为IDL和LDL 并被肝脏或其它器官代谢的过程 胆固醇的逆向转运：胆固醇的逆向转运：HDLHDL参与将胆固醇从外周组织运输到肝脏的过程。参与将胆固醇从外周组织运输到肝脏的过程。脂蛋白代谢紊乱脂蛋白代谢紊乱（一）高脂蛋白血（一）高脂蛋白血症症 定义：定义：高脂血症是指血浆中胆固醇或和甘油三酯水平升高。血浆脂类以血浆脂蛋白形式存在，因此，高脂血症一定时会导致高脂蛋白血症。分型：分型：1 1表型分型法表型分型法 主要是基于各种血浆脂蛋白升高的程度不同而进行分型。该分类法不包括病因学，故称表型分类。（1）型高脂蛋白血症 又称家族性高乳糜微粒血症 （2）a型高脂白血症 （3）b型高脂蛋白血症 （4）型高脂蛋白血症 （5）型高脂蛋白血症 （6）型高脂蛋白血症 高脂蛋白血症表型分型法高脂蛋白血症表型分型法 甘油三酯及胆固醇危险水平的划分标准甘油三酯及胆固醇危险水平的划分标准 2 2按是否继发于全身性疾病分类按是否继发于全身性疾病分类 继发性高脂血症：继发性高脂血症：原发性高脂血症：原发性高脂血症：继发性者由一些全身性疾病引起血脂异常，如糖尿病、肾病综合征、肾功能衰竭、甲状腺功能减退症、肝胆疾病、系统性红斑狼疮、肥胖症、饮酒等。此外，某些药物如-受体阻断剂、降压药等也可引起血脂异常。在排除继发性高脂血症后，可诊断为原发性。已知部分原发性高脂血症由先天性基因缺陷所致 3 3高脂血症的基因分型法高脂血症的基因分型法 家族性高脂血症的临床特征家族性高脂血症的临床特征 常 用 名 基因缺陷 临床特征 表型分类 家族性高胆固醇血症 LDL受体缺陷 以胆固醇升高为主，可伴轻度甘油三酯升高，LDL明显增加，可有肌腱黄色瘤，多有冠心病和高脂血症家族史。a b 家族性Apo B100缺陷症 ApoB100缺陷 同上 同上 家族性混合型高脂血症 不清楚 胆固醇和甘油三酯均升高，VLDL和LDL都增加，无黄色瘤，家族成员中有不同型高脂蛋白血症，有冠心病家族史。b 家族性异常脂蛋白血症 ApoE异常 胆固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和VLDL残粒以及IDL明显增加，可有掌皱黄色瘤，多为Apo E2（2/2）表型。家族性高甘油三酯血症 不清楚 以甘油三酯升高为主，可有轻度胆固醇升高，VLDL明显增加。低脂蛋白血症低脂蛋白血症 1 1家族性低家族性低-脂蛋白血症脂蛋白血症 2 2-脂蛋白缺乏血症脂蛋白缺乏血症 3 3家族性低家族性低-脂蛋白血症脂蛋白血症 简介 胆固醇是人体内重要的脂类成分，具有重要的生理功能。游离胆固醇 30%血清总胆固醇（TC）胆固醇酯 70%血浆胆固醇血浆胆固醇 引起动脉粥样硬化，形成堵塞性血管疾病。血清（浆）总胆固醇测定血清（浆）总胆固醇测定 一、比色法一、比色法 二、酶法二、酶法 三、气相色谱法三、气相色谱法 四、高效液相色谱法四、高效液相色谱法 五、同位素五、同位素-稀释质谱法稀释质谱法 酶测定法酶测定法 特点：特点：常规测定中现已广泛应用酶法，酶法具有特异性好，精密度和灵敏度。由于操作简便，试剂无腐蚀性，特别适用于自动生化分析，目前已成为测定胆固醇的主要方法。原理原理 胆固醇酯H2O 胆固醇游离脂肪酸 胆固醇O2 胆烷-4-烯-3-酮H2O2 H2O24氨基安替比林酚 醌亚胺4H2O CEHCOD POD试剂与器材 1、酶应用液 2、参考血清 3、器材 试管、刻度吸管、微量加样器、分光光度计、恒温水浴箱 实验操作 取3支试管，按下表操作 加入物（ml）测定管 标准管 空白管 待测血清 0.02 参考血清 0.02 蒸馏水-0.02 酶应用液 2.