血浆蛋白质以及非蛋白含氮化合物的代谢紊乱.ppt

第三章 血浆蛋白质以及非蛋白含氮 化合物的代谢紊乱 第一节 血浆蛋白质及其异常（一）、血浆蛋白质的功能和分类 营养作用，修补组织蛋白;维持血浆胶体渗透压；作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、药物等的载体；作为PH缓冲系统的一部分；抑制组织蛋白酶；一些酶在血浆中起催化作用；代谢调控作用；参与凝血与纤维蛋白溶解；作为免疫球蛋白与补体等免疫分子，组成体液免疫防御系统。（二）、血浆蛋白质的分类 最简单的是将血浆蛋白质分为清蛋白和球蛋白两大类，目前仍较实用的是通过乙酸纤维素薄膜电泳或琼脂糖凝胶电泳获得血浆蛋白质概貌的图谱。1.电泳分类法：利用乙酸纤维素薄膜电泳将血浆蛋白质分为清蛋白和1、2、球蛋白5个主要区带。2.功能分类法 二、血清蛋白质电泳组分的临床分析（一）血清蛋白质电泳的正常组分 清蛋白 1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白 用乙酸纤维素薄膜电泳测得血清各区带蛋白质的参考值为清蛋白（Alb）：5768、1球蛋白：1.05.7、2球蛋白：4.911.2、球蛋白：713%、球蛋白：9.818.2。若以g/L表示，则Alb和1、2、球蛋白分别为3552g/L、1.0 4.0g/L、4.0 8.0g/L、5.010.0g/L、6.013.0g/L。（二）异常电泳图谱的临床意义 异常血清蛋白电泳图谱分型 在疾病情况下血清蛋白质可以出现多种变化。根据它们在电泳图谱上的异常特征，不少学者将其进行分型，使其有助于临床疾病的判断。典型异常血清蛋白电泳图谱 在以上异常电泳图谱中，肾病综合征、肝硬化和多发性骨髓瘤(M蛋白血症型)最具有特征性，在临床上诊断意义最大。三、血浆蛋白质及其异常 1.前清蛋白（PA）生理功能：作为组织修补材料和运载蛋白，可结合大约10%的T4和T3，对T3亲和力更大，还具有运载维生素A的作用。临床意义 作为营养不良的指标。作为肝功能不全的指标。在急性炎症、恶性肿瘤、创伤等任何急需合成蛋白质的情况下，血清PA均迅速下降，PA是负性急性时相反应蛋白。2.清蛋白（ALB）生理功能 （1）血浆中主要的载体蛋白 （2）维持血浆胶体渗透压 （3）具有缓冲酸碱的能力 （4）重要的营养蛋白 临床意义（1）低清蛋白血症常见于以下疾病：1）清蛋白合成不足 2）清蛋白丢失清蛋白丢失 3）清蛋白分解代谢增加 4）清蛋白的分布异常 5）无清蛋白血症 （2）血浆清蛋白增高（3）由清蛋白含量估计其配体的存在形式和作用（4）作为个体营养状态的评价指标：血浆清蛋白作为营养指标的评价标准：35g/L正常，28-34g/L轻度缺乏，21-27g/L中度缺乏，21g/L严重缺乏。当清蛋白浓度低于28g/L时，会出现水肿。3.1-抗胰蛋白酶（AAT）生理功能：是蛋白酶的抑制物，含量虽比另一蛋白酶抑制物2-巨球蛋白低，但AAT占血清中抑制蛋白酶活力的90%左右。临床意义 AAT缺陷：ZZ表型、SS型甚至 MS表型常伴有早年(20-30岁)出现的肺气肿。急性时相反应时AAT增加。4.1-酸性糖蛋白（AAG）生理功能：AAG是主要的急性时相反应蛋白，在急性炎症时增高，与免疫防御功能有关。临床意义 AAG目前主要作为急性时相反应的指标，在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死等炎症或组织坏死时一般增加3-4倍，3-5天时出现浓度高峰；AAG增高是活动性溃疡性结肠炎最可靠的指标之一。5.5.结合珠蛋白（结合珠蛋白（HpHp）在醋纤膜电泳及琼脂糖凝胶电泳在醋纤膜电泳及琼脂糖凝胶电泳 中位于中位于a a2 2区带。区带。5.结合珠蛋白（Hp）生理功能：Hp的主要功能是能与红细胞中释放出的游离血红蛋白结合，每分子Hp可结合两分子Hb。Hp可以防止Hb从肾丢失而为机体有效地保留铁，并能避免Hb对肾脏的损伤。临床意义：溶血性疾病如溶血性贫血、输血反应、疟疾时Hp含量明显下降。当烧伤和肾病综合征引起大量清蛋白丢失的情况下，血Hp常明显增加。在严重肝病患者Hp合成降低。6.6.2 2-巨球蛋白（巨球蛋白（AMGAMG）a a2 2巨球蛋白是血浆中分子量最巨球蛋白是血浆中分子量最 大的蛋白质大的蛋白质。a a2 2-MGMG是由肝细胞与是由肝细胞与 单核吞噬细胞系统合成。单核吞噬细胞系统合成。6.2-巨球蛋白（AMG）生理功能：AMG的主要特性是能与多种离子和分子结合，特别是能与蛋白水解酶如纤维蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶及组织蛋白酶D结合而影响这些酶的活性。临床意义：低清蛋白血症，尤其是肾病综合征时，AMG含量可显著增高，可能系一种代偿机制以保持血浆胶体渗透压。7.铜蓝蛋白（Cp）生理功能：Cp的主要生理功能与氧化还原反应有关，根据其他物质的性质，它既能起氧化作用又能起抗氧化作用。Cp的生理功能还有抑制膜脂质氧化的作用。临床意义：协助Wilson病的诊断。Cp也属于一种急性时相反应蛋白，在感染、创伤和肿瘤时血浆浓度增加。8.转铁蛋白（TRF）转铁蛋白(transferrin,TRF)分子量约79.5kD，电泳位置在区带，TRF主要由肝细胞合成，半寿期为7天。临床意义：（）用于贫血的鉴别诊断。（）TRF在急性时相反应中含量往 往降低。（）作为营养状态的一项指标，在营养不良及慢性肝脏疾病时下降。9.C-反应蛋白（CRP）在急性炎症病人血清中出现的可以结合肺炎球菌细胞壁-多糖的蛋白质，命名为C-反应蛋白（CRP）。生理功能：CRP不仅结合多种细胞、真菌及原虫等体内的多糖物质，在钙离子存在下，还可以结合卵磷脂和核酸。CRP可以引发对侵入细胞的免疫调理作用和吞噬作用，结合后的复合体具有对补体系统的激活作用，表现炎症反应。临床意义：CRP是第一个被认识的急性时相反应蛋白，作为急性时相反应一个极灵敏的指标，血浆中CRP浓度在急性心肌梗死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿癌浸润时迅速显著增高，可达正常水平的2000倍。CRP是非特异性指标，主要用于结合临床病史监测疾病。四、急性时相反应蛋白 在急性炎症性疾病如手术、创伤、心肌梗死、感染、肿瘤等，AAT、AAG、Hp、p、CRP，以及1-抗糜蛋白酶、血红素结合蛋白、C4、C3、纤维蛋白原等，这些血浆蛋白浓度显著升高或升高；而血浆 PA、ALB、TRF则出现相应的低下。这些血浆蛋白质统称为急性时相反应蛋白（APRP），这种现象称为急性时相反应。PA、ALB、TRF一般称为负性急性时相反应蛋白。急性时相反应蛋白升高的速度不同，CRP和1-抗糜蛋白酶首先升高，在1小时内AAG也升高，然后AAT、Hp、C4和纤维蛋白原升高，最后是C3和Cp升高，这些APR通常在天内达到最高值。检测APR有助于对炎症进程的监测和对治疗反应的判断，尤其是检测那些升高最早和最多的蛋白质。第二节 氨基酸代谢紊乱 一、苯丙酮酸尿症（PKU）是主要由苯丙氨酸羟化酶缺乏引起的常染色体隐性遗传病。我国新生儿PKU发病率为1/100001/16000,与国外报道的数字接近。临床表现及治疗 PKU患者有智力缺陷，其严重程度与血苯丙氨酸升高的水平和持续时间有关，可能由于苯丙氨酸与其他氨基酸竞争载体，干扰了其他氨基酸通过血-脑屏障，因氨基酸不平衡而影响了脑正常功能和发育。PKU患者还表现有毛发和皮肤色素较正常人略浅。型酪氨酸血症：是由于延胡索酰乙酰乙酸酶活性降低所致，另外，对-羟苯丙酮酸氨化酶活性也有下降。二、酪氨酸血症 型酪氨酸血症：由于肝脏胞浆酪氨酸转氨酶缺乏所致，血液酪氨酸水平增高，并从尿中排出。该症患者有流泪、惧光、角膜混浊、皮肤过度老化、智力发育不全等症状。三、含硫氨基酸代谢紊乱 含硫氨基酸代谢紊乱最多见的是同型胱氨酸尿症，该症者先是同型半胱氨酸增加，随之引起同型胱氨酸增加，因此同型半胱氨酸代谢紊乱与同型胱氨酸尿症密切相关。同型半胱氨酸代谢紊乱 目前国内外逐渐把血浆HCY水平检测作为心脑血管病临床常规检查指标。特别是对于那些血脂正常，胆固醇又不高的人群；有严重AS性疾病和家族史人群；有早期（50岁）CHD、脑血管或外周血管病症状的人群，应进行血浆HCY检测。四、继发性氨基酸代谢紊乱 继发性高氨基酸血症或氨基酸尿症主要发生在肝脏和肾脏疾患以及烧伤等，其氨基酸异常是该类患者机体物质代谢普遍异常的一部分，体液氨基酸测定对诊治有参考意义。第三节 核苷酸代谢紊乱 嘌呤核苷酸合成和分解中最多见的代谢紊乱是高尿酸血症，并由此导致痛风。嘧啶核苷酸从头合成途径中的酶缺陷可引起乳清酸尿症。一、嘌呤核苷酸代谢紊乱 高尿酸血症 高尿酸血症由嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄障碍引起。1.尿酸排泄障碍 2.尿酸生成过多 痛风发生机制 痛风是一组疾病，由于遗传性和（或）获得性的尿酸排泄减少和（或）嘌呤代谢障碍，导致高尿酸症及尿酸盐结晶形成和沉积，从而引起特征性急性关节炎、痛风石、间质性肾炎，严重者呈关节畸形及功能障碍碍；常伴尿酸性尿路结石。高尿酸血症只有10%20%发生痛风。二、嘧啶核苷酸代谢紊乱 第四节 检测方法评价 一、血清总蛋白测定 凯氏定氮法 凯氏定氮法于1883年建立，是经典的蛋白质测定方法。根据蛋白质平均含氮量16%计算蛋白浓度。该法结果准确性好，精密度高，灵敏度高，是公认的参考方法，目前用于标准蛋白质的定值和校正其他方法等。双缩脲法 该法对各种蛋白质呈色基本相同，特异性和准确度好，精密度好；显色稳定性好，试剂单一，方法简便；灵敏度虽不高，但对血清总蛋白定量较为适用。对蛋白质含量很低的其他体液如脑脊液、胸腹水和尿液等，不是合适的定量方法。酚试剂法 本法测定纯单一蛋白质较合适，如测定组织中某一蛋白抽提物；又如血清大部分蛋白经高氯酸沉淀去除后，上清夜再被磷钨酸沉淀分离得到的粘蛋白，也常用此法测定。本法易受还原性化合物的干扰。紫外分光光度法 芳香族氨基酸在280nm处有一吸收峰，可用于蛋白质测定。方法的准确性受蛋白质分子中该种氨基酸的含量影响甚大。尿酸和胆红素在280nm附近有干扰，所以不适合血清等组成复杂的蛋白质溶液测定，常用于较纯的酶、免疫球蛋白等蛋白质测定。染料结合法 在酸性环境下，蛋白质分子可解离出带有正电荷的-NH3+，它可与染料的阴离子产生颜色反应。常用的染料有氨基黑、丽春红、考马斯亮蓝、邻苯三酚红钼等。前两种常作为血清蛋白乙酸纤维素薄膜电泳或琼脂糖凝胶电泳的染料。考马斯亮蓝常用于需更高呈色灵敏度的蛋白电泳中，也可以用于测定尿液、脑脊液等的蛋白质，优点是简便、快速、灵敏，缺点是不同蛋白质与染料的结合力不一致，且试剂对比色杯有吸附作用。邻苯三酚红钼可用于测定尿液、脑脊液等蛋白质。比浊法 该法优点是操作简便、灵敏度高。缺点是影响浊度大小的因素较多，包括加入试剂的手法、混匀技术、反应温度等，且各种蛋白质形成的浊度亦有较大的差别。一般用于测定尿液、脑脊液等蛋白质浓度较低的样品，其标准品推荐使用含正常清/球蛋白比值的血清蛋白标准品作适当稀释。二、血清清蛋白测定 目前测定清蛋白的方法有电泳法、免疫法和染料结合法，电泳法已如前 述；免疫法中有免疫扩散法、免疫比 浊法和放射免疫法等，这类方法特异 性好、灵敏度高，且清蛋白易纯化因 而其抗血清容易制备，但成本较高，适合于尿液和脑脊液等微量清蛋白的 测定。染料结合法最多用，清蛋白具有与阴离子染料溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚紫(BCP)结合的特性，而球蛋白基本不结合这些染料，故可直接测定血清清蛋白。BCG法和BCP法灵敏度高、操作简便、重复性好，能自动化。其中BCG法最常用。三、血清蛋白电泳 乙酸纤维素薄膜和琼脂糖凝胶 是目前最广泛采用的两类介质。琼 脂糖凝胶分辨能力强，区带整齐，吸附小，但电渗作用稍强，易使-球蛋白区带轻微向阴极移动，也有 较广泛的应用，二者所得到的电泳 结果相似。四、其他血清蛋白质的测定 血清中的蛋白质因为都是由氨基酸组成，性质相似，故除清蛋白等少数蛋白质有某种特性可利用，因而能使用染料结合法等方法测定外，其他都需制备特异的抗血清，采用免疫化学方法测定。五、氨基酸测定 自动分析法 氨基酸的纸层析和薄层层析 氨基酸的化学法测定 氨基酸的酶法分析 小 结