血液生理试验.ppt

血液生理实验 实验实验一一 血液的组成和红细胞比容的测定血液的组成和红细胞比容的测定 实验目的实验目的 了解血液的组成，学习和掌握测定红细胞比容 方法。实验原理实验原理 血液抗凝后，经离心，将出现分层。上面无色（或淡黄色）透明的部分为血浆，下面红色部分为红细胞，在红细胞之上有一薄层灰 白 色部分为白细胞和血小板。下部压紧 的血细胞占全血的体积比称为红 细胞压积，又叫红细胞比容。若不加抗凝 剂任血液自然凝固或去纤维蛋 白，就 可区别血清、血块及纤维蛋白。实验对象实验对象 哺乳动物（种类不限）实验材料实验材料 草酸盐抗凝剂、或10 g/L肝素，75%酒精，温氏分血管，酒 精灯，离心机，天平，注射器，长针头，干棉球，带有开叉橡皮管的玻 棒，烧杯等。实验方法与步骤实验方法与步骤 1温氏分血管比容测定 草酸盐抗凝剂配成水溶液，取适量该溶液（根据取血量确定抗凝剂溶液用量，如草酸钾，每1 mL血需加1-2mg。配制10%水溶液，每管加0.1 mL则可使5-10 mL血液不凝固），放入大试管，烘干后备用。取血：可采取静脉取血或心脏取血，将血液沿大试管壁缓慢放入管内，用涂有凡仕林的大拇指堵住试管口，缓慢颠倒试管23次，让血液与抗凝剂充分混匀，并不使血细胞破碎，制成抗凝血。用带有长注针头的注射器，取抗凝血2 mL将其插入分血管的底部，缓慢放入，边放边抽出注射针头，使血液至刻度刻度10 cm10 cm处处。离心：将分血管以3000 r/min离心30 min，取出分血管，读取红细胞柱的高度，再以同样的转速离心 5 min，第二次读取红细胞柱的高度，如果读数与前次相同，表明红细胞已被压紧。该读数即为红细胞比容值红细胞比容值。例如，读数为4.2 cm，即表示100 mL血液中红细胞容积占42 mL，或者以4.2乖以10即得到红细胞比容的数值。注意事项注意事项 1选择抗凝剂必须考虑到不使红细胞变形、溶解。草酸钾使红细胞皱缩，而草酸銨使红细胞膨胀，二者配合使用可互相缓解。2血液与抗凝剂混合时应避免剧烈振动而引起红细胞破裂。3操作过程应在2小时内完成，以免溶血和水分蒸发。抗凝血加入到分血管中应避免产生气泡，影响读数的准确性。思考题思考题 1血液由哪些成分组成，各有什么生理作用。2血浆和血清有何区别，如何制备？3测定红细胞比容的实际意义是什么？实验目的实验目的 熟悉用比色法测定血红蛋白的方法。实验原理实验原理 血红蛋白测定的方法有多种，最常用而最简单的是比色比色 法法。由于血红蛋白的颜色，常随结合的氧量多少而改变，因而不利于比 色，但血红蛋白与稀盐酸作用后，能使亚铁血红素变成不易变色的棕色 的高铁血红蛋白，用水稀释后可与标准比色板比色，从而测得血红蛋白 含量。通常以每100毫升血液中血红蛋白的克数来表示。实验二实验二 血红蛋白的测定血红蛋白的测定 实验对象实验对象 哺乳动物（种类不限）实验材料实验材料 沙里血红蛋白计、抗凝血、0.1 mol/L HCl、蒸镏水、棉球等。方法及步骤方法及步骤 用滴管加56滴0.1 mol/L HCl到刻度测定管内,至管下方刻度“2”或或10%处。用血红蛋白吸管吸取血液至20 L处，用脱脂棉仔细揩去吸管外的血液。将吸血管中的血液轻轻吹到测定管底部的盐酸中，反复以上清吸吹3次，使吸管壁上的血液全部进入测定管中。在吸吹时尽量避免产生气泡在吸吹时尽量避免产生气泡,以免影响比色以免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，将血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。把比色管插入标准比色箱，使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，同时对着自然光用肉眼进行比色，直至溶液的颜色与标准比色板的颜色相同为止。读出管内液体凹面所在的刻度，可以是相对值，也可以是绝对值，可参照血红蛋白计的使用说明书。国产沙里氏血红蛋白计通常100%相当于14.5 g，如液体表面在刻度70%处，要计算其绝对克数，可用下列比例求得：x:14.5=70:100,x=10.15。注意事项注意事项 1要准确用吸血管吸取和转移20 L血液至比色测定管中，若吸入过快，有盐酸或血液被吸入采血管的乳胶头，则应将吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤过程是：先用清水将血迹洗去洗涤过程是：先用清水将血迹洗去，然后再依次吸取蒸馏水然后再依次吸取蒸馏水、95%酒酒精精、乙醚洗涤采血管乙醚洗涤采血管12次次，使采血管内干净使采血管内干净、干燥干燥。2血液和稀盐酸的作用时间不能少于10 min，不然血红蛋白不能充分变成高铁血红蛋白，使结果偏低。3比色应在散射自然光下进行，避免在黄色灯光下进行比色，以免影响结果。4加蒸馏水时，开始可以多加几滴，随后逐滴加入，并用玻棒不断混匀，以防稀释过度。实验目的实验目的 学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。实验原理实验原理 红细胞在高渗溶液内会因失去水分而皱缩；反之，在低渗溶液内，则水分进入红细胞，使红细胞膨胀。如溶液渗透压继续下降，红细胞会膨胀而破裂，并释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞膜对低渗溶液的抵抗力称为红细胞渗透脆性。实验三实验三 红细胞的脆性试验红细胞的脆性试验 实验对象实验对象 动物种类不限。实验材料实验材料 抗凝血，1%氯化钠溶液，蒸馏水，10 mL小试管，试管架，滴管，1 mL移液管。实验方法及步骤实验方法及步骤 1.先将试管分别排列在试管架上，按下表把1%NaCl，稀释成不同浓度的低渗溶液，每管溶液均为2ml。试管号试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1%NaCl 1.40 1.30 1.20 1.10 1.00 0.90 0.80 0.70 0.60 0.50 蒸馏水蒸馏水 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 NaCl 浓度浓度 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 2加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各试管中各加一滴，轻轻摇匀（用拇指堵住试管口，顺序将试管缓慢倒置二次缓慢倒置二次。3在室温下静置1 12 h2 h。4观察结果：依据各管中液体颜色和浑浊度的不同，判断红细胞溶血程度。试管内液体下层为浑浊红色，上层为无色透明，表明无红细胞破裂，未发生溶血。试管内液体下层为浑浊红色，上层出现透明红色，表示部分红细胞破裂，称为不完全溶血。试管内液体完全变成透明红色，管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。5红细胞渗透脆性范围：根据前述原理判断出开始溶血及刚开始完全溶血的试管，前者的NaCl浓度为红细胞的最小抗力，后者为红细胞的最大抗力。注意事项注意事项 小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，滴管握持角度尽可能一致。血液滴入试管后，立即轻轻混匀，避免人为溶血。配制不同浓度的NaCl溶液必须准确。NaCl溶液的浓度梯度可根据畜禽特点进行调整。