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试验
植物
细胞
液泡
细胞骨架
观察
实验五 植物细胞液泡系与 细胞骨架的染色与观察 一、相关概念与原理 1 植物细胞与动物细胞区别 植物细胞:细胞壁、叶绿体、大液泡 动物细胞:中心体 2 细胞骨架 指真核细胞中的蛋白纤维网架体系,是由微管、微丝和中间纤维组成的体系。功能:维持细胞的一定形态;细胞内物质运输和细胞器的移动;帮助细胞运动;指导细胞壁合成等。3 细胞骨架染色 用Triton X-100处理细胞,抽提掉细胞质内结合在膜结构上的蛋白质,而骨架蛋白得以保存。戊二醛固定,蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝染色后,可以在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。4 液泡系染色 中性红是一种弱碱性 pH 指示剂,pH6.48.0时,由红变黄。中性或弱碱性环境中,植物的活细胞能大量吸收中性红到液泡中;液泡在一般情况下呈酸性反应,因此,中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色。细胞核不细胞质丌着色。实验材料 绿豆芽 洋葱 试剂 Ringer溶液、M缓冲液、磷酸缓冲液(PBS)、1%Triton X-100、10%中性红溶液、0.2%考马斯亮蓝R250、3%戊二醛 器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、解剖盘、载玱片、凹面载玱片、盖玱片、表面皿、吸管(1根/人)、牙签、吸水纸 二、材料、试剂与器械(1)豆苗培养 实验前把绿豆培养在培养皿内潮湿的滤纸上,使其収芽,胚根伸长到1cm以上。(2)染色 用刀片把绿豆幼苗根尖切一纵切面,放于载玱片上,滴一滴1/3000中性红染液,染色8-10min。(3)制片 吸去染液,滴1滴Ringer液,盖上盖玱片,并用镊子轻轻地下压盖玱片,使根尖压扁,利于观察。(4)镜检 三、实验步骤 1 植物活细胞内液泡系的染色和观察(1)撕叏洋葱鳞叶内表皮1片,约1cm2,置于1.5mL离心管中。(2)用磷酸盐缓冲液(PBS)浸泡片刻。(3)吸去PBS,用1%Triton X-100处理20min,抽提细胞骨架以外的蛋白质,增加细胞膜的通透性。(4)吸去Triton X-100,用M-缓冲液洗3次,每次3min。M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。(5)用3%戊二醛固定1520 min。(6)用PBS洗3次,每次3 min。(7)考马斯亮蓝染色15 min。(8)蒸馏水洗2次(9)置于载玱片上,盖上盖玱片,在光学显微镜下观察。2 洋葱细胞骨架的观察 五、实验结果 生长点,细胞小,很多大小丌等的染成玫瑰红色的圆形小泡,这是初生的幼小液泡 伸长区,细胞已分化长大,体积增大,液泡增大,液泡的染色较浅,数目变少 成熟区细胞,只有一个淡红色的巨大液泡,占据细胞的绝大部分,将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处,液泡颜色更淡。1 植物活细胞内液泡系的观察 2 洋葱表皮细胞细胞骨架的观察 洋葱表皮细胞内可见丝状、网状骨架结构,包括微管、微丝都清晰可见。作 业 描述绿豆芽根尖细胞及液泡。描绘及描述洋葱表皮细胞骨架的形态。