血球计数板使用及相关计算.ppt

血球计数板血球计数板 使用及相关计算使用及相关计算 成成中学 张旭辉 血球计数板的使用方法步骤血球计数板的使用方法步骤 1镜检。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，镜检。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数；则需清洗，吹干后才能进行计数；2加样。将清洁干燥的血球计数板的加样。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室充满计数室，防止产生气泡，多余，防止产生气泡，多余培养液可用滤纸吸去；培养液可用滤纸吸去；3计数。稍待片刻（约计数。稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。4清洁。血球计数板使用后，用清洁。血球计数板使用后，用自来水冲洗自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，切勿用硬物洗刷，洗后洗后自行晾干自行晾干或用吹风机或用吹风机吹干吹干，或用，或用95%的乙醇、无水乙醇、的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。止。计数培养液中酵母菌种群数量的要点：计数培养液中酵母菌种群数量的要点：1每天每天同一时间同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，数酵母菌个数，并作记录，连续观察连续观察7天天。2从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡震荡几下，这样使酵母菌分布均匀，求得的培养液中的酵母菌数几下，这样使酵母菌分布均匀，求得的培养液中的酵母菌数量误差小。量误差小。3如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行液进行稀释稀释。具体方法是：摇匀试管，取。具体方法是：摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释加入成倍的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有45个酵母细胞个酵母细胞为宜。为宜。4活酵母有出芽生殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半活酵母有出芽生殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。个酵母细胞。5对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右数上线不数下线，数左线不数右线线”的原则处理，另两边不计数。”的原则处理，另两边不计数。6计数一个样品要从计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值两个计数室中计得的平均数值来计算，来计算，对每个样品可计数三次，再取其平均值。对每个样品可计数三次，再取其平均值。例例1、有关“探究培养液中酵母菌数量动态变化”的实、有关“探究培养液中酵母菌数量动态变化”的实验，正确的叙述是验，正确的叙述是 A改变培养液的改变培养液的pH值不影响值不影响K值（环境容纳量）大小值（环境容纳量）大小 B用样方法调查玻璃容器中酵母菌数量的变化用样方法调查玻璃容器中酵母菌数量的变化 C取适量培养液滴于普通载玻片后对酵母菌准确计数取适量培养液滴于普通载玻片后对酵母菌准确计数 D营养条件并非影响酵母菌种群数量变化的唯一因素营养条件并非影响酵母菌种群数量变化的唯一因素（参考答案：（参考答案：D）例例2、为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某同、为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某同学进行了如下操作。其中操作正确的有学进行了如下操作。其中操作正确的有 (填下列操作填下列操作的序号的序号)。将适量干酵母放入装有一定浓度葡萄糖溶液的锥形瓶中，将适量干酵母放入装有一定浓度葡萄糖溶液的锥形瓶中，在适宜条件下培养在适宜条件下培养 静置一段时间后，用吸管从锥形瓶中吸取培养液静置一段时间后，用吸管从锥形瓶中吸取培养液 在血球计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片在血球计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片 用滤纸吸除血球计数板边缘多余培养液用滤纸吸除血球计数板边缘多余培养液 将计数板放在载物台中央，待酵母菌沉降到计数室底部，将计数板放在载物台中央，待酵母菌沉降到计数室底部，在显微镜下观察、计数在显微镜下观察、计数 参考答案：参考答案：例例3、（、（2008江苏高考江苏高考31）（4）在探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化整个）在探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原液计数的实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原液计数的做法是错误的，正确的方法是做法是错误的，正确的方法是 和和 。（5）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板的做法是错误的，正确的方法是的做法是错误的，正确的方法是 。（参考答案（参考答案（4）摇匀培养液后再取样）摇匀培养液后再取样 样液稀释后再样液稀释后再计数（计数（5）浸泡和冲洗）浸泡和冲洗）推导：推导：1mm1mm方格的计数方格的计数 1mm1mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。由于计数室厚度为0.1mm，所以计数室的总体积为0.1mm3。11625型的计数公式：酵母细胞个数酵母细胞个数1mL=100个小方格细胞总数个小方格细胞总数/100 40010000稀释倍数稀释倍数 22516型的计数公式：酵母细胞个数酵母细胞个数1mL80个小方格细胞总数个小方格细胞总数/80 40010000稀释倍数稀释倍数 假设：计数室内酵母菌为假设：计数室内酵母菌为a个，稀释倍数为个，稀释倍数为b，则，则10mL培养液培养液中酵母菌总数为：中酵母菌总数为：a105b 例例4、通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若、通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为计数室为1mm1mm0.1mm方格，由方格，由400个小方格组个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先 后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有该培养液中酵母菌总数有 个。个。（参考答案：稀释；（参考答案：稀释；2108）540010000102108。例例5、检测员将检测员将1 mL水样稀释水样稀释10倍后，用抽样检测的方法倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由液体。已知每个计数室由2516400个小格组成，容纳个小格组成，容纳液体的总体积为液体的总体积为01 mm3。现观察到图中该计数室所示现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格个中格80个个小格内共有蓝藻小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻个，则上述水样中约有蓝藻 个个mL。（参考答案：（参考答案：5n105 ）例例6、在用血球计数板（在用血球计数板（2mm2mm方格）对某一稀释方格）对某一稀释50倍样品进行计数时，发现在一个计数室内（盖玻片下倍样品进行计数时，发现在一个计数室内（盖玻片下的培养液厚度为的培养液厚度为0.1mm）酵母菌平均数为）酵母菌平均数为16个，据此估个，据此估算算10mL培养液中有酵母菌培养液中有酵母菌 个。个。（参考答案：（参考答案：2107）总结：总结：2mm2mm方格的计数方格的计数 2mm2mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。由于计数室厚度为0.1mm，所以计数区的总体积为0.4mm3。计数室通常也有两种规格：一种是1625型，另一种是2516型。假设：计数室内酵母菌为假设：计数室内酵母菌为a个，稀释倍数为个，稀释倍数为b，则，则10mL培养液中酵培养液中酵母菌总数为：母菌总数为：a/4105b 11625型的计数公式为：酵母细胞个数酵母细胞个数1mL=100个小方格细胞总数个小方格细胞总数/100 10010000稀释倍数稀释倍数 22516型的计数公式为：酵母细胞个数酵母细胞个数1mL 80个小方格细胞总数个小方格细胞总数/80 10010000稀释倍数稀释倍数 例例7、跳虫、甲螨和线虫是土壤中的主要动物类群，对动植物的分解、跳虫、甲螨和线虫是土壤中的主要动物类群，对动植物的分解起重要作用。起重要作用。请回答：请回答：（1）由于跳虫和甲螨活动能力）由于跳虫和甲螨活动能力 ，身体，身体 ，不适合用手直接捕捉，不适合用手直接捕捉，常常 采用吸虫器等进行采集。采用吸虫器等进行采集。(2)现要采集大量的跳虫用于实验室培养，最好选择下图中的吸虫现要采集大量的跳虫用于实验室培养，最好选择下图中的吸虫器器 ，理由是，理由是 。若要采集大量的甲螨作为标本保存，最好选择。若要采集大量的甲螨作为标本保存，最好选择吸虫器吸虫器 ，理由是，理由是 。（3）现在一培养罐内同时培养跳虫、甲螨和线虫三个种群，若他们）现在一培养罐内同时培养跳虫、甲螨和线虫三个种群，若他们均仅以罐内已有的酵母菌为食，则跳虫与甲螨之间的关系是均仅以罐内已有的酵母菌为食，则跳虫与甲螨之间的关系是 ，线，线虫与酵母菌之间的关系是虫与酵母菌之间的关系是 。若跳虫种群所含能量增长。若跳虫种群所含能量增长nKJ，则跳，则跳虫消耗的酵母菌所储存的能量至少为虫消耗的酵母菌所储存的能量至少为 KJ。参考答案：参考答案：（1）较强）较强 微小微小（2）B 该吸虫器中的湿棉花模拟了土壤湿润环境，该吸虫器中的湿棉花模拟了土壤湿润环境，利于跳虫存活利于跳虫存活 D 该吸虫器中的酒精可将收集的甲螨及时固定，该吸虫器中的酒精可将收集的甲螨及时固定，防止腐烂防止腐烂（3）竞争）竞争 捕食捕食 5n