血清(浆)脂类及脂蛋白测定.ppt

血清（浆）脂类及脂蛋白测定 董雷鸣 血脂的组成：甘油三酯(少量甘油二酯和甘油一酯)磷脂 胆固醇和胆固醇酯 非酯化脂肪酸（游离脂肪酸）等 血脂的运输形式脂蛋白脂蛋白 1 1、定义：定义：指指血浆脂质与载脂蛋白组成的可溶性的生物大分子。磷脂 胆固醇 载脂蛋白 甘油三酯 胆固醇酯 2 2、结构：、结构：脂蛋白微粒 表面 核心 3 3、分类、分类 (1)按密度不同 HDL LDL IDL VLDL CM(2)按电泳时区带的泳动位置不同 CM HDL VLDL LDL CM-LP 前前-LP -LP -LP 前前-LP-LP CM 临床血脂测定的常见项目：实验实验51：磷钨酸磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂镁沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇（蛋白胆固醇（HDL-C）提取HDL 测定胆固醇 实验原理：超速离心法 层析法 电泳法 沉淀法 提取HDL的方法：沉淀法原理：ApoB+多阴离子化合物 沉淀 硫酸葡聚糖-Mg2+肝素-Mn2+磷钨酸-Mg2+多阴离子（polyanion）化合物 过氧化物酶 胆固醇+O2 胆甾烯酮+H2O2 H2O2+酚+4-氨基安替比林 亚胺醌亚胺醌+H2O 胆固醇测定（酶法）：试剂：沉淀剂 酶试剂 参考血清（TC测定用的定值血清）操作步骤：取血清和沉淀剂各200l，充分混匀，置室温放置10min后，2500r/min，15min，吸取上清液按表进行操作。1、提取HDL 加入物(l)空白管 标准管 测定管 上清液 50 参考血清 50 蒸馏水 50 酶试剂 2000 2000 2000 混匀，37水浴15min；空白管调零，0.5cm比色杯，500nm比色。2、测定胆固醇 计算：参考值：HDL-C(mmol/L)测定管吸光度 标准管吸光度 =定值血清胆固醇浓度 5.17 0.92.0mmol/L 2 注意事项：1、血清标本要及时测定（在室温条件下，各型脂蛋白之间会发生脂质交换）；（游离的胆固醇会不断酯化）。2、离心过程中防止温度过高（室温1525），离心后放置时间不能过长。（温度过高使沉淀不完全）。临床意义：具有抗动脉粥样硬化作用，是冠心病的保护因素。磷酸甘油氧化法测定血清甘磷酸甘油氧化法测定血清甘油三酯（油三酯（TG）实验实验49：甘油三酯(TG)的结构：甘油三酯测定的方法：化学法 酶法 化学法（KOH）（过碘酸）皂化 氧化 抽提 甘油 甲醛 显色 甘油三酯 甘油 甲醛 变色酸 紫红色紫红色 甘油三酯 3-磷酸甘油 +ADP+ATP O2、H2O+磷酸二羟丙酮+H2O2 甘油+脂肪酸+酚、4-氨基安替比 亚胺醌亚胺醌+H2O LPL GK GPO POD 酶法（磷酸甘油氧化酶法）试剂：酶试剂 2.26mmol/L的三油酸甘油酯标准液 操作：加入物(l)空白管 标准管(2)测定管(2)上清液 20 参考血清 20 酶试剂 2000 2000 2000 37水浴10min；空白管调零，0.5cm比色杯，500nm比色。计算：TG(mmol/L)测定管吸光度 标准管吸光度 =标准液浓度 参考值：0.561.70mmol/L 2.26mmol/L 临床意义：增高:与动脉粥样硬化关系密切、家族性的脂代谢紊乱、糖尿病等。降低:营养不良、消化吸收综合征、消耗性疾病等。注意事项：标本：标本要求是餐后12-14h的空腹血液（血清TG易受饮食影响）。标本存放不宜超过3天（避免TG水解而释放出甘油）。试剂：酶试剂应4避光保存，出现红色不可再用。免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白A1和载脂蛋白B 实验实验53：抗原 抗原抗体复合物 抗体+ApoA1 ApoB ApoA1抗体 ApoB抗体 比色 原理：ApoA1 与高脂血症、冠心病呈负相关；ApoB 与高脂血症、冠心病呈正相关。临床意义：