尿液蛋白质检查简介.ppt

尿液蛋白质检查尿液蛋白质检查 一、尿液微量白蛋白的测定一、尿液微量白蛋白的测定 健康人的尿液白蛋白一般小于健康人的尿液白蛋白一般小于20mg/L,大于大于30mg/L时即提示异常。时即提示异常。定义：定义：微量白蛋白是指尿中白蛋白含量超过微量白蛋白是指尿中白蛋白含量超过 健康人水平，但常规尿蛋白试验为阴性的低健康人水平，但常规尿蛋白试验为阴性的低 浓度白蛋白。浓度白蛋白。检测方法：检测方法：染料结合法、放射免疫分析、染料结合法、放射免疫分析、酶酶 联免疫吸附、免疫比浊分析、胶体金纸片联免疫吸附、免疫比浊分析、胶体金纸片 报告方式：定时留尿法报告方式：定时留尿法（g/ml;mg/24h)晨尿法晨尿法(mg/L)随机留尿法随机留尿法(mg/mmol Cr;mg/g Cr)国际上以尿白蛋白排泄率国际上以尿白蛋白排泄率20 mg/L 或尿总蛋或尿总蛋 白白30mg/24h作为尿微量白蛋白的临界值。作为尿微量白蛋白的临界值。临床意义：临床意义：尿微量白蛋白在糖尿病肾病中的应用尿微量白蛋白在糖尿病肾病中的应用 尿微量白蛋白在心血管疾病中的应用尿微量白蛋白在心血管疾病中的应用 尿微量白蛋白在炎症方面的应用尿微量白蛋白在炎症方面的应用 其他其他 二、二、Bence-Jones protein：实质是免疫球蛋白轻链或其聚合物，单聚体分子量实质是免疫球蛋白轻链或其聚合物，单聚体分子量为为2.3万。万。凝溶蛋白：凝溶蛋白：pH4.55.5，5656条件加热出现白色混条件加热出现白色混浊及凝固，浊及凝固，100 100 煮沸以后混浊消失或明显减退，再煮沸以后混浊消失或明显减退，再冷却时又可重新凝固。冷却时又可重新凝固。蛋白电泳时可在蛋白电泳时可在2 2至至 球蛋白区带间的某个部位球蛋白区带间的某个部位出现出现M M区带。区带。检测方法：检测方法：对甲苯磺酸沉淀筛选实验：灵敏度对甲苯磺酸沉淀筛选实验：灵敏度3mg/L 热沉淀法验证热沉淀法验证 乙酸纤维素膜电泳或者聚丙烯酰胺凝胶电泳：乙酸纤维素膜电泳或者聚丙烯酰胺凝胶电泳：M带带 免疫固定电泳：区带电泳分离蛋白后，立即将浸免疫固定电泳：区带电泳分离蛋白后，立即将浸有特异抗有特异抗L链血清的薄膜条直接放到预计出现异常蛋链血清的薄膜条直接放到预计出现异常蛋白带的位置上，使之产生抗原抗体的复合物反应。白带的位置上，使之产生抗原抗体的复合物反应。免疫扩散实验：用特异的免疫扩散实验：用特异的L链血清进行免疫扩散实验。链血清进行免疫扩散实验。临床意义：临床意义：多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症 三、三、2-microglobulin 性质：一种低分子量的蛋白质（性质：一种低分子量的蛋白质（1.18万），是万），是细胞膜上完整组织相溶性抗原细胞膜上完整组织相溶性抗原HLA的一部分。的一部分。检测方法：放射免疫分析（检测方法：放射免疫分析（RIA）、）、酶免疫分酶免疫分析（析（EIA）参考值参考值:血血2-M 3.0mg/L 尿尿2-M0.2 mg/L 临床意义：肾小管疾病、血清临床意义：肾小管疾病、血清2-M异常增高异常增高 四、尿液血红蛋白、肌红蛋白及其代谢产物检查四、尿液血红蛋白、肌红蛋白及其代谢产物检查 1.hemoglobin 正常人血浆中游离血红蛋白与珠蛋白结合，以复合物正常人血浆中游离血红蛋白与珠蛋白结合，以复合物的形式运转至单核的形式运转至单核-巨噬细胞系统被代谢，不能从尿液巨噬细胞系统被代谢，不能从尿液中排出。中排出。疾病时尿液中血红蛋白有两个来源：疾病时尿液中血红蛋白有两个来源：1.发生发生血管内溶血管内溶血血，超过珠蛋白的结合能力，游离血红蛋白从尿液中，超过珠蛋白的结合能力，游离血红蛋白从尿液中排出。排出。2.尿路（尤其是上尿路）出血尿路（尤其是上尿路）出血，红细胞在，红细胞在低渗低渗或者高渗或者高渗的环境下破坏逸出的血红蛋白。的环境下破坏逸出的血红蛋白。检测方法：检测方法：试纸法：试纸法：利用血红蛋白中利用血红蛋白中亚铁血红素亚铁血红素具有具有类过氧化物类过氧化物酶酶作用，在邻联甲苯胺等供氢体存在下，使过氧化物作用，在邻联甲苯胺等供氢体存在下，使过氧化物还原为水，而邻联甲苯胺被氧化成有色物质。还原为水，而邻联甲苯胺被氧化成有色物质。免疫测定方法：免疫测定方法：利用利用抗人血红蛋白单克隆抗体抗人血红蛋白单克隆抗体 临床意义：临床意义：血管内溶血血管内溶血 泌尿道出血泌尿道出血 2.myoglobin 肌红蛋白是横纹肌、心肌细胞内的一种含亚肌红蛋白是横纹肌、心肌细胞内的一种含亚铁血红素的蛋白质，分子量小，易通过肾小球。铁血红素的蛋白质，分子量小，易通过肾小球。测定方法：测定方法：纸片法：原理与血红蛋白测定类似。纸片法：原理与血红蛋白测定类似。肌红蛋白能溶于肌红蛋白能溶于0.8饱和度的硫酸铵溶液中饱和度的硫酸铵溶液中 免疫法：利用单克隆抗体免疫法：利用单克隆抗体 ELISA、3.hemosiderin 当发生血管内溶血时，大部分血红蛋白随尿排出，其当发生血管内溶血时，大部分血红蛋白随尿排出，其中一部分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收后在肾小管上中一部分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收后在肾小管上皮细胞内分解形成血铁黄素，再随细胞脱落至尿中排出。皮细胞内分解形成血铁黄素，再随细胞脱落至尿中排出。检测方法：检测方法：Prussian反应，当尿中含有铁血黄素时，其反应，当尿中含有铁血黄素时，其中高铁离子与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下，产生蓝中高铁离子与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下，产生蓝色的亚铁氰化钾沉淀。色的亚铁氰化钾沉淀。注意事项：注意事项：1.避免铁污染；避免铁污染；2.清晨第一次尿阳性率较高清晨第一次尿阳性率较高 临床意义：临床意义：血管内溶血、行进性血红蛋白尿。血管内溶血、行进性血红蛋白尿。4.porphyrin -氨基酮戊酸、卟胆原氨基酮戊酸、卟胆原 尿卟啉尿卟啉 粪粪卟啉卟啉 原卟啉原卟啉+Fe 血红素血红素 卟啉尿是指尿中排出过多的卟啉或者其前体卟啉尿是指尿中排出过多的卟啉或者其前体 测定方法：测定方法：酸萃取后，紫外线进行检测酸萃取后，紫外线进行检测 临床意义：临床意义：先天性卟啉病、肝性卟啉病先天性卟啉病、肝性卟啉病 五、五、TammHorsfall protein TH蛋白由蛋白由Henle袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔基复合体产生，是一种肾特异性蛋白质。是构成管型基复合体产生，是一种肾特异性蛋白质。是构成管型的一种重要蛋白。的一种重要蛋白。检测方法检测方法：酶联免疫吸附法、放射免疫法：酶联免疫吸附法、放射免疫法 临床意义临床意义：协助诊断上尿路疾患：协助诊断上尿路疾患 有助于泌尿系统结石形成机制的研究。有助于泌尿系统结石形成机制的研究。六、尿液酶测定六、尿液酶测定 尿液酶的来源：尿液酶的来源：血液的酶：血液的酶：淀粉酶、溶菌酶淀粉酶、溶菌酶 肾实质的酶：肾实质的酶：肾小管刷状缘肾小管刷状缘（-GT、AAP、LAP、ALP、-GLU）、）、溶菌体溶菌体（NAG、ACP、-葡萄糖醛酸葡萄糖醛酸苷酶）、苷酶）、胞浆胞浆（LDH）及线粒体及线粒体（AST）尿路及生殖系统的酶：尿路及生殖系统的酶：前列腺前列腺（ACP、NAG）、）、精液精液（LDH、hyaluronic acid）、）、肿瘤细胞肿瘤细胞 尿液酶测定时尿液标本的处理方法：尿液酶测定时尿液标本的处理方法：尿液通常为弱酸性，且蛋白质浓度较低，不利于尿尿液通常为弱酸性，且蛋白质浓度较低，不利于尿酶活力的保存，因此必须酶活力的保存，因此必须及时测定和处理及时测定和处理。大部分尿酶活性比血浆酶活性低，在测定时适当加大部分尿酶活性比血浆酶活性低，在测定时适当加大标本用量或延长酶作用时间。大标本用量或延长酶作用时间。尿液中含有较高浓度的低分子物质，如尿素、尿酸、尿液中含有较高浓度的低分子物质，如尿素、尿酸、肌酐、硫酸盐、磷酸盐等，他们可能是某些酶的抑制肌酐、硫酸盐、磷酸盐等，他们可能是某些酶的抑制剂，因此必须对尿液标本进行预处理：剂，因此必须对尿液标本进行预处理：超滤法、透析超滤法、透析法、凝胶过滤法法、凝胶过滤法 1.N-乙酰乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-D-glucosaminidase,NAG）NAG是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，存在于所是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，存在于所有组织中，以前列腺和肾近球肾小管溶酶体含量最高。有组织中，以前列腺和肾近球肾小管溶酶体含量最高。临床应用：临床应用：各种肾脏疾病：急慢性肾功能不全、肾病综合症各种肾脏疾病：急慢性肾功能不全、肾病综合症 肾移植排斥反应：早期诊断肾移植排斥反应：早期诊断 药物性肾损害：药物性肾损害：其他系统疾病：糖尿病肾病、高血压肾病其他系统疾病：糖尿病肾病、高血压肾病 2.-葡萄糖苷酶（葡萄糖苷酶（-glucosdiase,-GLU）-GLU主要存在于主要存在于肾小管上皮细胞刷状缘，肾小管上皮细胞刷状缘，在血在血清中的含量极低，且分子量大（清中的含量极低，且分子量大（9万），不易通过肾小万），不易通过肾小球，因而尿中的球，因而尿中的-GLU主要来自肾小管上皮细胞。主要来自肾小管上皮细胞。测定：用麦芽糖做底物，经测定：用麦芽糖做底物，经-GLU的水解作用生的水解作用生成葡萄糖，再用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖的生成率。成葡萄糖，再用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖的生成率。临床意义：临床意义：肾小管损伤的敏感指标肾小管损伤的敏感指标 3.谷氨酰转移酶（谷氨酰转移酶（-glutamyl transferase，-GT）-GT广泛存在于人体各组织中，以肾、肝、胰等组广泛存在于人体各组织中，以肾、肝、胰等组织含量最高。织含量最高。尿中尿中-GT浓度较高，原尿无需预先浓缩。浓度较高，原尿无需预先浓缩。用用-谷氨酰对硝基苯胺做底物，测定游历的对硝基苯谷氨酰对硝基苯胺做底物，测定游历的对硝基苯胺量。胺量。临床意义：临床意义：-GT常作为药物性肾损害的诊断指标。常作为药物性肾损害的诊断指标。-GT在急性肾炎、肾盂肾炎、肾结石时升高在急性肾炎、肾盂肾炎、肾结石时升高 -GT在慢性肾衰、肾癌时降低。在慢性肾衰、肾癌时降低。