天道酬勤蛋白质含量测定方法【中药材中蛋白质含量测定方法的研究】近年来,随着基因工程学、分子生物学和现代别离技术的快速开展,蛋白质也成了一项质量和资源评价的指标,故探索测定蛋白质含量的方法有着重要的意义[1]。目前测定蛋白质含量的常用方法有凯氏定氮法、考马斯亮蓝法、紫外分光光度法、双缩脲法、Folin酚试剂法和双辛可宁酸法[2]等。这些方法也分别应用于测定不同中药材中蛋白质含量。1考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法是Bradford于1975年建立的一种色素结合法。其主要原理是考马斯亮蓝G250在酸性溶液中与蛋白质通过范德瓦尔引力结合形成最大吸收峰为595nm的复合物,其吸光度与蛋白质含量在200～1400μg/ml之间呈线性关系,故可用于蛋白质含量的测定[3]。赵英永[1]等探讨了考马斯亮蓝G250染色法测定草乌药材中可溶性蛋白质含量的方法,并建立了快速、灵敏的测定蛋白质的方法。由于植物粗提液中含有许多其他物质,如酚类物质、核酸等,而且蛋白质的含量比拟低,因而诸如Folin酚法,双缩脲法,紫外吸收法等的应用受到了一定的限制,而考马斯亮蓝法灵敏度高,操作简便,特异性强,快速,且不受酚类物质的影响,因而常常在植物组织粗提液中可溶性蛋白质含量的测定中被采用[4]。但是,目前还不清楚是否所有的植物蛋白质都可以用这种方法测定[5]。2凯氏定氮法凯氏定氮法[6]为经典的测定蛋白质的方法。是目前分析有机化合物含氮量常用的方法,是测定试样中总有机氮最准确的方法之一,被国际国内较多作为法定的标准检验方法[7]。周燕等[8]进行了八味沉香胶囊中总蛋白质的含量测定,结果可靠,精密度高,重现性好,可作为该品的质量控制方法。韩定献[9]等也采用此法进行了天力保胶囊中蛋白质和氨基酸的含量测定,测得蛋白质含量为23.00%。利用凯氏定氮法对金银花枝叶中蛋白质含量进行了测定,结果显示,金银花叶中的蛋白质含量与花中含量极为相近[10]。虽然,凯氏定氮法为测定含氮量抽象算蛋白质的方法,测定结果的重复性和重现性都很好。但此法操作繁琐,试剂消耗量大,消化时排放的SO2对人体健康造成直接危害,而且费时、费电、费水。3双缩脲法双缩脲法测定蛋白质含量的原理是,在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,这种紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定各种蛋白质含量[11]。汪良驹等[5]探讨了用此法测定银杏叶片可溶性蛋白质含量,结果说明双脲试剂与银杏叶片可溶性蛋白质反响迅速、稳定,适合于这种果树叶片可溶性蛋白质...
