AdvanceinApoptosisAdvanceinApoptosis研究生命活动的完整解决方案李凌BDApplicationspecialist2013.4.17细胞凋亡概述•又称为程序性细胞死亡(ProgrammedCellDeath)是机体主动的、高度有序地清除无用细胞的过程。和细胞坏死(Necrosis)相区别，坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。薄膜有小泡状形成细胞凋亡与疾病的关系5细胞凋亡事件发生表细胞膜事件线粒体事件Caspase事件细胞核事件1.细胞膜变化的检测：AnnexinV/PI磷脂酰丝氨酸(PS)的检测：早期凋亡早期凋亡PS检测及结果判定早期凋亡特征：•磷脂膜(PS)外翻，但是细胞膜保持完整性，因此PI染色为阴性•DNA没有发生断裂早期凋亡PS检测及结果判定AnnexinV-FITCPI细胞膜变化的检测：AnnexinV/PI优点：简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞样本设置：1.空白对照：辅助判断管，即不加AnnexinV/PI，但用它调电压的话，电压偏高，即根据它确定的阴阳性界限是偏低的。2.阴性对照：未诱导的，AnnexinV/PI双染，细胞绝大部分都在双阴性区域，用它来确定两荧光通道的电压，这是为了排除非特异性结合。3.单阳样本：诱导凋亡，AnnexinV单染，用来调补偿4.单阳样本：诱导凋亡，PI单染，用来调补偿注意事项：1.细胞制备或储存时细胞膜损伤，造成假阳性2.贴壁细胞消化时避免使用EDTA，螯合钙离子AnnexinV检测常见问题1.是否AnnexinVKits可以检测小鼠或其他物种?•AnnexinV试剂盒可以检测多种属2.这个试剂盒是否可用于贴壁细胞、固定或冻存的细胞、或组织?•No.上述样本的细胞细胞膜都会或多或少受到损害，这样的样本建议用免疫荧光技术(Cat.No.550911)3.是否与细胞表面标记兼容?CD11B/MAC-1LY-71•只要Ca离子不影响该表面Marker就可以同时做BDAnnexinV流式检测试剂盒KitCatno.AnnexinV:FITCApoptosisDetectionKitI556547AnnexinV:FITCApoptosisDetectionKitII-Containsunlabeledrecomb.AnnexinV556570AnnexinV:PEApoptosisDetectionKitI559763提供FITC,PE,APC,CY5,CY5.5,BDHorizonV450,BDHorizonV500等多种荧光标记的AnnexinV以及纯净的AnnexinV。2.线粒体水平的检测激活Caspase9—激活Caspase3—启动细胞凋亡•凋亡与线粒体膜电位的去极化相关•BDMitoscreen(JC-1)Cat#55130225tests•JC-1:可穿透细胞膜的亲脂性阳离子荧光素•原理：JC-1在正常细胞中以聚合体形式存在于线粒体基质上产生红色荧光（FL-2Channel）；细胞凋亡时，线粒体膜电位发生去极化，膜电位降低，JC-...
