糖化血红蛋白的标准化.ppt

三三 HbA1c的检测的检测 目录目录 HbA1c常规测定方法常规测定方法 1 HbA1c检测的标准化检测的标准化 2 HbA1c检测的规范化检测的规范化 3 HbA1c的常规测定的常规测定 4 1978年年-第一台第一台商品化仪器问世商品化仪器问世 1988年年-美国糖尿病协会（美国糖尿病协会（ADA）建议）建议：HbA1c 常规检测项目常规检测项目 目前检测方法目前检测方法 原理原理 不同方法测定糖化血红蛋白不同的组分不同方法测定糖化血红蛋白不同的组分 HbA1c 、HbA1（A1a+A1b+A1c）或总糖化血红蛋白）或总糖化血红蛋白 目前皆以目前皆以HbA1c或等同于或等同于HbA1c来报告结果来报告结果 电荷不同电荷不同 离子交换色谱法离子交换色谱法 电泳电泳 结构不同结构不同 免疫法免疫法 亲和层析法、酶法亲和层析法、酶法 HbA1c测定方法测定方法 我国（室间质评）我国（室间质评）国际（国际（CAP 能力验证）能力验证）2011年年 2008年年 2011年年 1995年年 免疫法免疫法 26%36%71%11%离子交换色谱法离子交换色谱法 53%44%28%24%亲和层析法亲和层析法 10%9%1%54%其它其它 11%11%电泳法电泳法 11%从室间质评回报统计的在不同时间使用不同的GHB测定方法的实验室比例 目录目录 HbA1c常规测定方法常规测定方法 1 HbA1c检测的标准化检测的标准化 2 HbA1c检测的规范化检测的规范化 3 标准化标准化 目的目的:实现检验结果的可比性实现检验结果的可比性是保证检验是保证检验质量手段质量手段 意义（益处）意义（益处）可以建立起普遍接受（可用）的参考区间可以建立起普遍接受（可用）的参考区间 可以合并分析、比较不同医学中心的研究资可以合并分析、比较不同医学中心的研究资料料,促进医学研究和研究成果的转化促进医学研究和研究成果的转化 能够有效地应用询证医学和检验医学实践指能够有效地应用询证医学和检验医学实践指南南 HbA1c标准化标准化 九十年代中晚期，美国糖尿病控制与并发症九十年代中晚期，美国糖尿病控制与并发症研究研究(DCCT)和英国大规模的前瞻性糖尿病研和英国大规模的前瞻性糖尿病研究究(UKPDS)的研究结果显示：强化的血糖控的研究结果显示：强化的血糖控制能显著降低糖尿病并发症的危险和进展，制能显著降低糖尿病并发症的危险和进展，强调了强调了HbA1c在糖尿病患者中血糖控制监在糖尿病患者中血糖控制监测的作用。测的作用。从那时起，大多数临床糖尿病组织都将从那时起，大多数临床糖尿病组织都将 HbA1c作为糖尿病治疗目标，作为糖尿病治疗目标，糖化血红蛋白糖化血红蛋白检测检测在世界范围内被广泛应用在世界范围内被广泛应用.1993 CAP SURVEY(mean 2SD)10 50%实验室实验室报告报告 HbA1c 21%实验室实验室报告报告HbA1 29%实验室实验室报告报告GHB 多数实验室结多数实验室结果与靶值偏倚果与靶值偏倚很大，不具有很大，不具有可比性可比性 NGSP（National Glycohemoglobin Standardisation Program：美国美国国家糖化血红蛋白标准化计划国家糖化血红蛋白标准化计划）11 美国临床化学协会（AACC）在1993年成立分委会进行GHB测定的标准化工作，使不同实验室（方法）的结果可溯源至DCCT的参考结果。标准化工作由美国国家糖化血红蛋白标准化计划（NGSP）指导委员会于1996年完成。目的：标准化糖化血红目的：标准化糖化血红蛋白检测，使临床实验蛋白检测，使临床实验室的测定结果与室的测定结果与DCCT具有可比性具有可比性 该体系在校准和规范商该体系在校准和规范商 业业化化HbA1cHbA1c检测领域发挥了极检测领域发挥了极其重要的作用。其重要的作用。NGSP对厂家方法的认证对厂家方法的认证 12 NGSP要求：生产厂家有责任确保其生产的试剂、校准品、质控要求：生产厂家有责任确保其生产的试剂、校准品、质控品、（色谱柱）所测结果与认证结果保持一致品、（色谱柱）所测结果与认证结果保持一致 认证标准：逐步提高认证标准：逐步提高 认证有效期：认证有效期：1年年 http:/www.ngsp.org/docs/methods.pdf NGSP对实验室的认证对实验室的认证 由由NGSP的二级参考实验室来对实验室进行认证工作的二级参考实验室来对实验室进行认证工作 得到认证的实验室所测结果是可靠的得到认证的实验室所测结果是可靠的 认证标准：逐步提高认证标准：逐步提高 认证有效期：认证有效期：1年年 http:/www.ngsp.org/docs/labs.pdf 我国目前有近我国目前有近20家实验室得到认证家实验室得到认证 CAP SURVEY (mean 2SD)14 7.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.020.021.0%GHB19932003Total GHBDCCTTargetHbA1HbA1c2003年，年，90%实验室以实验室以HbA1c报告结果，室间报告结果，室间CV 5%，测定值与靶值的偏倚测定值与靶值的偏倚 0.8%HbA1c IFCC国际标准化国际标准化 15 1995年年IFCC成立成立HbA1c标准化工作组，旨在建立具标准化工作组，旨在建立具有高计量学水准的参考系统，用于有高计量学水准的参考系统，用于HbA1c检测的检测的标准化和校准，标准化和校准，实现实现HbA1c测定的全球可比性测定的全球可比性 明确定义明确定义HbA1c 葡萄糖与血红蛋白葡萄糖与血红蛋白链链N末端缬氨酸残基稳定结合的化合物末端缬氨酸残基稳定结合的化合物.建立一个特异测定建立一个特异测定HbA1c的参考方法的参考方法 高效液相色谱串联质谱或高效液相色谱串联毛高效液相色谱串联质谱或高效液相色谱串联毛 细管电泳细管电泳 制备纯化的制备纯化的HbA1c和和 HbA0标准物质标准物质 建立国际参考实验室网络建立国际参考实验室网络 完成了与指定比对方法的比较工作完成了与指定比对方法的比较工作 参考方法原理参考方法原理 HbA0六肽六肽 HbA1c六肽六肽 谷氨酸内切酶谷氨酸内切酶 参考方法流程参考方法流程 17 溶血液制备溶血液制备 酶解酶解 HPLC串联毛细管串联毛细管电泳电泳 HPLC串联质谱串联质谱 IFCC结果与指定比对方法结果之间的关系结果与指定比对方法结果之间的关系 HbA1c-NGSP =0.915 HbA1c-IFCC+2.15 (r2=0.998)Clin Chem.2004,50:166-174 回归方程能够将IFCC的结果与DCCT所得出的有着重要临床意义的结果联系起来。IFCC 结果与比对方法结果的关系结果与比对方法结果的关系 19 IFCC HbA1c(mmol/mol)NGSP HbA1c (%)JDS HbA1c (%)Swedish HbA1c (%)eAG(mmol/l)42 6 5.8 50岁岁 5.3 7.0 53 7 6.6 6.13 8.6 64 8 7.7 7.2 10.2 75 9 8.7 8.3 11.8 86 10 9.7 9.4 13.4 97 11 10.7 10.5 14.9 108 12 11.7 11.6 16.5 小结小结 临床试验确立了临床试验确立了HbA1c和糖尿病并发症之间和糖尿病并发症之间的相关性，将这些试验结果统一后，的相关性，将这些试验结果统一后，NGSP非常成功地降低由于不同实验方法和不同实非常成功地降低由于不同实验方法和不同实验室所造成验室所造成HbA1c的差异。的差异。IFCC的参考方的参考方法有利于将剂量溯源升级到更高等级的参考法有利于将剂量溯源升级到更高等级的参考系统。系统。已建立起这两种单位相互转换的等式。报告已建立起这两种单位相互转换的等式。报告何种单位由各国自行决定。何种单位由各国自行决定。小结小结 HbA1c是糖尿病血糖控制的金标准，是国是糖尿病血糖控制的金标准，是国际专家委员会、际专家委员会、WHO和许多国家的糖尿病和许多国家的糖尿病诊断标准，其测定结果应该标准化诊断标准，其测定结果应该标准化 HbA1c的测定方法有多种，测定原理、组的测定方法有多种，测定原理、组分各不相同，由于分各不相同，由于IFCC及及NGSP的标准化的标准化工作，目前都以工作，目前都以HbA1c或等同于或等同于HbA1c来来报告结果报告结果 国际上存在不同的标准化组织，不同组织国际上存在不同的标准化组织，不同组织的结果数值是不同的的结果数值是不同的 目录目录 HbA1c检测的标准化检测的标准化 2 HbA1c常规测定方法常规测定方法 1 HbA1c检测的规范化检测的规范化 3 HbA1c标准化目标标准化目标 精密度：室间变异系数（精密度：室间变异系数（CV）5%只有控制室内（总）只有控制室内（总）CV3%，才可能实现室，才可能实现室间间CV5%准确度：准确度：国际糖尿病专家委员会、国际糖尿病专家委员会、ADA推推荐：荐：0.5%HbA1c 准确度建立在精密度基础上准确度建立在精密度基础上 2009年美国年美国99%溯源到溯源到DCCT/UKPDS 英国英国97%、加拿大加拿大100%室间室间CV 5%，测定值与靶值的，测定值与靶值的Bias0.3%CAP SURVEY(mean 2SD)25 2010年，年，99%实验室以实验室以HbA1c报告结果，室间报告结果，室间CV 5%，测定值与靶值的偏倚测定值与靶值的偏倚 0.8%HbA1c 国内、外变异度对比国内、外变异度对比 2626 靶值：5.4 最大值：6.3 最小值：4.6 变异系数：3.5 靶值：5.5 最大值：7.2 最小值：3.9 变异系数：8.4 1 所有仪器组 2 Abbott Architect System/Aeroset组 3 Bio-Rad HPLC组 4 TOSOH G7组 5 Drew DS5/Bio-Rad Diastat组 6 其它仪器组 7 Primus HPLC组 8 NycoCard Reader II组 9 ARKRAY HA-8160组 10 Beckman Synchron Systems组 11 Olypus AU Systems组 12 Roche COBAS,Roche/Hitachi组 13 惠中MQ-2000 我国室间质评我国室间质评 CAP能力验证能力验证 我国我国201111样本结果样本结果(mean 2SD）靶值：靶值：6.6%6.6%HbA1cHbA1c 组组 实验室数实验室数 平均值平均值 中位数中位数 标准差标准差 变异系数（变异系数（%）最大值最大值 最小值最小值 Abbott Architect Abbott Architect System/AerosetSystem/Aeroset组组 1414 6.55 6.55 6.59 6.59 0.73 0.73 11.15 11.15 7.74 7.74 5.20 5.20 BioBio-Rad HPLCRad HPLC组组 167167 6.53 6.53 6.60 6.60 0.29 0.29 4.51 4.51 7.10 7.10 5.80 5.80 TOSOH G7TOSOH G7组组 6969 6.71 6.71 6.70 6.70 0.42 0.42 6.31 6.31 8.10 8.10 5.00 5.00 Drew DS5/BioDrew DS5/Bio-Rad DiastatRad Diastat组组 2828 7.21 7.21 7.05 7.05 0.67 0.67 9.30 9.30 8.45 8.45 6.20 6.20 其它仪器组其它仪器组 5858 6.49 6.49 6.57 6.57 0.69 0.69 10.64 10.64 8.00 8.00 4.70 4.70 Primus HPLCPrimus HPLC