改良Lowry氏法测定蛋白质含量.ppt

基因时代，为生命科学提供源动力！改良改良Lowry氏法测定蛋白质含量氏法测定蛋白质含量 The Lowry Method for Protein Quantitation 基因时代，为生命科学提供源动力！目的与要求：目的与要求：掌握改良掌握改良Lowry氏法测定蛋白质含量的氏法测定蛋白质含量的原理及方法；原理及方法；了解标准曲线在物质定量测定中的应了解标准曲线在物质定量测定中的应用及绘图要点。用及绘图要点。 基因时代，为生命科学提供源动力！实验原理实验原理：在碱性条件下蛋白质的肽键与在碱性条件下蛋白质的肽键与Cu2+螯螯合，形成蛋白质合，形成蛋白质-铜复合物。（双缩脲反铜复合物。（双缩脲反应应 Biuret Reaction）蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸使酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成磷钨酸还原，生成钼蓝钼蓝-钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度成正比的关系可绘制标准曲线，测定样度成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量。（还原反应）品中蛋白质含量。（还原反应） 基因时代，为生命科学提供源动力！试剂试剂(mL)试管号试管号 0 1 2 3 4 5 测定管测定管 蛋白质标准溶液蛋白质标准溶液(0.20mg/ml)0 0.10 0.20 0.40 0.60 0.80 1 生理盐水生理盐水 1.00 0.90 0.80 0.60 0.40 0.20 0 试剂试剂A 0.90 0.90 0.90 0.90 0.90 0.90 0.90 操作步骤操作步骤 基因时代，为生命科学提供源动力！混匀后置于混匀后置于37度水浴度水浴10分钟分钟。冷却后各管加入试剂冷却后各管加入试剂B 0.1mL，室温室温放置放置10分钟分钟。各管接着加入试剂各管接着加入试剂C 3mL，立即混匀立即混匀，置置37度水浴度水浴10分钟分钟。冷却后冷却后，以以0号管为空白号管为空白，在分光光在分光光度计上以波长度计上以波长650nm比色读取光密度值比色读取光密度值。 基因时代，为生命科学提供源动力！结果与计算结果与计算：根据测定管光密度值查标准曲线，由根据测定管光密度值查标准曲线，由标准曲线计算血清蛋白质含量，再按血清标准曲线计算血清蛋白质含量，再按血清稀释倍数换算为稀释倍数换算为g/L。 基因时代，为生命科学提供源动力！注意事项注意事项：各管加酚试剂时必须快速，并立即摇各管加酚试剂时必须快速，并立即摇匀，不应出现混浊。匀，不应出现混浊。移液管使用前要看清楚刻度和是否写移液管使用前要看清楚刻度和是否写着快、吹，如有则需要用洗耳球吹出剩余着快、吹，如有则需要用洗耳球吹出剩余液体。液体。减量法可有效减少误差。减量法可有效减少误差。分光光度计使用前需预热，绝对调零分光光度计使用前需预热，绝对调零和空白管调节透光度为和空白管调节透光度为100%。