尿液蛋白质葡萄糖与酮体检测.ppt

尿液蛋白质、葡萄糖与酮尿液蛋白质、葡萄糖与酮体检测体检测 长沙医学院临检教研室 陈丽华 目的要求 掌握：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体掌握：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体Rothera改改良法。良法。熟悉：尿蛋白形成机制与分类、尿蛋白测定的质量熟悉：尿蛋白形成机制与分类、尿蛋白测定的质量控制。控制。了解：尿酮体的产生。了解：尿酮体的产生。重点：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体重点：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体Rothera改改良法。良法。难点：质量控制难点：质量控制 肾单位是肾肾单位是肾的基本功能的基本功能单位，由肾单位，由肾小体和肾小小体和肾小管组成。管组成。肾单位与集肾单位与集合管共同完合管共同完成泌尿功能。成泌尿功能。肾单位示意图肾单位示意图 肾小球滤过膜肾小球滤过膜有筛孔屏障和有筛孔屏障和电荷屏障。葡电荷屏障。葡萄糖可完全滤萄糖可完全滤过，白蛋白难过，白蛋白难于滤过。于滤过。肾小球滤过膜示意图肾小球滤过膜示意图 影响肾小球滤影响肾小球滤过的因素：过的因素：肾小球毛细血肾小球毛细血管血压。管血压。囊内压。囊内压。血浆胶体渗血浆胶体渗透压。透压。肾血流量。肾血流量。近球小管重吸收葡萄糖示意图近球小管重吸收葡萄糖示意图 重吸收葡萄糖重吸收葡萄糖的部位仅限于的部位仅限于近球小管。近近球小管。近球小管重吸收球小管重吸收葡萄糖有一定葡萄糖有一定的限度。的限度。正常情况下葡正常情况下葡萄糖被全部重萄糖被全部重吸收入血。吸收入血。Na G 脂肪酸脂肪酸 乙酰辅酶乙酰辅酶A 乙酰乙酸乙酰乙酸 丙酮丙酮 羟丁酸羟丁酸 酮体在肝细胞中的生成酮体在肝细胞中的生成 羟丁酸羟丁酸 乙酰乙酸乙酰乙酸 乙酰乙酰乙酰乙酰CoA 丙酮丙酮 自肺、自肺、肾排出肾排出 乙酰乙酰CoA 酮体的氧化示意图酮体的氧化示意图 酮体肝内生成酮体肝内生成肝外利用肝外利用 一、概述 1.历史：历史：1673年，弗雷德里克年，弗雷德里克.德克斯德克斯(Frederick Dekkers)用加热醋酸酸化尿液方法测定尿液中的蛋白。用加热醋酸酸化尿液方法测定尿液中的蛋白。1790年，弗兰西斯年，弗兰西斯.贺母（贺母（Fancis Home）用硝酸法检）用硝酸法检测水肿患者尿液中的蛋白。测水肿患者尿液中的蛋白。1827年，理查德年，理查德.伯瑞特（伯瑞特（Richard Bright）用加热的）用加热的方法检测肾病患者尿液中的蛋白方法检测肾病患者尿液中的蛋白 2.正常尿蛋白的含量和组成正常尿蛋白的含量和组成：尿蛋白总量为尿蛋白总量为30130 30130 mg/24hmg/24h，一次随机尿为，一次随机尿为080mg/L080mg/L。蛋白定性试验：阴性。蛋白定性试验：阴性。主要成分是相对分子质量小的蛋白如主要成分是相对分子质量小的蛋白如2微球蛋白、微球蛋白、2 2微球蛋白、溶菌酶等。微球蛋白、溶菌酶等。3.3.蛋白尿：蛋白尿：尿蛋白总量超过尿蛋白总量超过150mg/24h150mg/24h或或100mg/L100mg/L，蛋白定性试验：阳性。蛋白定性试验：阳性。二、病理性蛋白尿分类及原因 1、肾小球性蛋白尿：最常见、肾小球性蛋白尿：最常见（1）选择性蛋白尿：）选择性蛋白尿：当肾小球损伤较轻时当肾小球损伤较轻时,以以49万的相对分子质量中等的清蛋白为主，可伴抗凝血万的相对分子质量中等的清蛋白为主，可伴抗凝血酶、转铁蛋白、糖蛋白及少量小相对分子质量的酶、转铁蛋白、糖蛋白及少量小相对分子质量的2M、Fc片断等。片断等。Pro:+-+.Pro大于大于3.5g/24h.最典型的是肾病综合症。最典型的是肾病综合症。（2）非选择性蛋白尿）非选择性蛋白尿 反映肾小球毛细血管壁有严重破裂损伤。以分子量反映肾小球毛细血管壁有严重破裂损伤。以分子量较大和中等的蛋白质同时存在为主，较大和中等的蛋白质同时存在为主，Pro：。定量。定量0.53g/L。多见于原发或继发肾小球。多见于原发或继发肾小球疾病。疾病。2.肾小管性蛋白尿肾小管性蛋白尿:感染、中毒引起。小分子蛋白质尿，感染、中毒引起。小分子蛋白质尿，Pro：。定量。定量12g/L。常见于肾小管疾病。常见于肾小管疾病。3 3、混合性蛋白尿：、混合性蛋白尿：肾小管和肾小球同时损伤，大中肾小管和肾小球同时损伤，大中小小ProPro均增多。均增多。4 4、溢出性蛋白尿：、溢出性蛋白尿：指血液循环中，出现了以中、小指血液循环中，出现了以中、小相对分子质量为主的异常蛋白质，如：游离相对分子质量为主的异常蛋白质，如：游离HbHb、肌、肌红蛋白、溶菌酶、本周蛋白等增多，经肾小球滤出，红蛋白、溶菌酶、本周蛋白等增多，经肾小球滤出，超过了肾小管的重吸收最大能力，而大量出现在尿超过了肾小管的重吸收最大能力，而大量出现在尿中。中。Pro：。常见于。常见于MM。5、组织性蛋白尿：、组织性蛋白尿：肾组织代谢产生、组织破坏分解肾组织代谢产生、组织破坏分解的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质等。的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质等。Pro：；多为；多为TH糖蛋白糖蛋白 三、生理性蛋白尿三、生理性蛋白尿 1.1.功能性蛋白尿功能性蛋白尿：剧烈运动、发热、寒冷刺激、精：剧烈运动、发热、寒冷刺激、精神紧张、交感神经兴奋等，多见与青少年。神紧张、交感神经兴奋等，多见与青少年。2.2.体位性蛋白尿：体位性蛋白尿：又称直立性蛋白尿，特点：卧位又称直立性蛋白尿，特点：卧位时尿蛋白阴性，起床活动或久立后，尿蛋白阳性，时尿蛋白阴性，起床活动或久立后，尿蛋白阳性，平卧后又阴性。多见于发育期少年。平卧后又阴性。多见于发育期少年。3.3.偶然性蛋白尿：偶然性蛋白尿：又称假性蛋白尿，混入多量血液、又称假性蛋白尿，混入多量血液、脓液、粘液或生殖系统分泌物，如：白带、月经血、脓液、粘液或生殖系统分泌物，如：白带、月经血、精液、前列腺液等。精液、前列腺液等。尿蛋白尿蛋白 血浆蛋白血浆蛋白 组织蛋白组织蛋白 肾小球性肾小球性 肾小管性肾小管性 混合性混合性 溢出性溢出性 组织性组织性 泌尿系统、泌泌尿系统、泌尿外系统尿外系统 肾病肾病综合征、综合征、肾病性肾病性蛋白尿蛋白尿 原发、原发、继发肾继发肾小球疾小球疾病病 肾小管间肾小管间质病变、质病变、中毒性肾中毒性肾病病 浆细胞病、浆细胞病、血管内溶血管内溶血、肌肉血、肌肉损伤损伤 肾脏疾病、肾脏疾病、炎症、中炎症、中毒、泌尿毒、泌尿道结石道结石 泌尿道、泌尿道、生殖道炎症、生殖道炎症、出血、排泌出血、排泌物污染物污染 四、蛋白质定性检测方法（一）加热乙酸法（一）加热乙酸法 1.原理：原理：加热煮沸使蛋白变性、凝固，加热煮沸使蛋白变性、凝固，然后加酸使尿液然后加酸使尿液pHpH接近尿蛋白质等电点，在含有接近尿蛋白质等电点，在含有适量无机盐状况下，蛋白质更易于变性沉淀。适量无机盐状况下，蛋白质更易于变性沉淀。加酸还可溶解因加热析出的磷酸盐或碳酸盐结晶加酸还可溶解因加热析出的磷酸盐或碳酸盐结晶所致的混浊。所致的混浊。2、材料：、材料：酒精灯、试管、试管夹、滴管酒精灯、试管、试管夹、滴管 3、试剂：、试剂：醋酸醋酸（一）加热乙酸法 4.操作操作：（：（1）取大试管）取大试管1支，用试管夹夹住管底部，支，用试管夹夹住管底部，加尿液至试管加尿液至试管2/3处。处。（2）斜持试管下端，在酒精灯上加热下）斜持试管下端，在酒精灯上加热下1/3处，煮沸处，煮沸即止。即止。（3）加）加5%乙酸乙酸23滴，再煮沸后立即观察结果。滴，再煮沸后立即观察结果。（4）结果判断如下：）结果判断如下：实验结果实验结果 结果判断结果判断 相当含量（相当含量（g/L）清晰透明无清晰透明无 -0 改变改变 黑色背景下，黑色背景下，0.10.15 极轻度混浊极轻度混浊 明显白色雾状，明显白色雾状，+0.20.5 但无颗粒但无颗粒 明显混浊，明显混浊，+0.62.0 出现颗粒出现颗粒 大量絮状沉淀大量絮状沉淀 +2.05.0 但无凝块但无凝块 严重混浊，严重混浊，+5.0 有大凝块有大凝块 5.注意事项（1）操作程序要对：加热）操作程序要对：加热 加酸加酸 再加热。再加热。（2）加入醋酸量要适当，）加入醋酸量要适当，pH9或或pH9）或偏酸（）或偏酸（pH9或或pH9时，呈假阳性；时，呈假阳性；pH9 假阴性假阴性 假阴性假阴性 假阳性假阳性 pH3 假阴性假阴性 假阴性假阴性 假阴性假阴性 青霉素青霉素 假阳性假阳性 假阴性假阴性 七、临床意义 1、生理性蛋白尿、生理性蛋白尿 定性试验：不超过；定量试定性试验：不超过；定量试验：小于验：小于0。5g/L（1）功能性蛋白尿：）功能性蛋白尿：（4）偶然性蛋白尿：）偶然性蛋白尿：（2）直立性蛋白尿：）直立性蛋白尿：（5）老年性蛋白尿：）老年性蛋白尿：（3）摄入性蛋白尿：）摄入性蛋白尿：（6）妊娠性蛋白尿：）妊娠性蛋白尿：2.病理性蛋白尿（1）肾前性蛋白尿）肾前性蛋白尿：浆细胞病；血管内溶血；大面积肌肉：浆细胞病；血管内溶血；大面积肌肉损伤；酶类增多等。损伤；酶类增多等。（2）肾性蛋白尿）肾性蛋白尿：1）肾小球性蛋白尿：肾病综合症；原发性肾小球肾炎；继）肾小球性蛋白尿：肾病综合症；原发性肾小球肾炎；继发性肾小球肾炎。发性肾小球肾炎。2）肾小管性蛋白尿：肾小管间质病变；重金属中毒；药物）肾小管性蛋白尿：肾小管间质病变；重金属中毒；药物中毒；器官移植等。中毒；器官移植等。（3）肾后性蛋白尿）肾后性蛋白尿：泌尿、生殖系统炎症；泌尿系统结石、：泌尿、生殖系统炎症；泌尿系统结石、结核、肿瘤等；泌尿系统邻近器官疾病；其他病理性蛋白尿结核、肿瘤等；泌尿系统邻近器官疾病；其他病理性蛋白尿等。等。一、概述 1.糖尿糖尿:尿糖定性试验呈阳性的尿液。主要指葡萄糖。尿糖定性试验呈阳性的尿液。主要指葡萄糖。2.是否是否出现糖尿出现糖尿取决于取决于3 3个因素个因素:动脉血液中葡萄糖浓度动脉血液中葡萄糖浓度 每分钟流经肾小球的血浆量每分钟流经肾小球的血浆量 近端肾小管上皮细胞重吸收葡萄糖的能力近端肾小管上皮细胞重吸收葡萄糖的能力 二、尿葡萄糖测定的方法（一）班氏法（一）班氏法（Benedict法）法）1.原理原理 含有醛基的葡萄糖具有还原性，在高热及含有醛基的葡萄糖具有还原性，在高热及碱性溶液中能将蓝色的硫酸铜还原为黄色的氢氧化碱性溶液中能将蓝色的硫酸铜还原为黄色的氢氧化亚铜及红色氧化亚铜，出现黄色至砖红色沉淀物。亚铜及红色氧化亚铜，出现黄色至砖红色沉淀物。葡萄糖葡萄糖+硫酸铜硫酸铜 氢氧化亚铜氢氧化亚铜 氧化亚铜氧化亚铜 2.试剂试剂 班氏定性试剂班氏定性试剂 3.操作操作 如下如下 OH-CHO-黄色黄色 红棕色红棕色 蓝色蓝色 加班氏试剂加班氏试剂1ml 加热加热 取尿液取尿液0.1ml加入上述试剂中加入上述试剂中 再加热再加热 冷却冷却 判断结果判断结果 4.4.尿糖定性结果判断尿糖定性结果判断:实验结果实验结果 结果判断结果判断 相当含量（相当含量（g/L）仍呈蓝色仍呈蓝色 -蓝绿色，无沉淀蓝绿色，无沉淀 0.1 绿色，有少量绿色，有少量 +0.10.5 绿黄色沉淀绿黄色沉淀 黄绿色，有较多黄绿色，有较多 +0.51.0 沉淀沉淀 土黄色，有大量土黄色，有大量 +1.02.0 沉淀沉淀 砖红色沉淀，上砖红色沉淀，上 +2.0 清液无色清液无色 5.注意事项（1）试剂：尿液的比例为）试剂：尿液的比例为10:1,改变比例将影响灵改变比例将影响灵敏度和结果。敏度和结果。（2）糖尿病患者应于空腹或餐后）糖尿病患者应于空腹或餐后2小时留尿标本检小时留尿标本检验。验。（3）存在大量尿酸盐时，煮沸后可呈绿色但久置）存在大量尿酸盐时，煮沸后可呈绿色但久置后不变黄而呈灰蓝色，因此必须冷后观察结果。后不变黄而呈灰蓝色，因此必须冷后观察结果。5.注意事项（4）尿中非糖还原性物质过多，如链霉素、青霉）尿中非糖还原性物质过多，如链霉素、青霉素、水杨酸、水化氯醛、素、水杨酸、水化氯醛、VitC、中药大黄、黄岑等、中药大黄、黄岑等可呈阳性反应。所以应停可呈阳性反应。所以应停3天后留标本检测，如静天后留