尿液蛋白质检验一.ppt

病例 患者，男，68岁，因浮肿、无尿入院。入院前因上呼吸道感染多次使用庆大霉素和复方新诺明而出现浮肿，尿量进行性减少。体格检查：眼睑浮肿，双下肢可凹性水肿。1.初步诊断为什么疾病？2.要明确诊断需要哪些进一步的实验室检查？急性肾小管坏死 尿液蛋白质检验 Urine Protein Analysis 黄 辉 13594135402 3 教学目标 了解蛋白尿的定义 一一 理解蛋白尿形成的原因和机制 二二 掌握尿液蛋白质检查的检测原理、方法学评价、质量保证及临床意义 三三 4 教学内容 蛋白尿的定义 一一 蛋白尿形成的原因和机制 二二 尿液蛋白质的检验 三三 尿液蛋白质检验的临床意义 四四 5 一、蛋白尿的定义 肾小球的滤过 肾小管与集合管的重吸收 肾小管的分泌 正常人尿液中蛋白质的含量很少！6 一、蛋白尿的定义 健康人尿液蛋白质含量很少，当尿液蛋 白质超过150mg24h-1或超过100mgL-1时,蛋 白质定性试验为阳性称为蛋白尿(proteinuria)。7 二、蛋白尿形成的原因和机制 肾性蛋白尿 renal proteinuria 肾小球性蛋白尿 glomerular proteinuria 混 合 性 蛋 白 尿 mixed proteinuria 肾小管性蛋白尿 tubular proteinuria 8 二、蛋白尿形成的原因和机制 肾前性蛋白尿 prerenal proteinuria 溢出性蛋白尿 overflow proteinuria 9 二、蛋白尿形成的原因和机制 肾后性蛋白尿 postrenal proteinuria 组织性蛋白尿 histic proteinuria 10 二、蛋白尿形成的原因和机制 肾小球性蛋白尿：蛋白尿的选择性 选择性蛋白尿：肾小球损伤程度 较轻，以分子量49万中相对分 子量的白蛋白为主。非选择性蛋白尿：肾小球损伤程 度较重，尿液中大分子量蛋白质 和中分子量蛋白质同时存在。11 二、蛋白尿形成的原因和机制 蛋白尿种类 病变部位 尿液蛋白质特点 肾小球性 蛋白尿 肾小管性 蛋白尿 混合性 蛋白尿 溢出性 蛋白尿 组织性 蛋白尿 12 二、蛋白尿形成的原因和机制 蛋白尿种类 病变部位 尿液蛋白质特点 肾小球性 蛋白尿 肾小球 中分子量蛋白、大分子量蛋白质增加 肾小管性 蛋白尿 肾小管 小分子量蛋白质增加为主 混合性 蛋白尿 肾小球、肾小管 肾小球、肾小管受损程度不同而有一定的差异 溢出性 蛋白尿 肾前性 小分子量蛋白质 组织性 蛋白尿 肾小管、泌尿组织 T-H蛋白质增加为主 13 三、尿液蛋白质的检验 尿液中有无蛋白质？尿液中蛋白质的量？尿液中有哪一类蛋白质？14 三、尿液蛋白质的检验 蛋白质理化性质 蛋白质的两性电离和等电点 蛋白质的变性 蛋白质的沉淀 蛋白质的呈色反应 15 尿液蛋白质定性 加热乙酸法 磺基水杨酸法 干化学试带法 三、尿液蛋白质的检验 16 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定性：加热乙酸法 蛋白质 加热加热 蛋白质变性 蛋白质沉淀 稀乙酸稀乙酸 阴性阳性 17 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定性：加热乙酸法 方法经典而准确，为蛋白定性确证实验；特异性强，干扰因素少；灵敏度较低，为150mg/L；pH值、盐离子浓度对实验结果的影响。18 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定性：磺基水杨酸法 蛋白质 酸性条件酸性条件 氨基酸阳离子 蛋白盐沉淀 磺酸根离子磺酸根离子 19 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定性：磺基水杨酸法 操作简便、反应灵敏、结果显示快；检测灵敏度高，为50mg/L；造影剂、青霉素钾盐等可以造成假阳性。20 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定性：干化学试带法 蛋白质 酸碱指示剂 复合物+酸碱指示剂电离 发生颜色改变 尼龙膜层：防止大分子物质对反应污染。碘酸盐层：破坏维生素C等干扰物质。试剂层：与尿中所检测化学物质发生反应。支持层：塑料片，起支持作用。试带组成 尿液蛋白质的检验 尿干化学分析仪工作原理示意图 机械系统 光学系统 电路系统 23 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定性：干化学试带法 操作简便、快速、易于标准化；对球蛋白、本周蛋白的敏感度低；不同类型试带灵敏度有一定的区别，在70100mg/L。24 三、尿液蛋白质的检验?如何选择这些定性方法？尿液蛋白质定性 25 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定性 实验方法 操作性 灵敏度 实验干扰因素 加热乙酸法 较复杂 150mgL-1 尿液中盐浓度 磺基水杨酸法 简便 50mgL-1 药物及造影剂 干化学试带法 简便 100mgL-1 对球蛋白不敏感 26 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定性 采用干化学法或磺基水杨酸法进行尿蛋白初查。加热乙酸法作为尿蛋白定性确证实验。当不同定性实验方法结果不一致时如何处理？27 三、尿液蛋白质的检验 1.尿液中存在的蛋白质为球蛋白。加强与临床医师的沟通非常必要！磺基水杨酸法阳性，干化学试带法为阴性 2.蛋白质含量介于两种方法灵敏度之间。3.尿液中含有青霉素或者造影剂等物质。28 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定量 双 缩 脲 法 比 浊 法 染料结合法 需要对尿液标本进行浓缩处理！29 方 法 原 理 双缩脲法 蛋白质与碱性铜溶液作用，形成紫色缩合物。比浊法 酸性条件下，生物碱类试剂与蛋白质结合沉淀。染料结合法 染料与蛋白质结合后最大吸收峰发生漂移。三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定量 30 三、尿液蛋白质的检验?如何选择这些定量方法？方 法 方法优缺点 双 缩 脲 法 蛋白质测定经典方法，但灵敏度较低 比 浊 法 操作简便，线性范围窄，影响因素多 染料结合法 显色稳定，容易对比色器皿造成污染 尿液蛋白质定量 31 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质定量 1.根据实验室条件选择合适的定量方法。2.卫生部临检中心推荐双缩脲法和丽春红S法。3.加强尿液蛋白质定量的质量控制非常必要！32 尿液蛋白质分类 SDSSDS-PAGEPAGE凝胶电泳 双向凝胶电泳 三、尿液蛋白质的检验 33 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质分类：SDS-PAGE凝胶电泳 SDS与蛋白质结合，消除了蛋白质分子中的 电荷差异，再通过聚丙烯酰胺的分子筛作用，将 蛋白质按分子量大小相互分离。34 三、尿液蛋白质的检验 尿液标本 葡聚糖、PEG等 SDS-PAGE凝胶电泳 染色、光密度扫描 36 1 2 3 4 AlbAlb 小小分分子子量量蛋蛋白白 大大分分子子量量蛋蛋白白 1 1 肾小球性蛋白尿肾小球性蛋白尿 2 2 肾小管性蛋白尿肾小管性蛋白尿 3 3 生理性蛋白尿生理性蛋白尿 4 4 混合性蛋白尿混合性蛋白尿 三、尿液蛋白质的检验 37 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质分类：双向凝胶电泳 蛋白组学的重要技术，第一向基于蛋白质的等电 点不同进行分离，第二向则按蛋白质分子量的不同进 行分离。39 三、尿液蛋白质的检验 尿液蛋白质分类 1.SDS-PAGE凝胶电泳用于对尿液蛋白质进行分类。2.双向凝胶电泳主要用于科学研究。40 三、尿液蛋白质的检验 41 三、尿液蛋白质的检验 质量保证 分析前质量控制；分析中质量控制：坚持室内质控、遵守SOP操作规程、注意实验过程中的影响因素；分析后质量控制：完善的报告审核制度，结果不符合时及时分析原因。42 生理性蛋白尿 病理性蛋白尿 四、尿液蛋白质检验的临床意义 肾前性蛋白尿 肾性蛋白尿 肾后性蛋白尿 43 功能性蛋白尿（functional proteinuria）体位性蛋白尿(postural proteinuria)偶然性蛋白尿(accidental proteinuria)四、尿液蛋白质检验的临床意义 生理性蛋白尿 44 病理性蛋白尿 肾小球性 蛋白尿 肾小管性 蛋白尿 混合性 蛋白尿 溢出性 蛋白尿 组织性 蛋白尿 四、尿液蛋白质检验的临床意义 45 患者，男，68岁，因浮肿、无尿入院。入院前因上呼吸道感染多次使用庆大霉素和复方新诺明而出现浮肿，尿量进行性减少。体格检查：眼睑浮肿，双下肢可凹性水肿。1.初步诊断为什么疾病？2.要明确诊断需要哪些进一步的实验室检查？病例 急性肾小管坏死 46 课堂小结 尿液标本 蛋白质定性 干化学试带法干化学试带法 磺基水杨酸法磺基水杨酸法 蛋白质定量 染料结合法染料结合法 比浊法比浊法 蛋白质分类 47 思考题 自主设计实验 加热乙酸法 干化学试带法 磺基水杨酸法 1-+2+-+3-+合成三种人工尿液，要求：