流式在T细胞研究中的相关-20121219.pdf

流式在T细胞研究中的相关应用 BDB 刘尉 来源于骨髓的淋巴样干细胞来源于骨髓的淋巴样干细胞，在胸腺（，在胸腺（thymus）发育成）发育成熟。熟。介导适应性细胞免疫应答，介导适应性细胞免疫应答，在在TD-Ag诱导的体液免疫应诱导的体液免疫应答中也有重要的辅助作用。答中也有重要的辅助作用。T细胞概述细胞概述 T细胞的发育细胞的发育 DN:CD4-CD8-DN1:CD44+CD25-DN2:CD44+CD25+DN3:CD44-CD25+DN4:CD44-CD25-DP:CD4+CD8+TCR+1.依据细胞与抗原作用阶段分为：依据细胞与抗原作用阶段分为：初始初始T细胞、抗原活化细胞、抗原活化T细胞、记忆细胞、记忆T细胞。细胞。2.依据细胞功能分为：依据细胞功能分为：Th、CTL、Tr、Te。3.依据依据TCR类型分为：类型分为：TCR T细胞（细胞（TCR型）型）、TCR T细胞（细胞（TCR型型）。T细胞的分类细胞的分类 T细胞的活化细胞的活化 信号信号1：TCR识别抗原肽识别抗原肽-MHC分子复合物分子复合物 CD4-MHC II/CD8-MHC I 信号信号2：协同刺激分子的配：协同刺激分子的配对结合对结合 T细胞细胞 APC-positive CD28 B7-negative CD2 LFA-3 ICAM-1 LFA-1 CD4+T细胞的功能细胞的功能 CD4+辅助辅助T细胞细胞(如如Th1、Th2、Th9、Th17和和Tfh细胞细胞)几乎没有细胞毒性，它们通过几乎没有细胞毒性，它们通过分泌细胞因子作用于其他白细胞分泌细胞因子作用于其他白细胞(如如B细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞)，从而清除病原体。从而清除病原体。CD8+T细胞的功能细胞的功能 CD8+细胞毒性细胞毒性T细胞通过释放穿孔细胞通过释放穿孔蛋白、颗粒酶、颗蛋白、颗粒酶、颗粒溶解素从而消灭粒溶解素从而消灭被感染的靶细胞被感染的靶细胞 T细胞的研究细胞的研究 T cell subsets Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project.2012.Nature Review CD62L+CD62L-CD62L+CD62L-CD45RA&CD45RO CD45RA和和CD45RO是是CD45(白细胞共同抗原白细胞共同抗原)的的2种种异型，均属异型，均属I型跨膜蛋白，广泛存在于白细胞表面，型跨膜蛋白，广泛存在于白细胞表面，在淋巴细胞的发育成熟、功能调节及信号传递中具有在淋巴细胞的发育成熟、功能调节及信号传递中具有重要意义。重要意义。CD45RA+T细胞被称为“原始”细胞被称为“原始”T淋巴细胞，即未致淋巴细胞，即未致敏敏T细胞，具有抑制免疫的作用。细胞，具有抑制免疫的作用。CD45RO+T细胞被称为“记忆”细胞被称为“记忆”T细胞，具有辅助诱细胞，具有辅助诱导作用。导作用。T细胞的产生和分群细胞的产生和分群 记忆记忆 T 胸腺胸腺 初始初始 T 抗原抗原 CD45RA+CD4+CD45RO+CD4+纯真 初始和记忆初始和记忆/效应效应4 4细胞亚群的产生细胞亚群的产生 记忆 效应 凋亡 胸腺 效应 效应 效应 Native T细胞上升，表明细胞上升，表明T细胞功能恢复细胞功能恢复 应用应用 T cell subsets CD62L+CD62L-CD62L+CD62L-Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project.2012.Nature Review CD62L CD62L(L选择素选择素)在在初始初始T细胞细胞上高表达，活化后表达上高表达，活化后表达下调。下调。CD62L还表达在记忆性还表达在记忆性T辅助细胞的一个亚群辅助细胞的一个亚群和中心记忆性和中心记忆性T细胞上，这两群细胞与初始细胞上，这两群细胞与初始T细胞不细胞不同之处在于高表达同之处在于高表达CD44。此外，。此外，CD62L还表达在大还表达在大多数胸腺细胞、初始多数胸腺细胞、初始CD8+T细胞、细胞、B细胞、细胞、DCs、巨、巨噬细胞、噬细胞、NK细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞上。细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞上。中枢性记忆性中枢性记忆性T细胞细胞（central memory T cell）：此类细胞主要归巢至淋巴结，其特征）：此类细胞主要归巢至淋巴结，其特征性表型为性表型为CD62L+hi和和CCR7+，不表达，不表达CD45RA。其功能为接受抗原再次刺激后能快。其功能为接受抗原再次刺激后能快速产生效应并上调速产生效应并上调CD40L表达；并且能高分泌表达；并且能高分泌IL-2,并能多次增殖，进一步分化为效并能多次增殖，进一步分化为效应性细胞，可长时间维持免疫记忆。应性细胞，可长时间维持免疫记忆。效应性记忆性效应性记忆性T细胞细胞（effector memory T cell）：主要迁移至外周组织，低表达）：主要迁移至外周组织，低表达CD62L，不表达，不表达CCR7和和CD45RA。受抗原刺激后能立即产生免疫效应，发挥细胞毒。受抗原刺激后能立即产生免疫效应，发挥细胞毒作用并分泌效应分子。但分泌作用并分泌效应分子。但分泌IL-2和增殖能力低下。因此，和增殖能力低下。因此，EM Tcell维持免疫记忆的维持免疫记忆的时间较短。主要在免疫防御的第一线发挥作用。时间较短。主要在免疫防御的第一线发挥作用。T cell subsets Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project.2012.Nature Review 应用应用 T cell exhaustion E John Wherry.T cell exhaustion.Nature Immunology.2011 PD-1(CD279)Program Death-1 Keyroles:lymphocyte clonal selection,peripheral tolerance,autoimmune disease Expression:activated T cells,B cells,myeloid cells Ligand-interaction(B7-H1,B7-DC)inhibits T cell proliferation and cytokine secretion LAG-3(CD223)Lymphocyte Activation Gene-3 Structural similarity to CD4 Expression:activated T cells and NK cells,T regulatory cells promotes immune responses by inducing MHC class II signaling in APC CD244(2B4)CD244 is a member of the CD2 subset molecules Expression:NK cells,subset of T cells,monocytes,basophils,eosinophils CD48 is the ligand of CD244 CTLA-A(CD152)Cytotoxic T Lymphocyte-Assoc.Antigen-4 Keyroles:immunological tolerance,protective immunity,thymocyte regulation Expression:activated T and B lymphocytes shares B7 family counter-receptors with CD28:B7-1,B7-2 negatively regulates cell-mediated immune responses CD279 CD223 PHA-stimulated(day-3)human peripheral blood lymphocytes ConA-stimulated C57BL/6 splenocytes T cell exhaustion T细胞免疫功能与感染细胞免疫功能与感染 细胞免疫功能测定的临床意义细胞免疫功能测定的临床意义 HIV感染和艾滋病 其它感染性疾病 -病毒感染：病毒感染：HBV，HCV，EBV，CMV，HFMD,HFRS -结核病，真菌感染。结核病，真菌感染。肿瘤和化疗病人的免疫功能监测肿瘤和化疗病人的免疫功能监测 器官移植病人的免疫监测器官移植病人的免疫监测 自身免疫病和过敏性疾病自身免疫病和过敏性疾病 T细胞的研究细胞的研究 细胞因子细胞因子 由免疫系统细胞以及其他类型细胞主动分泌的一类由免疫系统细胞以及其他类型细胞主动分泌的一类小分子小分子量的可溶性蛋白质量的可溶性蛋白质。包括淋巴因子、干扰素、白介素、肿。包括淋巴因子、干扰素、白介素、肿瘤坏死因子、趋势化因子和集落刺激因子等。是免疫系统瘤坏死因子、趋势化因子和集落刺激因子等。是免疫系统细胞间，以及免疫系统细胞与其他类型细胞间联络的核心细胞间，以及免疫系统细胞与其他类型细胞间联络的核心，能改变分泌细胞自身或其他细胞的行为或性质，通过与，能改变分泌细胞自身或其他细胞的行为或性质，通过与细胞特异的膜受体而起作用细胞特异的膜受体而起作用。细胞因子在免疫激活中的作用细胞因子在免疫激活中的作用 效应性效应性T T细胞和调节性细胞和调节性T T细胞细胞 效应性效应性T T细胞和调节性细胞和调节性T T细胞细胞 免疫学应用免疫学应用-Th1/Th2 Th1亢进亢进 Th2亢进亢进 恶性肿瘤（非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、绒膜癌、脑胶质瘤恶性肿瘤（非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、绒膜癌、脑胶质瘤、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、黑色素瘤、结直肠癌、淋巴瘤、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、黑色素瘤、结直肠癌、淋巴瘤 等）等）良性肿瘤良性肿瘤 感染感染 寄生虫病（利什曼病、蠕虫病、丝虫病和血吸虫病寄生虫病（利什曼病、蠕虫病、丝虫病和血吸虫病等）等）真菌真菌 病毒感染病毒感染-丙肝丙肝 病毒感染病毒感染-HIV 细菌感染细菌感染-结核结核 细菌感染细菌感染-麻风麻风 自身免疫自身免疫病病 克隆氏病、胰岛素依赖性糖尿病克隆氏病、胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、自身免疫、自身免疫性甲状腺炎、多发性硬化性甲状腺炎、多发性硬化 系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性淋巴细胞增殖综、自身免疫性淋巴细胞增殖综合征合征(ALPS)、自身免疫性心脏病和、自身免疫性心脏病和Omenn综合征综合征 过敏性疾病（嗜酸性粒细胞炎症反应过敏性疾病（嗜酸性粒细胞炎症反应-哮喘）哮喘）妇科妇科-流产流产 GVHD（Graft-versus-host disease）慢性慢性 急性急性 免疫学应用免疫学应用-Th9 The Th9 helper cell lineage produces IL-9:-IL-9 is a potent T cell-derived,T cell growth factor-enhances mast cell activity -synergizes with erythropoietin to promote erythroid colony formation-protects human T cells from apoptosis induced by IL-2 withdrawal-downregulates oxidative burst in activated human alveolar macrophages-induces TGF-production 免疫学应用免疫学应用-Th17 免疫学应用免疫学应用-Th17 Pierre Miossec,and Jay K.K