动物细胞融合与单克隆抗体.ppt

“番茄番茄马铃薯”理想图马铃薯”理想图 通过长期的实验，科通过长期的实验，科学家们采用体细胞杂交学家们采用体细胞杂交技术获得了“番茄技术获得了“番茄马马铃薯”植株。铃薯”植株。杂杂种种植植株株 融合的融合的原生质原生质体体ABAB 再再生生出出细细胞胞壁壁 脱脱分分化化 愈愈伤伤组组织织 再再分分化化 植物细胞的融合植物细胞的融合 植物组织培养植物组织培养 植物细胞植物细胞A 原生质体原生质体B 原生质体原生质体A 杂种杂种细胞细胞AB 去去 壁壁 去去 壁壁 人人 工工 诱诱 导导 方法？方法？促进融合促进融合的方法？的方法？融合融合完成完成的的 标志标志 植物细胞植物细胞B 植物体细胞杂交技术过程植物体细胞杂交技术过程 成果和未解决的问题成果和未解决的问题 成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出 现自然界没有的新品种现自然界没有的新品种。未解决的问题：未能让杂种植物按照人们未解决的问题：未能让杂种植物按照人们 的需要表现出亲代的优良。的需要表现出亲代的优良。如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！动物细胞也能融合吗？动物细胞也能融合吗？一、动物细胞融合一、动物细胞融合 细胞细胞A 细胞细胞B 杂交细胞杂交细胞 灭活的病毒灭活的病毒 物理法物理法 化学法化学法 仙台病毒仙台病毒 疱疹病毒疱疹病毒 新城鸡瘟病毒新城鸡瘟病毒 不同不同DNADNA的两个细胞的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合灭活病毒诱导细胞融合 融合后的细胞融合后的细胞进行有丝分裂进行有丝分裂 1 1、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程 思考题思考题 1、植物体细胞杂交前做何处理？怎么处理？、植物体细胞杂交前做何处理？怎么处理？去壁去壁 酶解法，如纤维素酶或果胶酶解法，如纤维素酶或果胶酶酶 2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁无需，因为动物细胞无细胞壁 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、振动、电激等物理方法；离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法等化学方法 4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法？、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法？能能 还可以利用还可以利用灭活的病毒灭活的病毒进行诱导进行诱导 5、植物体细胞杂交过程应先进行原生质体融合再进行、植物体细胞杂交过程应先进行原生质体融合再进行组织培养形成完整的个体，动物细胞融合后能形成杂种组织培养形成完整的个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？动物个体吗？不能不能 6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？思考题 2、动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程。个细胞的过程。7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？思考题 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞 8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？生产单克隆抗体生产单克隆抗体 细胞融合与融合诱导细胞融合物质：细胞融合与融合诱导细胞融合物质：诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇 诱导细胞融合的仙台病毒必须诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活灭活。思考讨论：思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？病毒需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。细胞融合技术应用于哪些方面？细胞融合技术应用于哪些方面？细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？2.如何得到抗体？如何得到抗体？提提问问？二、单克隆抗体二、单克隆抗体 抗体抗体 1 1、抗原抗原 动物体内动物体内 刺激刺激 浆细胞浆细胞 抗原抗原 动物体内动物体内 刺激刺激 浆细胞浆细胞 抗体抗体 抗原不纯抗原不纯 抗体不纯抗体不纯 筛选单一浆细胞筛选单一浆细胞 不能增殖产生大量抗体不能增殖产生大量抗体 2 2、特异性差、纯度低；、特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏产量低、反应不够灵敏 二、单克隆抗体二、单克隆抗体 设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖 如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？杂种细胞杂种细胞 二、单克隆抗体二、单克隆抗体？诱导其融合的诱导其融合的方法有哪些？方法有哪些？抗原抗原 浆细胞浆细胞 2.2.制备过程：制备过程：二、单克隆抗体二、单克隆抗体 B BB B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤 细胞融合后培养液中有几种细胞？细胞融合后培养液中有几种细胞？筛选（特定的筛选（特定的 选择性培养基）选择性培养基）杂种细胞杂种细胞 整个制备过程要经过几次筛选整个制备过程要经过几次筛选?（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性能产生特异性抗体的细胞群。抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的克隆抗体。这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的含义，克隆的含义，只不过克隆的不是只不过克隆的不是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。）。）3.单克隆抗体的应用：作为诊断试剂作为诊断试剂 用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物 生物导弹生物导弹 特异性高、灵敏度高等优越性。特异性高、灵敏度高等优越性。主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法（同左）灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案风杆菌的实验方案 3、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_ 2、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_ 4、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段。培养两个阶段。制备单克隆抗体制备单克隆抗体 B细胞细胞 抗体抗体 细胞融合细胞融合 灭活病毒灭活病毒 双亲细胞双亲细胞 分泌抗体分泌抗体 无限增殖无限增殖 原代原代 传代传代 B 体外培养体外培养 骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 足够数量的细胞群足够数量的细胞群 注射到注射到 小鼠腹腔小鼠腹腔 A C 下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是 A.培养基成分不同 B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株 下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是 A培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清 B原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞 C动物细胞培养一般能够传到4050代，但其遗传物质发生了改变 D动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞 A C 生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功“复生”野驴的方法是 A将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体 B将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体 C取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体 D将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体 C 一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能 A有选择地繁殖某一性别的家畜 B繁殖家畜中的优秀个体 C用于保存物种 D改变动物的基因型 D 下列哪项属于克隆 A将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内 C将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞 D将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系 试管婴儿、试管苗和克隆羊三者均属于生物工程技术的杰出成果，下面叙述正确的是 A.都属于无性生殖能保持母本性状 B.都是细胞工程的技术范围 C.都充分体现了体细胞的全能性 D.都不会发生基因重组和变异 D B 下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1）A中放置的是动物器官或组织。它一般取自 。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ，然 后用 酶处理，使细胞分散开来，这样做的目的是 。（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有_等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第 代，到这时的培养称为 。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用 处理，然后配置成 ，再分装。（5）在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡，原因是 。CCTV一2于2005年4月7日报道，卫生部4月6日发布了苏丹红危险性报告评估，报道中提到苏丹红一号是一种人工色素(工业染料)，它在人体内代谢生成相应的胺类。科研人员欲采用一定的技术手段探究苏丹红是否对人体有危害。请回答：（1）根据所学的动物细胞工程知识，你认为采取下列哪种技术手段最合适：A动物细胞融合 B动物细胞培养 C胚胎移植 D核移植（2）根据上述选择，请你设计一个实验来探究“苏丹红一号”是否对人体有危害。1该实验的原理是：。2实验方法步骤：材料准备：从医院妇产科获取所需要的原材料组织，浓度为0.09“苏丹红一号”试剂，高倍显微镜，培养瓶若干，配制好的培养液，剪刀，培养箱，所需要的酶。制备检测细胞：a配制细胞悬浮液：。b将悬浮液分装到两个以上的培养瓶中，置于培养箱中培养一段时间。检测过程：。实验结果观察、分析得出结论。(略)动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是 A融合的原理 B融合的过程 C融合的诱导手段 D融合的结果 C 下表为动、植物细胞工程的有关内容比较，你认为错误的有 植物细胞工程 动物细胞工程 特殊处理 酶解法去除细胞壁 胰蛋白酶处理配制细胞悬液 融合方法 物理方法，化学方法 物理方法，化学方法，生物方法 典型应用 人工种子，种间杂种植物 单克隆抗体的制备 培养基的区别 麦芽糖是离体组织赖以生长的成分 动物血清不可缺少 A0处 B1处 C2处 D3处（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用 处理，除去了 ；由A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是 。融合完成的标志是 。（2）若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应