动物细胞融合与单克隆抗体(共20张PPT)..ppt

动物细胞与植物细胞的差别：无细胞壁 全能性受限制，不能发育成杂种动物 动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：不需去除细胞壁 不能发育成新的动物个体 一、动物细胞融合（细胞杂交）一、动物细胞融合（细胞杂交）P52 1、概念、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果、结果：形成单核的杂交细胞 3、原理、原理：细胞膜的流动性 4、诱导方式、诱导方式 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒 5 5、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程 (利用灭活仙台病毒利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所是动物细胞融合所特有的。特有的。病毒外壳病毒外壳上的某些糖蛋白可上的某些糖蛋白可能有促进细胞融合能有促进细胞融合的功能。的功能。)思考讨论：思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？毒需要灭活？不灭活行吗？不灭活的话会感染胞，而不能诱导细胞融合不灭活的话会感染胞，而不能诱导细胞融合 不同不同DNADNA的两个细胞的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合灭活病毒诱导细胞融合 融合后的细胞融合后的细胞进行有丝分裂进行有丝分裂 5 5、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程 6、意义、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7、应用、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体 阅读课本53页 总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合 比较项目比较项目 植物体细胞杂交植物体细胞杂交 动物细胞融合动物细胞融合 原原 理理 融合前处理融合前处理 诱诱 导导 方方 法法 用用 途途 细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞的全能性植物细胞的全能性 细胞膜的流动性细胞膜的流动性 用纤维素酶、用纤维素酶、果胶酶去壁果胶酶去壁 用胰蛋白酶用胰蛋白酶 使细胞分散使细胞分散 物理、化学方法物理、化学方法 物理、化学、物理、化学、生物方法生物方法 获得部分获得部分 或完整植株或完整植株 主要用于制备主要用于制备 单克隆抗体单克隆抗体 提 问？1.1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？效应效应B B细胞（浆细胞）。细胞（浆细胞）。2.2.一个淋巴细胞一个淋巴细胞(浆细胞浆细胞)能分泌多种抗体吗？能分泌多种抗体吗？每一个淋巴细胞只分泌每一个淋巴细胞只分泌一种一种特异性抗体。特异性抗体。3.3.简述获得抗体的传统途径？简述获得抗体的传统途径？抗原抗原 动物体动物体 抗体抗体 抗原不纯抗原不纯 抗体不纯抗体不纯 二、单克隆抗体二、单克隆抗体 刺激 浆细胞 体外培养淋巴细胞能无限增殖吗体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解怎样解决这个问题？决这个问题？4.4.这种方法获得的抗体有什么缺陷？这种方法获得的抗体有什么缺陷？产量低，纯度低，特异性差产量低，纯度低，特异性差 一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 动物细胞培养技术动物细胞培养技术 设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术 单克隆单克隆抗体抗体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞又能大量繁殖的细胞(1)(1)、原理、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。(2)(2)、过程过程 效应效应B B淋巴细胞淋巴细胞 注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白 骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞 融合融合 （只考虑两两融合）（只考虑两两融合）培养液中细胞有几培养液中细胞有几种类型？融合细胞种类型？融合细胞几种几种类型类型？骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细骨髓瘤细胞胞 B B淋巴细胞淋巴细胞-B B淋巴细胞淋巴细胞 B B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 多种多种杂交细胞杂交细胞 在具有筛选作用的培养基上培养在具有筛选作用的培养基上培养 专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性 克隆上述杂交细胞克隆上述杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞检验阳性细胞 单克隆抗体单克隆抗体 注射到小鼠体内注射到小鼠体内 体外培养体外培养 1 1、单克隆抗体的制备过程、单克隆抗体的制备过程 第第1 1次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。第第2 2次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细生单一抗体的杂交瘤细胞。胞。该细胞继承该细胞继承双亲细胞双亲细胞的遗传特性，既能的遗传特性，既能产生专产生专一抗体一抗体又能又能无限增殖无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高 产生相应的产生相应的B淋巴细淋巴细胞胞 2.诱导其融合的方法有哪些？诱导其融合的方法有哪些？3.融合后培养液中有几种细胞融合后培养液中有几种细胞?4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点交瘤细胞有何优点?原因？原因？1.注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么?5.为何要进行克隆化培养和为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选专一抗体检测，多次筛选?6.大量增殖杂交瘤细胞和获大量增殖杂交瘤细胞和获得单抗的方法得单抗的方法?产生相应的产生相应的B淋巴细胞淋巴细胞 选择培养基选择培养基 既能在体外无限增殖，也能产生特定既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗体的抗体 具有双亲细胞的遗传物质具有双亲细胞的遗传物质 培养液中或小鼠腹腔中培养培养液中或小鼠腹腔中培养 从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取 如何进行杂交瘤细胞的如何进行杂交瘤细胞的抗体检测抗体检测及及克隆化培养克隆化培养？融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分检测各孔上清液中细胞分泌的抗体泌的抗体。那些上清液可与。那些上清液可与特定抗原特定抗原结合的培养结合的培养孔为阳性孔。孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行般需进行3 34 4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。(2)(2)、过程过程 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 B-B细胞 B-瘤细胞 瘤-瘤细胞 选择培养基 第一次筛选第一次筛选 杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养 专一抗体检测 第二次筛选第二次筛选 相应杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体(3).(3).单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大量大 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合特异性结合 优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速 用于用于 运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗 既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细胞融合的新方法 一种新细胞一种新细胞 灭活病毒灭活病毒 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 一个优势一个优势 单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势灵敏度高的优势 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的经过免疫的B淋巴细胞淋巴细胞 B.没经过免疫的没经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞 C.经过免疫的经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞 A 2.动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是-（）A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新品种培育新品种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞 3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C.所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D.都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 B D 4.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D