分子细胞遗传学新进展.ppt

分子细胞遗传学新进展分子细胞遗传学新进展 传统的细胞遗传学传统的细胞遗传学 细胞遗传学细胞遗传学主要研究染色体的主要研究染色体的 亚显微结构和基因活动的关系亚显微结构和基因活动的关系 细胞周期的阶段细胞周期的阶段 简 介 60年代早期 局限于计算染色体的数目 粗略的将染色体按照大小和着丝粒位置进行区分(groups A to G)1970年 显带技术的建立 清楚的分辨出46条染色体 细胞遗传学的一般步骤 细胞培养 使细胞停留在分裂中期 低渗的方法使细胞膨大 固定染色体，保留核酸 将细胞滴到玻片上 用显带染色技术进行染色 在荧光显微镜下分析染色体 数20个中期分裂相进行分析 常规研究方法可区分400-600条带 高分辨率研究方法可区分650条带 细胞遗传学技术的步骤 细胞遗传学技术的步骤 细胞遗传技术的步骤 有丝分裂有丝分裂中期的核型分析中期的核型分析 染色体组核型分析 G-带(Giemsa)富含AT的区域颜色较深 优点 能看到整个基因组 显示每一单个染色体 缺点 分辨率(5-10Mb)进行细胞培养 其他会用到的核型分析技术 R,Q,C,和 NOR 带 染色体异常染色体异常 数目改变数目改变 三倍体三倍体 和和 四倍体四倍体 非整倍体非整倍体 +21,+18,+13,XO,XXY,等等 染色体异常染色体异常 结构异常结构异常 平衡改变平衡改变 易位和易位和 倒位倒位 不平衡改变不平衡改变 缺失缺失,扩增扩增,环状染色体环状染色体,和等臂染和等臂染色体色体 倒位位 扩增和环形染色体扩增和环形染色体 染色体缺失染色体缺失 缺失 看得见的 识别起来相对容易 微缺失 看不见 识别起来不是很容易 意意 义义 为什么开展细胞遗传学分析为什么开展细胞遗传学分析?(A)产前及产后遗传病产前及产后遗传病 染色体异常的发生机率 出生婴儿 0.6%先天性智力障碍（MR）患者 23%先天性心脏病 13%SAB 夫妇 5%死胎和 围产期死亡胎儿 6.0%自然流产(前三个月)60%染色体异常在自发性流产中的发生率 类型 发生率（%）非整倍体 45，X 20 常染色体单体 1 常染色体三体 总发生率 52 16号染色体三体 16 18号染色体三体 3 20号染色体三体 5 21号染色体三体 5 其他 23 三倍体 26 四倍体 6 染色体重排 4 唐式综合症在活产中的发生率及与孕妇年龄的关系 发生率 孕妇年龄（岁）胎儿出生时 羊膜穿刺检查 绒毛膜活检 15-19 1/1250 20-24 1/1400 25-29 1/1100 30 1/900 31 1/900 32 1/750 33 1/650 1/420 34 1/500 1/325 35 1/350 1/250 1/240 36 1/275 1/200 1/175 37 1/225 1/150 1/130 38 1/175 1/120 1/100 39 1/140 1/100 1/75 40 1/100 1/75 1/60 41 1/85 1/65 1/40 42 1/65 1/45 1/30 43 1/50 1/35 1/25 44 1/40 1/30 1/20 45以上 1/25 1/20 1/10 新生儿染色体异常发生率 异常类型 数量 发生率 37799名男性新生儿中性染色体异常 总数 98 1/385（男性）47，XXY 35 1/1080 47，XXY 35 1/1080 其他 28 1/1350 19173名女性新生儿中性染色体异常 总数 29 1/660（女性）45，X 2 1/9600 47，XXX 20 1/960 其他 7 1/2740 56952名新生儿常染色体数量异常 总数 82 1/695（活产）21三体 71 1/800 18三体 7 1/8140 13三体 3 1/19000 三倍体 1 1/57000 56952名新生儿常染色体结构异常（常染色体和性染色体）总数 144 1/395（活产）平衡性易位 Robertsontan 易位 51 1/1120 其他 59 1/965 不平衡性易位 34 1/1675 所有染色体异常（常染色体和性染色体）353 1/160（活产）唐氏综合症唐氏综合症 21号染色体三体号染色体三体,95-97%多余的染色体来自母亲多余的染色体来自母亲,唐氏综合症与母亲的年龄有关系唐氏综合症与母亲的年龄有关系,确切的病因不确切的病因不是很了解是很了解.活产新生儿发病率为活产新生儿发病率为1/800 to 1/1,100,唐氏综合症与文化、种族、社会阶层以及地理区域都没有唐氏综合症与文化、种族、社会阶层以及地理区域都没有必然的联系。必然的联系。智能较正常儿童低，认知困难，发育迟缓。他们也有很特殊的面貌，通常双眼距离较远、眼睛向上智能较正常儿童低，认知困难，发育迟缓。他们也有很特殊的面貌，通常双眼距离较远、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细小。肌张力低。斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细小。肌张力低。Turner 综合症 1个x染色体的全部或者部分丢失，只发生在女性。是最常见的染色体异常导致的疾病(活产女性新生儿发病率大约为 1/2500)身材矮小、卵巢不发育、性幼稚、蹼颈、肾脏和甲状腺有问题,骨骼畸形等 生长激素治疗,雌激素替代治疗等(B)白血病及实体瘤白血病及实体瘤 肿瘤的分子生物学基础 1、癌基因 2、抑癌基因 基因功能与肿瘤基因功能与肿瘤 肿瘤中常见的癌基因种类肿瘤中常见的癌基因种类 肿瘤中常见的癌基因扩增肿瘤中常见的癌基因扩增 常见的抑癌基因常见的抑癌基因 白血病及淋巴瘤中常见的基因改变白血病及淋巴瘤中常见的基因改变 基因数量基因数量 片断大小片断大小（kb）片断大小片断大小（Mb）人类基因组人类基因组 40,000 3,000,000 3,000 染色体染色体 2,000 150,000 150 中期染色体条带中期染色体条带(500 个个)80 6,000 6 前中期染色体条带前中期染色体条带(1,000个个)40 3,000 3 荧光原位杂交（荧光原位杂交（FISH）分辨率分辨率 1 1-10 PCR/Southern blot 1 10ng/ml时时 患癌的几率在患癌的几率在50%以上以上 当当PSA为为 410ng/ml，考虑穿刺活检进一步证实，仅，考虑穿刺活检进一步证实，仅能发现能发现2040%的的 PCa患者患者,漏诊率高漏诊率高 当当PSA3 years)Normal or isolated 9p/p15-p16 deletions Intermediate risk(median DFS 19 months)6q deletions,hyperdiploidy,and miscellaneous aberrations Unfavorable risk(median DFS 7 months)t(9;22)/BCR-ABL,t(4;11)/MLL-AF4,and t(1;19)/E2A-PBX1 Favorable risk +4,+10,and+17 or t(12;21)(TEL/AML1)Unfavorable risk 11q23(MLL)rearrangements Very unfavorable risk Hypodiploidy(45 chromosomes)or t(9;22)(BCR/ABL)Others 儿童急性淋巴细胞性白血病的儿童急性淋巴细胞性白血病的 预后分类预后分类 比较基因组杂交（CGH）1992年发明Kallionieml et al Sci,258(5083):818 实验组和对照组DNA 中期染色体 检测基因拷贝数扩增或缺失 谢谢谢谢!