使巨噬细胞转变为类上皮细胞.ppt

第十三章分枝杆菌属 是一类细长略带弯曲的杆菌，含有分枝菌是一类细长略带弯曲的杆菌，含有分枝菌酸，有分枝生长的趋势而得名。具有抗酸酸，有分枝生长的趋势而得名。具有抗酸性，一般不易着色，经加温或延长时间才性，一般不易着色，经加温或延长时间才能着色，着色后能抵抗盐酸酒精的脱色作能着色，着色后能抵抗盐酸酒精的脱色作用，故又称抗酸杆菌，归属于放线菌科，用，故又称抗酸杆菌，归属于放线菌科，已鉴定的有已鉴定的有7070余种。余种。第一节结核分枝杆菌 包括人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分包括人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌等，其中前三者对人枝杆菌和田鼠分枝杆菌等，其中前三者对人类致病。人型结核分枝杆菌感染的发病率最类致病。人型结核分枝杆菌感染的发病率最高。高。由于由于AIDSAIDS发病率呈上升趋势发病率呈上升趋势，而而AIDSAIDS极易患极易患结核病结核病，因此更使得结核病成为危胁人类健因此更使得结核病成为危胁人类健康的一个严重的全球性公共卫生问题康的一个严重的全球性公共卫生问题。一、临床意义一、临床意义(一一)致病物质是荚膜致病物质是荚膜、脂质和蛋白质脂质和蛋白质。1 1荚膜有助于粘附，能防止有害物质进入结荚膜有助于粘附，能防止有害物质进入结 核分枝杆菌，还可抑制吞噬体与溶酶体融核分枝杆菌，还可抑制吞噬体与溶酶体融 合。合。2.2.蛋白质蛋白质 有抗原性，和蜡质有抗原性，和蜡质D D结合后能使结合后能使 机体发生超敏反应，并在形成结核结节中机体发生超敏反应，并在形成结核结节中 发挥作用。发挥作用。3 3脂质脂质 毒力与所含的脂质，尤其是糖脂更为重要。毒力与所含的脂质，尤其是糖脂更为重要。索状因子是分枝菌酸和海藻糖结合的一种糖索状因子是分枝菌酸和海藻糖结合的一种糖脂，能损伤细胞线粒体和抑制氧化磷酸化过脂，能损伤细胞线粒体和抑制氧化磷酸化过程，抑制粒细胞的游走，引起慢性肉芽肿。程，抑制粒细胞的游走，引起慢性肉芽肿。磷脂能促进单核细胞增生，使巨噬细胞转变磷脂能促进单核细胞增生，使巨噬细胞转变为类上皮细胞，从而形成结节。为类上皮细胞，从而形成结节。硫酸脑甘酯是有毒株细胞壁的成分，能抑制硫酸脑甘酯是有毒株细胞壁的成分，能抑制溶酶体同吞噬体的结合，使细菌在细胞内长溶酶体同吞噬体的结合，使细菌在细胞内长期存活。期存活。蜡质蜡质D D：有佐剂作用，激发机体产生迟发型超：有佐剂作用，激发机体产生迟发型超敏反应。敏反应。(二二)所致疾病所致疾病 通过呼吸道通过呼吸道、消化道和损伤的皮肤等多消化道和损伤的皮肤等多途径感染机体途径感染机体，引起多种脏器的结核病引起多种脏器的结核病，其中以肺结核为多见其中以肺结核为多见。细菌能够在巨噬细菌能够在巨噬细胞内繁殖细胞内繁殖。为细胞内寄生菌为细胞内寄生菌。结核的免疫为有菌免疫或称传染性免疫结核的免疫为有菌免疫或称传染性免疫，指机体对细菌再次入侵有免疫力指机体对细菌再次入侵有免疫力。细胞细胞免疫在抗感染免疫中起重要作用免疫在抗感染免疫中起重要作用，产生产生细胞免疫的同时细胞免疫的同时，也产生迟发型超敏反也产生迟发型超敏反应应。二、微生物特性二、微生物特性 1.为分枝状为分枝状，略带弯曲的抗酸杆菌略带弯曲的抗酸杆菌，加温苯胺加温苯胺染料染色后不易被染料染色后不易被3 3盐酸酒精脱色盐酸酒精脱色，抗酸性抗酸性染色法染色后结核分枝杆菌呈红色染色法染色后结核分枝杆菌呈红色，背景呈蓝背景呈蓝色色。菌体外有荚膜菌体外有荚膜。2 2.菌体含有脂质菌体含有脂质、多糖和蛋白质等成分多糖和蛋白质等成分。与与 致病性免疫性有关致病性免疫性有关。3 3.细胞壁骨架细胞壁骨架、蜡质蜡质D D和核酸等均有佐剂作用和核酸等均有佐剂作用。4.4.为专性需氧，为专性需氧，3 35 5CO2CO2能促进生长。营能促进生长。营养要求较高，必须在含血清、卵黄、甘油养要求较高，必须在含血清、卵黄、甘油以及含某些无机盐类的特殊培养基才能生以及含某些无机盐类的特殊培养基才能生长良好。最适生长温度为长良好。最适生长温度为3535，生长缓慢，生长缓慢，141418h18h分裂分裂1 1次，次，2 25w5w才出现肉眼可见才出现肉眼可见的如菜花样粗糙型菌落。的如菜花样粗糙型菌落。5 5.抵抗力抵抗力 对理化因素抵抗力较强对理化因素抵抗力较强。耐干燥耐干燥，在干燥的痰内生存在干燥的痰内生存6 68 8个月个月，对化学消毒对化学消毒剂的抵抗力较强剂的抵抗力较强，在在3 3HClHCl或或6 6H H2 2SOSO4 4中中不被杀死不被杀死，常用于处理有杂菌污染的检材常用于处理有杂菌污染的检材，对湿热敏感对湿热敏感，60603030minmin可杀死细菌可杀死细菌，在在70707575乙醇中数分钟即被杀死乙醇中数分钟即被杀死。三、微生物学检验三、微生物学检验 1标本：清晨第一口痰送检标本：清晨第一口痰送检。无菌抽取脑脊无菌抽取脑脊液液、胸水胸水、腹水及关节液等盛无菌试管送检腹水及关节液等盛无菌试管送检，脑脊液标本静置后脑脊液标本静置后，表面有细薄凝块表面有细薄凝块，取凝取凝块作涂片或接种培养块作涂片或接种培养。采集脓液应直接从溃采集脓液应直接从溃疡处取脓汁或分泌物疡处取脓汁或分泌物。2 2直接涂片染色镜检：是常用的简易快速检直接涂片染色镜检：是常用的简易快速检查方法查方法。痰涂片要厚痰涂片要厚，经自然干燥和火焰固经自然干燥和火焰固定后进行齐定后进行齐-尼抗酸染色尼抗酸染色，观察至少观察至少100100个视个视野野，结核分枝杆菌抗酸染色后呈红色结核分枝杆菌抗酸染色后呈红色，其他其他细菌和细胞为蓝色细菌和细胞为蓝色。结果应报告结果应报告“找到或未找到或未找到抗酸性杆菌找到抗酸性杆菌”，而不能报告而不能报告“找到结核找到结核分枝杆菌分枝杆菌”。3 3.核酸检测核酸检测 用用PCRPCR法快速诊断结核分枝杆菌感染法快速诊断结核分枝杆菌感染。设设计特异计特异rRNArRNA片段进行扩增片段进行扩增，然后用特异的然后用特异的DNADNA探针与之杂交探针与之杂交。特异性与敏感性均大于特异性与敏感性均大于9595。4 4.抗抗PPDIgGPPDIgG的检测的检测 用用ELISAELISA法检测患者血清中抗法检测患者血清中抗PPDIgGPPDIgG，可可作为活动性结核分枝杆菌感染的快速诊断方法作为活动性结核分枝杆菌感染的快速诊断方法，阳性率为阳性率为80809090。5.分离培养分离培养 脑脊液脑脊液、胸腹水等无杂菌污染的标本可直接胸腹水等无杂菌污染的标本可直接或离心后取沉渣接种等有杂菌污染的标本在或离心后取沉渣接种等有杂菌污染的标本在接种到培养基之前须做适当的处理接种到培养基之前须做适当的处理，以消除以消除杂菌的干扰杂菌的干扰。标本接种于选择性固体培养基中标本接种于选择性固体培养基中，常用罗琴常用罗琴培养基培养基，所含的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌所含的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌生长：生长：3737，5 51010COCO2 2培养培养8 8周周，如果出如果出现干燥呈颗粒状现干燥呈颗粒状、灰白色菌落灰白色菌落，涂片染色为涂片染色为抗酸阳性抗酸阳性，多数是结核分枝杆菌多数是结核分枝杆菌。阴性继续阴性继续培养至培养至1212周方可报告周方可报告。6.鉴定鉴定 菌种鉴定可为结核病和非典型分枝杆菌病的菌种鉴定可为结核病和非典型分枝杆菌病的临床鉴别和防治提供科学的依据临床鉴别和防治提供科学的依据。(1 1)PCR)PCR反向膜探针杂交反向膜探针杂交EHSAEHSA法法(PCR(PCR杂交梳杂交梳)：该：该法是将法是将PCRPCR、分子杂交分子杂交、酶联免疫显色技术有酶联免疫显色技术有机结合机结合，经过两次特异性双向选择经过两次特异性双向选择，其特异其特异性相互补充和加强性相互补充和加强，对提高方法的特异性对提高方法的特异性，消除假阳性起决定作用消除假阳性起决定作用。(2 2)DNA)DNA探针：使用对分枝杆菌探针：使用对分枝杆菌rRNArRNA序列特异的序列特异的DNADNA探针与分枝杆菌探针与分枝杆菌rRNArRNA杂交杂交，由于每个分枝由于每个分枝杆菌细胞内有杆菌细胞内有1010，000000个个rRNArRNA拷贝拷贝，故为杂交故为杂交提供了放大系统提供了放大系统，提高了灵敏度提高了灵敏度，将荧光素将荧光素或同位素标记在探针上或同位素标记在探针上，可鉴定菌种可鉴定菌种。(3 3)1616s s rRNArRNA基因序列测定：由于不同种的分枝基因序列测定：由于不同种的分枝杆菌其杆菌其1616srRNAsrRNA基因序列是不同的基因序列是不同的，所以可通所以可通过测定过测定1616s s rRNArRNA基因序列鉴定菌种基因序列鉴定菌种。(4 4)高效液相色谱高效液相色谱(HPLC)(HPLC)检测：由于不同种的分检测：由于不同种的分枝杆菌细胞壁中的分枝菌酸不同枝杆菌细胞壁中的分枝菌酸不同，所以利用所以利用HPLCHPLC检测分枝菌酸可鉴定菌种检测分枝菌酸可鉴定菌种，7.药物敏感性试验药物敏感性试验 耐药株的增多耐药株的增多，应做药物敏感性试验应做药物敏感性试验，以以指导临床合理用药指导临床合理用药。将纯培养物菌悬液将纯培养物菌悬液，接种含各种浓度药物接种含各种浓度药物的固体培养基上的固体培养基上，同时做不含药物的对照同时做不含药物的对照组组。经过培养经过培养，含有药物的培养基上菌落含有药物的培养基上菌落数目是对照组的数目是对照组的7575以上以上，则认为该菌对则认为该菌对该药物浓度为完全耐药该药物浓度为完全耐药，如无菌落生长则如无菌落生长则为敏感为敏感。四、结核菌素试验四、结核菌素试验(1)原理：旧结核菌素原理：旧结核菌素(OT)(OT)，主要成分是结核主要成分是结核分枝杆菌蛋白分枝杆菌蛋白。将其稀释将其稀释1000010000倍倍，使每使每0 01 1mlml含含1 1u u。纯蛋白衍生物纯蛋白衍生物(PPD)(PPD)，是用三是用三氯醋酸沉淀结核菌培养滤液后的纯化物氯醋酸沉淀结核菌培养滤液后的纯化物。每每O O0000200002mgmg为为1 1U U，注入皮内后如受试者已注入皮内后如受试者已感染结核感染结核，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合性结合，形成迟发型超敏反应性炎症形成迟发型超敏反应性炎症。(2 2)方法：取方法：取5 5UPPDUPPD或或OTOT0 0.1 1mlml注射于前臂掌侧注射于前臂掌侧皮下皮下，经经48487272h h。注意局部有无硬结注意局部有无硬结，不能不能单独以红晕为标准单独以红晕为标准。(3)结果分析：结果分析：阳性注射部位硬结阳性注射部位硬结、红肿红肿直径直径0 0.5 51 1.5 5cmcm之间之间。这表明机体曾感染过结这表明机体曾感染过结核核，出现超敏反应出现超敏反应，但不表示正患结核病；但不表示正患结核病；强阳性强阳性 硬结直径超过硬结直径超过1 1.5 5cmcm以上以上，表明可表明可能有活动性结核能有活动性结核，应进一步检查；应进一步检查；阴性阴性 注射部位有针眼大的红点或稍有红肿注射部位有针眼大的红点或稍有红肿，硬结硬结直径小于直径小于0 0.5 5cmcm，说明无结核感染说明无结核感染，但应考虑但应考虑下述情况：如受试者处于原发感染的早期下述情况：如受试者处于原发感染的早期，或正患有其他传染病或正患有其他传染病。(4)应用：应用：选择选择BCGBCG接种对象及测定接种效果接种对象及测定接种效果，结核菌结核菌素反应阴性者应接种素反应阴性者应接种BCGBCG；结核菌素试验对婴幼儿可做诊断结核病之结核菌素试验对婴幼儿可做诊断结核病之用；用；在末接种在末接种BCGBCG的人群中作结核分枝杆菌感染的人群中作结核分枝杆菌感染的流行病学调查；的流行病学调查；可借用其测定肿瘤病人的细胞免疫功能可借用其测定肿瘤病人的细胞免疫功能。五、动物接种五、动物接种 可用于结核分枝杆菌的分离和毒力测定：此可用于结核分枝杆菌的分离和毒力测定：此法敏感可靠法敏感可靠，但手续较繁琐但手续较繁琐，不能列为常规不能列为