交叉配血-酶法和聚凝胺法.ppt

交叉配血交叉配血酶法与聚凝胺法酶法与聚凝胺法 by by Cherish KimCherish Kim 酶介质交叉配血法酶介质交叉配血法 原理 RBC表面具丰富表面具丰富唾液酸唾液酸，造成红细胞表面带有大量，造成红细胞表面带有大量负电荷负电荷，在电场，在电场力的作用下，红细胞在液体中相互力的作用下，红细胞在液体中相互排斥排斥，导致红细胞，导致红细胞不能凝集不能凝集。蛋白水解酶蛋白水解酶能能消化和破坏消化和破坏这种唾液酸减少红细胞表面的负电荷，导这种唾液酸减少红细胞表面的负电荷，导致红细胞表面的致红细胞表面的Zeta电势减小电势减小，红细胞间的，红细胞间的排斥力减弱排斥力减弱，细胞间的，细胞间的距离缩短距离缩短，IgG类红细胞血型抗体分子的两个抗原结合位点可以分类红细胞血型抗体分子的两个抗原结合位点可以分别结合具有相应抗原的红细胞，导致红细胞发生凝集反应。别结合具有相应抗原的红细胞，导致红细胞发生凝集反应。酶介质交叉配血试验可以检测出献血者或受血者血清中酶介质交叉配血试验可以检测出献血者或受血者血清中是否存在是否存在IgG类红细胞血型抗体类红细胞血型抗体，确保受血者和献血者血液相容，防止发生，确保受血者和献血者血液相容，防止发生溶血性输血不良反应。溶血性输血不良反应。实验仪器与试剂 仪器：台式离心机仪器：台式离心机 37恒温水浴箱恒温水浴箱 显微镜显微镜 试剂试剂：1%菠萝酶溶液、生理盐水菠萝酶溶液、生理盐水 标本标本：3mlABO同型全血标本同型全血标本2人份人份 木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶 菠萝蛋白酶菠萝蛋白酶 实验步骤 1.抽取受血者静脉血抽取受血者静脉血34ml，待凝固后分离血清；，待凝固后分离血清；以以生理盐水洗涤生理盐水洗涤受血者红细胞受血者红细胞3次次配成配成3%红细胞悬红细胞悬液液 2.将献血者血标本以同样方法分离血清；生理盐水将献血者血标本以同样方法分离血清；生理盐水洗涤献血者红细胞洗涤献血者红细胞3次，配成次，配成3%红细胞悬液红细胞悬液 3.取洁净试管取洁净试管2支，分别标记主侧管和次侧管。支，分别标记主侧管和次侧管。主侧管主侧管：受血者受血者血清血清2滴滴和献血者和献血者红细胞悬液红细胞悬液1滴滴 次侧管次侧管：献血者献血者血清血清2滴滴和受血者和受血者红细胞红细胞1滴滴 两管分别加入两管分别加入1%菠萝酶溶液菠萝酶溶液各各1滴滴 实验步骤 4.阳性对照管阳性对照管：3%RhD阳性阳性O型红细胞悬液型红细胞悬液和和人源性人源性IgG类抗类抗D血清血清各各1滴滴，1%菠萝酶溶液菠萝酶溶液1滴滴 5.阴性对照阴性对照管管：3%RhD阳性阳性O型红细胞悬液和正常人型红细胞悬液和正常人AB型血清各型血清各1滴滴，1%菠萝酶溶液菠萝酶溶液1滴滴 6.自身对照自身对照管管：受血者自身血清和受血者自身血清和3%红细胞悬液各红细胞悬液各1滴滴 7.各试管经各试管经轻轻摇动轻轻摇动后，置后，置37水浴水浴30min 8.取出试管，取出试管，轻轻摇动轻轻摇动 或经或经120g离心离心1min（或（或1300g离心离心30s），取出试，取出试管轻轻摇动管轻轻摇动 9.观察试验结果并记录观察试验结果并记录 试验结果 1.受受血者血者自身对照管自身对照管内红细胞内红细胞不凝集不凝集，阳性阳性对照管对照管红细胞红细胞凝集凝集，阴性阴性对照管红细胞对照管红细胞不凝集不凝集，主、次主、次侧侧配血管内红细胞均配血管内红细胞均不凝集不凝集，表示受血者和献血者两，表示受血者和献血者两血酶介质交叉配血血酶介质交叉配血相容相容，献血者血液，献血者血液可输可输注注 2.如果如果受血者受血者自身对照管自身对照管内红细胞内红细胞不凝集不凝集，阳性阳性对对照管红细胞照管红细胞凝集凝集，阴性阴性对照管红细胞对照管红细胞不凝集不凝集，主主侧侧或（和）或（和）次次侧管内红细胞侧管内红细胞凝集凝集，则表明两血，则表明两血不相容不相容，献血者血液献血者血液不可输注不可输注。注意事项注意事项 1.酶处理可酶处理可增强增强一些抗原抗体系统的反应一些抗原抗体系统的反应活性活性，例如，例如Rh和和Kidd系统。酶处理后也会系统。酶处理后也会破坏破坏一些一些抗原的结构抗原的结构，例如，例如M、N、Fya、Fyb抗原抗原，导致这些抗原抗体的反应性减，导致这些抗原抗体的反应性减弱。弱。（可用抗球蛋白试验）（可用抗球蛋白试验）2.应应平行进行盐水介质交叉配血试验平行进行盐水介质交叉配血试验 3.红细胞经蛋白酶修饰后可以改变红细胞悬液的物理性红细胞经蛋白酶修饰后可以改变红细胞悬液的物理性质，在交叉配血试验中可以出现质，在交叉配血试验中可以出现非特异性自身凝聚非特异性自身凝聚，因，因此必须使用此必须使用标准对照试验标准对照试验，才能得出正确的试验结果，才能得出正确的试验结果 方法学评价方法学评价 优点：优点：操作操作简单、快捷简单、快捷，曾广泛，曾广泛使用，适使用，适用于急诊抢救患者的交叉配血用于急诊抢救患者的交叉配血 缺点缺点：可能使可能使M、N、Fya、Fyb等抗原的等抗原的抗体抗体漏检漏检，存在输血安全隐患，存在输血安全隐患 因此目前临床基本已经不再使用酶介质进因此目前临床基本已经不再使用酶介质进行交叉配血试验行交叉配血试验 低离子聚凝胺介质交叉配血试验低离子聚凝胺介质交叉配血试验 原理：聚凝胺（聚凝胺（polybrene）是一种高价阳性季胺盐多聚物，）是一种高价阳性季胺盐多聚物，溶解后可以产生较多的溶解后可以产生较多的正电荷正电荷，可以大量，可以大量中和中和红细胞红细胞膜表面的膜表面的负电荷负电荷，减弱减弱红细胞之间的红细胞之间的排斥力排斥力，使红细，使红细胞彼此间的胞彼此间的距离缩短距离缩短，在离心力的作用下，可以引起，在离心力的作用下，可以引起正常红细胞正常红细胞可逆性可逆性的的非特异性凝集非特异性凝集。由于降低介质的离子强度，可以增加抗原抗体间的引由于降低介质的离子强度，可以增加抗原抗体间的引力（或降低红细胞膜的力（或降低红细胞膜的Zeta点位），可以增强血型抗点位），可以增强血型抗体凝集红细胞的能力。体凝集红细胞的能力。将红细胞和血清放置在低离子介质中孵育，如果血将红细胞和血清放置在低离子介质中孵育，如果血清中存在不完全性红细胞血型抗体（清中存在不完全性红细胞血型抗体（IgG类），可类），可以促进抗体和红细胞膜血型抗原结合，加入聚凝胺以促进抗体和红细胞膜血型抗原结合，加入聚凝胺促进红细胞凝集。促进红细胞凝集。离心后，加入离心后，加入重悬浮液重悬浮液，中和中和聚凝胺的凝集作用，聚凝胺的凝集作用，使正常红细胞的使正常红细胞的凝集解散凝集解散，而，而抗原抗体结合抗原抗体结合引起的引起的红细胞凝集红细胞凝集不会散开不会散开。实验仪器与试剂实验仪器与试剂 仪器仪器：台式离心机、显微镜台式离心机、显微镜 试剂试剂：生理盐水生理盐水 低离子介质（低离子介质（LIM）聚凝胺试剂聚凝胺试剂 重悬浮液重悬浮液 标本标本：3mlABO同型全血标本同型全血标本2人份人份 实验步骤实验步骤 1.抽取受血者静脉血抽取受血者静脉血34ml，待凝固后，待凝固后分离血清分离血清；以生理盐水洗涤；以生理盐水洗涤受血者红细胞受血者红细胞3次次，配成，配成3%红细胞悬液红细胞悬液 2.将献血者血标本以同样方法分离血清；以生理盐水洗涤献血者红将献血者血标本以同样方法分离血清；以生理盐水洗涤献血者红细胞细胞3次，配成次，配成3%红细胞悬液红细胞悬液 3.主侧管主侧管：加受血者血清加受血者血清2滴，献血者红细胞悬液滴，献血者红细胞悬液1滴；滴；次侧次侧管管：加献血者血清加献血者血清2滴，受血者红细胞悬液滴，受血者红细胞悬液1滴滴 4.每管各加每管各加LIM溶液溶液0.6ml，混匀，混匀，室温孵育室温孵育1min 5.每管各加每管各加2滴聚凝胺溶液滴聚凝胺溶液，混合后，混合后静置静置15s 6.1300g离心离心15s，弃弃上清上清 7.轻轻摇动试管轻轻摇动试管，目测细胞有无凝集，目测细胞有无凝集，如无凝集，必须重做如无凝集，必须重做 8.加入加入2滴重悬浮液滴重悬浮液，并，并轻轻混合轻轻混合，肉眼观察结果，肉眼观察结果 9.取载破片一张，用滴管分别从主侧管和次侧管内吸取红细胞悬液取载破片一张，用滴管分别从主侧管和次侧管内吸取红细胞悬液各各1滴，均匀滴放在载玻片上，用显微镜观察结果并记录滴，均匀滴放在载玻片上，用显微镜观察结果并记录 实验结果实验结果 1.将如果将如果主侧管主侧管和和次侧管次侧管内红细胞内红细胞凝集散开凝集散开，则为聚，则为聚凝胺引起的凝胺引起的非特异性凝集非特异性凝集，表示受血者和献血者两血，表示受血者和献血者两血聚凝胺介质配血聚凝胺介质配血相容相容，献血者血液，献血者血液可以输注可以输注 2.如果主侧管或（和）次侧管内红细胞凝集如果主侧管或（和）次侧管内红细胞凝集不散开不散开，则表明则表明抗原抗体结合的特异性反应抗原抗体结合的特异性反应，两血，两血不相容不相容，献，献血者血液血者血液不可输注不可输注 （用户可使用（用户可使用IgG抗抗D抗体（效价抗体（效价64）与）与RhD阳性红阳性红细胞反应做阳性对照实验，测试本试剂的有效性。）细胞反应做阳性对照实验，测试本试剂的有效性。）注意事项注意事项 1.聚凝胺介质交叉配血试验对聚凝胺介质交叉配血试验对Kell血型系统的抗体不能血型系统的抗体不能有效检出有效检出（阴性结果（阴性结果加做抗球蛋白试验加做抗球蛋白试验），但汉族，但汉族kk型几乎型几乎100%。2.临床输血进行交叉配血试验时，应当临床输血进行交叉配血试验时，应当首先首先进行进行盐水盐水介质介质的交叉配血试验，的交叉配血试验，排除完全性（排除完全性（IgM类）红细胞类）红细胞抗体抗体的存在后，再进行聚凝胺介质交叉配血试验的存在后，再进行聚凝胺介质交叉配血试验 3.溶血标本不得用于交叉配血试验溶血标本不得用于交叉配血试验 4.当重悬浮液加入后，应当重悬浮液加入后，应尽快观察结果尽快观察结果（不可超过（不可超过3min），以免反应减弱或消失），以免反应减弱或消失 5.聚凝胺溶液放置在玻璃瓶中过久可以导致红细胞凝聚凝胺溶液放置在玻璃瓶中过久可以导致红细胞凝集过弱，因此必须集过弱，因此必须保存在深色塑料瓶中保存在深色塑料瓶中 6.聚凝胺是一种聚凝胺是一种抗肝素试剂抗肝素试剂，所以如果使用含肝素的，所以如果使用含肝素的血标本，要加较多的聚凝胺来中和肝素血标本，要加较多的聚凝胺来中和肝素 方法学评价方法学评价 优点：优点：安全、敏感、快速安全、敏感、快速、操作简单操作简单，结，结果果易判定易判定，能为临床安全快速的输血提供，能为临床安全快速的输血提供有力保证。有力保证。聚凝胺介质配血法反应较盐水法灵敏度高，聚凝胺介质配血法反应较盐水法灵敏度高，能检出几乎所有规则抗体及不规则血型抗能检出几乎所有规则抗体及不规则血型抗体，体，适用于各类输血患者的配血适用于各类输血患者的配血 缺点：缺点：漏检漏检Kell系统系统（见注意事项）（见注意事项）谢 谢！