乙肝五项(2).ppt

乙肝病毒五项检测乙肝病毒五项检测 双抗体夹心法 乙型肝炎病毒表面抗原乙型肝炎病毒表面抗原 乙型肝炎病毒表面抗体乙型肝炎病毒表面抗体 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e抗原抗原 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e抗体抗体 乙型肝炎病毒核心抗体乙型肝炎病毒核心抗体 双抗体夹心法 双抗原夹心法 竞争抑制法 竞争抑制法 乙肝病毒五项检测乙肝病毒五项检测 乙型肝炎病毒表面抗原乙型肝炎病毒表面抗原 检验原理检验原理 本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验原理。在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB显色剂等其他试剂，检测人血清或血浆中的乙肝表面抗原（HBsAg）。乙型肝炎病毒表面抗原乙型肝炎病毒表面抗原 样本要求样本要求 本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。不能检测含叠氮钠、悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的样品。样品中应无微生物，可在28储存一周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。乙型肝炎病毒表面抗原 检验方法检验方法 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照孔3孔，阳性对照孔2孔和空白对照孔1孔。（用双波长检测，可不设空白对照孔）。稀释：每孔加入样品稀释液20 L，空白对照孔除外。加样：分别在相对应孔中加入待测样品或阴性、阳性对照100L，轻轻振荡混匀。（非常重要）温育：用封板膜封后，置371温育602分钟。（如有酶联反应加速仪温育时间可减半）。加酶：每孔加入酶标试剂50L，空白孔除外，轻轻振荡混匀。温育：用封板膜封后，置371温育301分钟。（如有酶联反应加速仪温育时间可减半）。洗版：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，拿出来在扣在洗版纸上重重拍干。显色：每孔加入显色剂A、B液（底物）各50L，轻轻振荡混匀，371避光显色30分钟。测定：每孔加入终止液50L，轻轻振荡混匀，十分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450um/600650nm），用空白孔凋零点后测定各孔A值。乙型肝炎病毒表面抗原 乙型肝炎病毒表面抗原 注意事项注意事项 本样品仅用于体外诊断，操作应按说明说严格进行。封板膜不能重复使用，不同批号、酶标试剂和阴性对照不可混用，不能与其它厂家试剂混用。避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒液（如84消毒液）的环境下操作。使用前请将试剂平稳至室温（平衡30分钟以上），实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即回放28。未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封28保存。过期试剂请勿使用。加液时必须用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组份时，应更换加样器的吸头和加样槽，以防止出现交叉污染。洗涤时各孔均匀需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定3060秒浸泡时间。在洗版结束后，必须立即进行下一步，不可使用酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指引或划痕可能影响板孔的读值。所有样品、废液和废弃物都应按照传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意安全。显色时必须先加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除HBV（乙型肝炎）感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。乙型肝炎病毒表面抗体【检验原理】本试剂采用双抗原夹心酶联免疫吸附实验原理。在微孔条上预包被乙肝表面抗原（HBsAg），加入待测样品及酶标抗原（HBsAg-HRP）试剂进行温育。样品中的HBsAb与包被抗原和酶标抗原形成“包被抗原-抗体-酶标抗原”复合物。洗板后加入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应后为黄色。若样品中乙无型肝炎表面抗体时，不显色。乙型肝炎病毒表面抗体【检验方法】配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20稀释。编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）。加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50ul。加霉：每孔加入酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻震荡混匀。温育：用封板膜封板后，置于37温育30分钟。洗涤：小心揭掉封板莫，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。显色：每孔加入显色剂A、B液各50ul，轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟。测定：每孔加终止液50ul，轻轻震荡混匀，10分钟内测定结果。乙型肝炎病毒e抗体 检验原理：本试剂采用竞争抑制酶联免疫法吸附法实验原理，在微孔板上预包被乙肝e抗原，加入待测样品及酶标抗体（HBeAb-HRP）试剂进行温育，酶标抗体和样品中的HBeAb竞争酶标板上的包被抗原。若样本中无乙型肝炎e抗体时，酶标抗体与包被抗原结合形成“包被抗原-酶标抗体”复合物，洗板后加入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生产蓝色产物，终止反应后变为黄色。若样本中存在乙型肝炎e抗体时，会与酶标抗体竞争形成“包被抗原-抗体”复合物，不显色。乙型肝炎病毒e抗体 检验方法：配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。倍稀释。编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳孔，阳性对照性对照2孔和空白对照孔和空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）。孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）。加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50l。加酶：每孔加人酶标试剂加酶：每孔加人酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻振荡混匀。，空白孔除外，轻轻振荡混匀。温育：用封板膜封板后置温育：用封板膜封板后置37温育温育30min。洗涤：小心撕掉封板膜，用洗板机洗涤洗涤：小心撕掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。遍，最后一次尽量扣干。显色：每孔加人显色剂显色：每孔加人显色剂A、B液各液各50l，轻轻振荡混匀，轻轻振荡混匀，37避光避光显色显色15min。测定：每孔加终止液测定：每孔加终止液50l，轻轻振荡混匀，轻轻振荡混匀，10min内测定结果。内测定结果。设定酶标仪波长于设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长处（建议用双波长450nm/600-650nm检测），用空白孔调零点后测定各孔检测），用空白孔调零点后测定各孔A值。值。乙型肝炎病毒核心抗体 乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）、e抗体（抗-HBe）检测（1）抗-HBc检测 先用生理盐水将待测血清作1:30稀释，然后取50l加入相应的包被板（或条）中，同时设阳性、阴性及空白对照各一孔（对照血清不必稀释）；再向每孔加入酶结合物50l（空白孔不加），再进行同1的操作。但结果观察需反看：目测法是以不显色（无色）孔为阳性；比色法是以标本吸光度A值0.5N（阴性对照值）为阴性，标本吸光度A值0.5N者判为阳性。序号 HbsAg HbsAb HbeAg HbeAb HBcAb 1-过去和现在未感染过 HBV。1-30%2-+(1)既往感染未能测出抗-HBs；(2)恢复期 HBsAg 已消，抗-HBs 尚未出现；(3)无症状 HBsAg 携带着。5-10%3-+(1)既往感染过 HBV；(2)急性 HBV 感染恢复期；(3)少数标本仍有传染性。HBV 感染已过；抗 HBs 出现前的窗口期 2-10%4-+-(1)注射过乙肝苗有免疫；(2)既往感染；假阳性 1-6%5-+-+急性 HBV 感后康复。0.5-5%6+-+(1)急性 HBV 感染；(2)慢性 HBsAg 携带者；(3)传染性弱。10-15%7-+-+既往感染，仍有免疫力。HBV 感染，恢复期。5-15%8+-+(1)急性 HBV 感染趋向恢复；(2)慢性 HBsAg 携带者；(3)传染性弱。即俗称的“小三阳”。5-10%9种种常常见见模模式式 9+-+-+急性或慢性乙型肝炎感染。提示 HBV 复制，传染强。即俗称的“大三阳”。30-40%乙肝五项的32种组合 10+-(1)急性 HBV 感染早期,急性 HBV 感染潜伏期；(2)慢性 HBV携带者，传染性弱。11+-+-(1)慢性 HBsAg携带者易转阴；(2)急性 HBV感染趋向恢复。12+-+-急性 HBV感染早期或慢性携带者，传染性强。13+-+(1)急性 HBV感染趋向恢复；(2)慢性携带者。14+-(1)亚临床型 HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次感染。15+-+(1)亚临床型 HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次感染。16+-+-亚临床型或非典型性感染。17+-+亚临床型或非典型性感染。18+-+亚临床型或非典型性感染早期。HBsAg免疫复合物，新的不同亚型感染。19-+-(1)非典型性急性感染；(2)见于抗-HBc 出现之前的 感染早期，HBsAg滴度低而呈阴性，或呈假阳性。20-+-+非典型性急性感染。21-+急性 HBV感染中期。22-+-+-HBV感染后已恢复。23-+-非典型性或亚临床型HBV感染。24-+-+非典型性或亚临床型HBV感染。25-+-急性 HBV感染趋向恢复。26+一种亚型的HBsAg及异型的抗HBs（常见）；血清从HBsAg转化为抗HBs的过程（少见）。27-+-28-+29-+-30+-+-31+-32+-谢谢谢谢