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台北(02)2720-2215 新竹(03)5307-756 台中(04)2463-3591 嘉義(05)2844-162 台南(06)2890-665 高雄(07)3470-143 服務專線 0800-211-819P222009.OCTOBER-DECEMBER Q4http:/.twCell Cycle 細胞週期 命 運 的 羅 盤 腫瘤細胞的DNA指數:DNA Index細胞周期可概分成四個連續的位相:G1,S,G2,M。G1 和G2位相代表細胞正在生長(Growth1,Growth2),M位相的細胞正在進行細胞分裂(Mitosis),而在S 位相的細胞則在進行DNA 合成,染色體的複製(Synthesis)。此外,細胞周期的第五種位相是G0,它是用來描述未受生長因子刺激,不進行增生活動的細胞。DNA含量檢測試流式細胞儀最早,且目前仍然是其最為廣泛的應用之一。癌前惡變細胞一般多出現異倍體,有很多研究證明DNA含量分析對人腫瘤的預後診斷有很高的價值。核酸螢光染料與細胞DNA具有特異性結合,且有一定量効的關係。一個細胞DNA的含量,可以反應出該細胞在週期中所在的位相。在正常組織中,約有九成五的細胞在休息的狀態(G0),這些都是二倍體(Dipolid)的細胞,帶有2C DNA含量;然而在同一時間,組織中可能有少部分細胞,因為受到環境刺激而進入細胞週期的第一位相G1,帶有與G0位相等量的DNA(2C)。G1位相的細胞在數小時之後進入S位相,積極地複製DNA,一旦DNA複製完成,細胞會帶有4C的DNA含量,正常細胞具有較恒定的DNA 含量,而細胞癌變過程中結構或染色體的異常是很常見的。這種變化在流式分析中以DNA 倍體指數的形式表現出來,這一指數對於腫瘤的早期診斷,交界瘤、間葉組織腫瘤的良惡性判斷提供了重要的輔助指標。將正常細胞與腫瘤細胞同時進行DNA 含量分析,如果只有一個G0/G1 峰,表示腫瘤細胞帶有與正常細胞等量的DNADNA 指數為1.0;如果出現兩個G0/G1峰,則相比可得腫瘤細胞的DNA 指數,腫瘤細胞螢光強,DNA 指數大於1.0,”Hyperploid”,腫瘤細胞螢光弱,DNA 指數小於1.0,”Hypoploid”,此外,如果腫瘤細胞的G0/G1峰恰好與G2/M峰重疊,則DNA 指數為2.0,”Tetraploid”。DNA含量vs 細胞週期進入細胞週期最後的G2與M位相。細胞在G2/M位相時,基本上維持4C含量,直到細胞分裂完成,母細胞一分為二,每個子細胞帶有2C DNA含量。在流式細胞分析術中,由於螢光強度與DNA含量成正比,一個在G2/M位項的細胞所發出的螢光強度,其強度是一個在G0/G1細胞的兩倍,而一個S細胞所發出的螢光強度是位居兩者之間,依此原則,我們可以約略出整個族群中三種位相細胞的分部情形。DI 值=樣品 G0/G1 期細胞峰平均螢光道值/正常二倍體標準細胞 G0/G1 期細胞峰平均螢光道值基礎篇現正上映BD-Cell Cycle 細胞週期台北(02)2720-2215 新竹(03)5307-756 台中(04)2463-3591 嘉義(05)2844-162 台南(06)2890-665 高雄(07)3470-143 服務專線 0800-211-819P232009.OCTOBER-DECEMBER Q4http:/.tw細胞增值活性:Cell proliferation activity標定S-Phase:BRDU產品資訊特定位相Marker vs 細胞週期腫瘤細胞最主要的惡性特徵是它表現出的惡性增殖。任何細胞的分裂增殖過程,都需要先在細胞核內進行一系列的核酸代謝,大量生 RNA 和 DNA,以控制細胞的新陳代謝和增殖過程。所以細胞增殖能力能從微觀的一個側面反映癌細胞的惡性程度。不同倍體 DNA 的含量測定,又可以進一步證明細胞分裂增殖的能力。通過核酸染料標記 DNA,並由流式細胞儀進行分析,可以得到細胞各個時期的分佈狀態,計算出%G0/G1,%S 及%G2/M,瞭解細胞的增殖能力,在腫瘤病理學研究中,通常以 S 期細胞比率作 判斷腫瘤增殖狀態的指標。由於不同腫瘤細胞的表現型各異,在臨床文獻中,亦有醫師建議使用 S+G2M 兩群細胞所佔的比例,來作腫瘤增殖的指標。瞭解腫瘤的增殖活性可幫助醫師選擇最佳的治療方式,或預估腫瘤細胞的轉移性與復發率等。Bromodeoxyuridine(BrdU)是uridine 的衍生物,由於其結構與thymidine 相似,故可取代thymidine 而結合到DNA 上,因此它便常被應用來標記S-phase 細胞,再利用單株抗體來追蹤以研究被標記細胞之周期動態,藉此決定細胞的Cycling Time、Duration of S Phase、以及Labeling Index,以得知細胞的增殖能力,或研究化療藥物作用機理,是否有時相特異性,並客觀地了解化療藥物對細胞動態學的干擾和影響。貨號 品名 包裝 559619FITC BrdU Flow kit 50 tests 552598APC BrdU Flow kit 50 tests 550891BrdU Solution 25 mg 555627BrdU Purified 100 ug 556028BrdU FITC set(包含isotype control)100 tests 556029BrdU PE set (包含isotype control)100 tests 貨號 品名 包裝 應用 340242Cycletest Plus DNA Reagent Kit 40 tests FLOW 內容:胰蛋白酶除去細胞骨架和核蛋白,RNA 酶:消化細胞內RNA,Spermine 穩定核內染色質,PI:DNA 染劑,緩衝液:收集或冷凍細胞懸液 550825PI/RNase Staining Buffer 100 ml 200 tests FLOW 5599257-AAD Staining Solution 2 ml FLOW C57BL/6 mice 打入1 mg BRDU,在不同的時間點犧牲小鼠。分別取 Thymus 和 Bone marrow 細胞進行染色(BRDU-FITC vs 7-AAD(DNA 染劑)。40 分鐘細胞呈現馬蹄型。此種型態為短時間標定BRDU 的經典型態。隨著時間變常,原本在 S 期的細胞會回到G0/G1,在 4 小時可以觀察到明顯 BRDU+G0/G1週期的細胞。Detection of in vivo-cyclining cellsSub G1G0/G1G2/MS Phase進階篇BD-Cell Cycle 細胞週期Flow非酒精固定配方,細胞不糾結強力推薦台北(02)2720-2215 新竹(03)5307-756 台中(04)2463-3591 嘉義(05)2844-162 台南(06)2890-665 高雄(07)3470-143 服務專線 0800-211-819P242009.OCTOBER-DECEMBER Q4http:/.twBioImage 96 well plate 上樣最快 BALB/c mice 打入 1mg BrdU,經過 24 小時,取出腸道細胞製作成 paraffin 檢體。用 BRDU in situ kit 進行染色。A 圖深藍色點代表正在增值的細胞。B 圖為對 Mice打入PBS之陰性對照組標定M-Pahse:Histone H3(pS28)Cell Cycle Kit Maphase、Sphase 一目瞭然Description Size Cat.No.Histone H3(pS28)AlexaFlour 647 50 tests 558217Histone H3(pS28)AlexaFlour 555 100 tests 558613Histone H3(pS28)AlexaFlour 647 100 tests 558609Histone H3(pS28)AlexaFlour 488 100 tests 558610Histone H3(pS28)V450 50 tests 560606C20.4細胞加入100 ng/ml Colcemid(G2/M 細胞週期抑制劑)(右側右圖),細胞固定打洞後,染色上機。可以發現有加入抑制劑G2/M比例增加(H3 pS28 增加,PI在DNA含量在G2/M增加)。上圖為沒有加入抑制劑。染色質(Chromatin)的濃集對 DNA 複製,修護扮演很重要的角色,Histone 為眾多 DNA 結合蛋白之一,能條控 DNA 濃集。磷酸化 Histone H3 在 ser28 位點對染色體濃集很關鍵,為細胞進入細胞分裂的重要指標。Description Size Cat.No.Cell cycle kit 96 assays 558562包含:Alexa Fluor 488 Mouse anti-BrdU Alexa Fluor 647 Rat anti-Histone H3(pS28)5x Fixation BufferPerm Buffer IIStain Buffer(FBS)PBS(10X)Concentrate Hoechst 33342 SolutionBRDUDNase Confocal image,using the BD Pathway 435 Bioimaging system and a 20 x(0.75 NA)objective,of HeLa cells that were stained with the three kit components,Alexa Fluor 488 Mouse anti-BrdU(pseudo-colored green),Alexa Fluor 647 Rat anti-Histone H3(pS28)(pseudo-colored red)and Hoechst 33342(pseudo-colored blue).Co-staining of Hoechst 33342 and Histone H3(pS28)appears pink.Cell Cycle 細胞週期 BA高通量快速篩檢篇BD-Cell Cycle 細胞週期BrdU in paraffin sections標定S-Phase:BRDUIHC台北(02)2720-2215 新竹(03)5307-756 台中(04)2463-3591 嘉義(05)2844-162 台南(06)2890-665 高雄(07)3470-143 服務專線 0800-211-819P252009.OCTOBER-DECEMBER Q4http:/.twCell Cycle 相關抗體Bioimaging Certified Antibodiesp53,p21,p,19,and p18BD-Cell Cycle 相關抗體Cat.No.DescriptionSizeFunction61252253BP150UGCell Cycle612656ACTIN50UGCell Cycle610746BCL-X50UGApoptosis611528BID50UGApoptosis556321BTA-TUBULIN100UGCell Cycle611730BUB350UGCell Cycle551093CASPASE-250UGApoptosis551234CASPASE-80.1MLApoptosis611510CASPASE-1450UGApoptosis610527CDC25B50UGCell Cycle556576CDC25C100UGCell Cycle612362CDC5L50UGCell Cycle610145CDK250UGCell Cycle559693CDK4100UGCell Cycle552056CDK850UGCell Cycle611570CHK250UGCell Cycle552596