未知肠道杆菌的分离鉴定程序.ppt

标本中未知肠道感染细菌标本中未知肠道感染细菌 的分离鉴定程序的分离鉴定程序 标本标本 脓血便、肛拭子脓血便、肛拭子 选择选择/鉴别培基鉴别培基 生化反应生化反应 血清学鉴定血清学鉴定 克氏双糖铁培养基克氏双糖铁培养基,动力动力-靛基质靛基质-尿素尿素半固体琼脂培养基半固体琼脂培养基 玻片凝玻片凝集试验集试验 SSSS平板平板,中国兰中国兰,EMBEMB平板平板 标本中未知病原性球菌标本中未知病原性球菌 的分离鉴定程序的分离鉴定程序 直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性 观察菌落性状、溶血性、色素 血琼脂平板 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 致病性测定 （凝固酶、耐热核酸酶）标本 血液 脑脊液 肉汤增菌培养 涂片染色镜检 设计性实验 临床标本中病原菌的分离与鉴定 设计性实验 1.脓汁 标本：脓拭子 培养基：血琼脂平板 其他：3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等 2.痰 标本：咽拭子 培养基：血琼脂平板 其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等 3.尿 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等 4.粪便 标本：肛门拭子 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等 脓拭子脓拭子 分离培养（血平板）革兰染色 革兰染色 触酶实验 血浆凝固酶实验 咽拭子咽拭子 革兰染色 革兰染色 胆汁溶菌试验 奥普托辛试验 荚膜染色（石炭酸复红单染）分离培养（血平板）尿液尿液 离心沉淀离心沉淀 15001500转，转，1010分钟分钟 分离培养（EMB平板）革兰染色 革兰染色 克氏双糖铁斜面培养基 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 观察结果 观察结果 观察结果 完成靛基质试验 肛门拭子1/2 EMB平板 克氏双糖铁斜面培养基 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 观察结果 观察结果 完成靛基质试验 玻片凝集试验 1.EMB1.EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）平板（伊红美蓝琼脂培养基）组成：无糖培养基乳糖伊红美蓝 底物 指示剂、抑菌剂 原理：细菌 乳糖 产酸：伊红美蓝 紫黑/紫红 结果：分解乳糖细菌 菌落变黑，有金属光泽 不分解乳糖细菌 菌落无色、半透明（粉色）分解 培养基原理培养基原理 EMB agar 2.2.靛基质试验（吲哚试验）靛基质试验（吲哚试验）组成：蛋白胨水色氨酸 原理：分解 某些细菌有色氨酸酶 色氨酸 吲哚（无色）柯氏 试剂 玫瑰吲哚（红色）结果：液面形成玫瑰红色 吲哚试验吲哚试验 3.3.克氏双糖铁斜面培养基反应试验克氏双糖铁斜面培养基反应试验 组成：无糖培基1份葡萄糖10份乳糖铁盐酚红 营养 底物 底物 底物 指示剂 原理：只分解葡萄糖 产酸（葡萄糖少，产酸量少）分解葡萄糖乳糖 产酸（乳糖多，产酸多）上下层均为黄色 产生H2S铁盐 FeS 培养基成黑色 上层氧化 呈红色 下层缺氧 不氧化 呈黄色 Double suger iron slant 4.4.尿素培养基尿素培养基 组成：基础培基尿素酚红 底物 指示剂 原理：有些细菌产生尿素酶 分解尿素 产氨 结果：分解尿素 培基变红 不分解尿素 培基不变色 Urea slant 肥达试验肥达试验(4 4人人/组组)材料：病人未知血清：材料：病人未知血清：1#1#，2#2#，3#3#菌液：菌液：O O、H H、PAHPAH、PBHPBH（已知（已知AgAg）每组每组1 1块多孔板，标记块多孔板，标记 每人每人2 2支吸管支吸管 1 2 3 4 5 6 O Ag H Ag PAH PBH 1 2 3 4 5 61 2 3 4 5 6 NSNS（mlml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.50.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 未知血清未知血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.50.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (1:10)(1:10)1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 菌液菌液(摇匀摇匀)0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.50.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (4(4种，种，1 1种种/人人)1:401:40 1:801:80 1:1601:160 1:320 1:320 1:640 1:640 (阴性对照阴性对照)3737水浴过夜水浴过夜 方法方法 弃弃0.5ml0.5ml于消毒缸于消毒缸 肥达试验肥达试验 H H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底凝集：絮状，以疏松大团沉于管底 O O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底 凝集程度的判定以凝集程度的判定以“”、“”号表示号表示 上清完全透明，细菌全部形成凝集块上清完全透明，细菌全部形成凝集块 细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊 5050细菌形成凝集，液体半澄清细菌形成凝集，液体半澄清 仅少数细菌凝集，液体比较混浊仅少数细菌凝集，液体比较混浊 液体均匀混浊，无凝集（沉于管底，形成圆液体均匀混浊，无凝集（沉于管底，形成圆 形沉淀，边缘整齐）形沉淀，边缘整齐）以呈现凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价以呈现凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价 1 2 3 4 5 6 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 对照 O +-H +-PAH +-PBH +-肥达试验肥达试验 肥达反应肥达反应 1 2 3 4 5 O 1:160 1:320 1:160 1:40 1:40 H 1:320 1:80 1:80 1:80 1:320 PAH 1:40 -1:320 1:80 1:320 PBH -1:80 1:80 1:40 1:320 PCH -1:40 -伤寒 伤寒早期 副甲 阴性 回忆反应疫苗接种 肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）材料材料 1.1.菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物 2.2.伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水 方法方法 血清 生理盐水