家禽血液样品采集.doc

辽东学院 家畜生理学 课实验指导书 目录-----------------------------------------1 实验一--------------------------------------2 实验二--------------------------------------5 实验三--------------------------------------9 实验四--------------------------------------12 实验五--------------------------------------16 实验六--------------------------------------20 实验七--------------------------------------23 实验八--------------------------------------26 实验九--------------------------------------29 参考文献-----------------------------------33 实验一 家禽血液样品采集 1. 实验目的及要求： 1.1 实验目的：了解家畜血样采集的方法 1.2 实验要求： ①学会采血针和注射器的使用方法 ②学会鸡冠采血法 ③学会翼下静脉采血法 1.3 实验规定学时：（ 1.5学时） 1.4 实验性质：综合 2. 实验原理： 静脉又称容量血管，其内含血量较多且流速较慢，位于腋窝部的翼下静脉具此特点，此静脉易找到，在此可采血10~20ml。 3. 实验仪器、装置、工具及主要材料 鸡、脱脂棉、酒精、采血针、注射器、抗凝剂 4. 实验方法与步骤 鸡的采血方法 （1）鸡冠采血法 用于需要少量血液的采血，用采血针或针头刺破鸡冠吸取血液，然后消毒伤口。 （2）翼下静脉采血法 ①先将鸡侧卧保定，露出腋窝部，拔去该部羽毛，可见翼下静脉。 ②压迫翼下静脉的近心端，使血管怒张，消毒后，实验者手持有针头的注射器，由翼根向翅膀方向沿静脉平行刺入，见回血后抽出血液。 一般，一只成年鸡可采血10~20ml血，且注意抽血时一定要缓慢。采完后要压迫止血。 5. 注意事项 采血的顺序一定要从翼尖端逐渐向翼根处，否则开始就从翼根处采血，易造成淤血，没法继续采血。 6. 预习要求 复习血液及血管的结构与功能的知识。 7.问题讨论 翼下静脉采血时抽血为什么要缓慢？ 实验二 红细胞渗透性实验 1. 实验目的及要求： 1.1 实验目的：了解红细胞的特性之一—渗透脆性 1.2 实验要求： ①学会不同浓度溶液的配制 ②学会测定红细胞的渗透脆性的方法 1.3 实验规定学时：（ 1.5学时） 1.4 实验性质：综合 2. 实验原理： 正常的红细胞系混悬于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞失去内部液体而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水分进入红细胞，使红细胞膨大，继续进入红细胞发生破裂溶解，形成溶血。 此实验即是测定红细胞对低于0.9%NaCl溶液（等渗溶液）的耐受性。耐受力高者，红细胞不易破裂，即脆性低；反之，耐受力低者，红细胞易于破裂，即脆性高。 3. 实验仪器、装置、工具及主要材料 试管、试管架、吸管、鸡或兔新鲜血（或去蛋白血）、1%NaCl溶液、蒸馏水等 4. 实验方法与步骤 （1）先将试管分别排列在试管架上，按下表把1%NaCl稀释成不同浓度的低渗溶液，每管溶液均为2ml。 试管号 稀释度 1 2 3 4 5 1%NaCl(ml) 1．40 1．30 1．20 1．10 1．00 蒸馏水（ml） 0．60 0．70 0．80 0．90 1．00 NaCl浓度(%) 0．70 0．65 0．60 。055 0．50 6 7 8 9 10 0．90 0．80 0．70 0．60 0．50 1．10 1．20 1．30 1．40 1．50 0．45 0．40 0．35 0．30 0．25 （2）每支试管中加入大小等量的血样1滴，轻轻混匀静止1小时。 （3）观察结果： ①上层清液无色，管底为混浊红色，表示红细胞下沉，没有溶血。 ②上层呈淡红色，管底为混浊红色，表示部分红细胞破裂溶解，为不完全溶解。 ③管内溶液完全呈透明红色，管底无红细胞沉积，为完全溶血。 依上述说明，判定出开始溶血及开始完全溶血的NaCl浓度百分率，并记录。 5. 注意事项 （1）配制NaCl的各种溶液的浓度必须准确。 （2）各管中所加入的血滴大小应尽量相等并充分摇匀，且勿用力振荡。 6. 预习要求 复习有关红细胞的生理特性的有关知识 7.问题讨论 红细胞溶血的原因是什么？ 实验三 血红蛋白的测定 1. 实验目的及要求： 1.1 实验目的：熟悉用比色法测定血红蛋白的方法 1.2 实验要求： ①学会正确使用血红蛋白计。 ②学会测定血红蛋白含量的方法 1.3 实验规定学时：（ 1学时） 1.4 实验性质：验证 2. 实验原理： 血红蛋白的颜色随结合氧量多少而改变，不利于比色，但血红蛋白与作用稀盐酸生成棕色的高铁血红蛋白较稳定，可与标准比色板比色，从而测得血红蛋白的含量。通常以每100ml血液中含血红蛋白的克数表示。 3. 实验仪器、装置、工具及主要材料 血红蛋白计、采血针、酒精、脱脂棉、0.1mol/L盐酸、蒸馏水等 4. 实验方法与步骤 （1）加盐酸 将0.1mol/L盐酸加入测定管中至刻度“2”处。 （2）采血并加入测定管 用酒精棉球消毒动物的采血部位后，用采血针刺破皮肤，用干棉球擦去第一滴血，待第二滴血流出一大滴时，用吸血管插入流出的血滴深处，吸血至刻度20mm3处，用干棉球擦净吸血管周围的血液，将血液吹入测定管的0.1mol/L盐酸中。用玻璃棒将盐酸和血液混匀，放置10min. （3）稀释、比色 向测定管中加蒸馏水，逐滴加，每次加蒸馏水后，都要摇匀，再插入比色箱中进行比色。这样，测定管中的颜色逐渐变淡，直至与比色箱中的标准比色板相同为止。 （4）读数 从比色箱中取出测定管，读出液体表面的刻度。两面均有刻度。一边的刻度表示克数，如液体表面刻度为15处，表示100ml血液中含有15g血红蛋白；另一边的刻度表示百分率。（可参照使用说明书进行克数与百分率的换算）。 （5）清洗 实验完毕应立即清洗洗涤干净使用过的仪器。 5. 注意事项 (1)血液和盐酸作用的时间不可少于10min，否则反应不彻底，结果不准确。 (2)加蒸馏水时要逐滴，以防稀释过头。 (3)比色最好在自然光下，并避免至射的阳光。 6. 预习要求 复习有关血红蛋白的有关知识 7.问题讨论 血红蛋白的生理功能 实验四 血液凝固 1. 实验目的及要求： 1.1 实验目的：了解血液凝固的基本过程及影响血凝的一些因素 1.2 实验要求： ①了解血液凝固的基本过程 ②了解影响血凝的一些因素 1.3 实验规定学时：（ 1学时） 1.4 实验性质：验证 2. 实验原理： 血液流出血管后，迅速发生凝固。血液凝固是一系列复杂的生化过程，大致可分为三个主要步骤，即①凝血酶原激活物的形成；②凝血酶原激活物催化凝血酶原转变为凝血酶③凝血酶催化纤维蛋白原转变为纤维蛋白，从而形成血块。在这三个主要步骤中都需要Ca2+的参与。 3. 实验仪器、装置、工具及主要材料 鸡新鲜血、试管、试管架、吸管、烧杯、恒温水浴箱、秒表、3.8%柠檬酸钠溶液、5%草酸钾溶液、肝素、液体石蜡、1%氯化钙溶液、干棉球 4. 实验方法与步骤 （1）影响血凝的物理因素： ①取试管3支，一支管内加少量棉花，一支管内涂少许液体石蜡，一支空白管作对照。 ②将以上三管分别加入新鲜血2ml，每30s轻轻地倾斜试管一次，分别纪录三管的凝血时间，分析凝血时间不同的原因。 （2）温度对血凝的影响：取试管2支，分别加入新鲜血2ml。一管置于37℃水浴中，一管放在盛有冰块的水杯中，比较两管凝血时间。为什么不同？ （3）钙离子对血凝的影响： ①取试管3支，一支放入3.8%柠檬酸钠溶液6滴，一支加入5%草酸钾溶液6滴，一支空白对照。然后，再向各管分别加入新鲜血液2ml，混合后观察血凝情况，纪录之。 ②加入柠檬酸钠和草酸钾的试管分别再加入1%氯化钙溶液2-4滴，结果如何？为什么？ （4）肝素的作用：取1支试管放肝素16单位，再加入新鲜血液2ml，摇匀后观察其结 果。 （5）割断动物的血管，将血液放入烧杯中，同时，用试管刷迅速搅动，以除去血中的纤维蛋白；将除去纤维蛋白的血液静置后，观察其能否凝固。 5. 注意事项 加柠檬酸钠和草酸钾的量要等同，否则现象不明显。 6. 预习要求 复习有关血液凝固的相关知识 7.问题讨论 血液凝固的三个过程 实验五 血型鉴定 1. 实验目的及要求： 1.1 实验目的：掌握ABO血型的鉴定方法 1.2 实验要求： ①掌握ABO血型的鉴定方法 ②正确检查自己的血型 1.3 实验规定学时：（ 1学时） 1.4 实验性质：验证 2. 实验原理： 红细胞膜上含有凝聚原，血浆内含有凝聚素。当相应的凝聚原与凝聚素相互作用时，就产生红细胞的凝聚反应。 3. 实验仪器、装置、工具及主要材料 载玻片、采血针、酒精、棉球、牙签、标准血清 4. 实验方法与步骤 （1）准备标准血清 取一双凹载玻片，用玻璃铅笔分别在左上角和右上角写上“A”和“B”进行标记，然后分别向内各加一滴标准血清A凝聚素和标准血清抗B凝聚素。 （2 ）消毒 先将耳垂轻柔几下，使其充血，并用酒精棉球消毒，待酒精挥发后。 （3）采血 用采血针刺入耳垂皮肤，出血后用牙签的两端分别取一滴血，各自分别与标准血清A凝聚素、标准血清B凝聚素相混合，进行观察。 （4） 观察现象 标准血清 血型 抗A凝聚素 抗B凝聚素 A型 B型 AB型 O型 ＋ － ＋ － － ＋ ＋ － 注：“＋”表示发生凝聚反应；“－”表示不发生凝聚反应。 （5）确定结果 请记录个人的血型。 5. 注意事项 一定要用牙签的两端分别取血与标准血A、B凝集素相混。 6. 预习要求 复习血型的相关知识。 7.问题讨论 ABO血型在临床上的生理意义。 实验六 心音听诊 1. 实验目的及要求： 1.1 实验目的：听取各种家畜的正常的心音及初步掌握听诊的方法 1.2 实验要求： ①了解各种家畜（马、牛、羊）的听诊部位 ②学会测家畜的心率方法，并能区别第一心音和第二心音 1.3 实验规定学时：（1学时） 1.4 实验性质：验证 2. 实验原理： 在一个心动周期中可产生两个心音。当心室收缩时，迫使房室瓣关闭，产生第一心音；心室舒张时则半月瓣关闭，而产生第二心音。 3. 实验仪器、装置、工具及主要材料 试验家畜、听诊器 4. 实验方法与步骤 （1）听诊部位 各种家畜心脏的位置一般都在第3~6肋之间，稍偏左侧。因此听取心音时应站在动物的左侧。 （2）牛、马心音的听诊： 使物处于自然站立的姿势，并作适当的保定，以免动物走动和踢咬。将动物左前肢向前移半步，实验者以右，手放在动物的肩