2023年党支部制度精华版.docx

党支部制度(精华版) 1.生物体内哪些机制保证了dna复制的保真性. dna聚合酶的校对作用；rna引物起始复制可减少复制错误；修复系统有多种机制（光修复、切除修复、错配修复、易错修复、sos修复）和酶。 2.有一个被认为是mrna的核苷酸序列，长3000个碱基，你怎样才能；（1）证明此rna是mrna而不是trna或rrna（2）确定它是真核还是原核mrna. 答。①使用oligodt，对这个rna做反转录，如果获得相应的cdna，那这个序列就是真核mrna，因为真核mrna的末端的具polya尾巴可以和oligodt互补。否那么可能是trna，rrna或原核mrna。②在被侧序列的5'和3'端分别加上特异的寡聚接头并用rna酶连接，以5'端特异寡聚接头设计的引物及3'端特异接头序列扩增被测序列。测序并进行序列比对分析鉴定其是否有sd序列，如果具有sd序列那么为原核mrna. 3.真核生物组蛋白修饰有哪些。以目前的研究成果，在活泼转录的基因启动子区哪种组蛋白修饰最常见。 真核生物组蛋白修饰有。甲基化、乙酰化、酰胺化，以及对应的去掉这些修饰的去乙酰化、去甲基化等。 最常见的是乙酰化，乙酰化中和了组蛋白尾巴的正电荷，降低了它与dna的亲和性，导致核小体构象发生有利于转录调节蛋白与染色质相结合的变化，从而提高了基因转录的活性。 4.说明真核生物表达调控的不同层次。并请说明最重要的调控环节 （1）dna和染色体水平。基因重排、基因扩增、dna修饰、基因封闭、核小体的修饰（染色体结构）。 （2）转录水平。包括转录起始、延伸的弱化、终止都会对mrna前体水平产生影响。 （3）转录后水平。真核生物转录和翻译不偶联，转录出的mrna前提经加工才能成熟为翻译模板mrna，此过程包括剪切、修饰、编辑、5'和3'端的修饰及转运到翻译场所等。 （4）翻译水平。包括核糖体的磷酸化/去磷酸化调节，poly（a）的调节，移码和通读等。 （5）翻译后水平：包括翻译产物的剪切、修饰（如糖基化、磷酸化、切除信号肽、脂化及构象形成、转运和装配形成复合蛋白体） （6）mrna降解的调控，随生长发育和外界环境改变、细胞中蛋白质种类也在不断变化，原有mrna要降解并以新mrna代之，因此mrna是有一定寿命的，细胞中有控制mrna寿命的机制。转录水平的调控是重要的调控水平，真核生物在转录水平上的调节主要是通过反式作用因子、顺式作用元件和rna聚合酶的相互作用来完成的。当反式作用因子和顺式元件结合后，将影响转录起始复合物的形成，从而影响转录的起始和效率。 5.分别说出7中以上rna的功能 （1）rna作为病毒基因组。在有些病毒中不含dna，而是以rna作为遗传信息的携带者。 （2）rna在蛋白质生物合成中起重要作用。mrna起信使和模板的作用，trna起转运氨基酸和信息转换的作用，rrna起核糖体装配和催化的作用。 （3）rna参与转录后加工、编辑和修饰。rna转录后加工、编辑和修饰依赖于各类小rna和其蛋白质复合物。 （4）rna具有重要的催化功能和其它持家功能。 （5）rna对基因表达和细胞功能具有重要调节作用，如rna干扰。 （6）rna在生物进化中起重要。作用核酶可以自身切割、剪接，切割其它rna，合成肽键。 （7）非编码rna是一类不编码蛋白质但具有功能的rna分子，它们在生物体重要生命活动中发挥着极广泛的调控作用。 6.以乳糖操纵子为例画图说明原核基因的组织方式，操纵子的正调控和负调控。 操纵子的根本组成（组织方式）： 结构基因群。乳糖操纵子含有lacz、lacy和laca3个结构基因。lacz基因编码β-半乳糖苷酶，将乳糖分解为半乳糖和葡萄糖；lacy基因编码半乳糖转移酶，使环境中的乳糖进入细胞内；laca编码半乳糖苷乙酰基转移酶，消除lacy对细胞造成的毒性。 启动子区。操纵子至少有一个启动子，一般在第一个结构基因5'侧上游，控制整个结构基因群的转录。 操纵区。局部序列与启动子序列重叠。阻遏蛋白与操纵区结合，就阻碍了rna聚合酶与启动子 的结合及其后基因的转录起始，从而阻遏了lac基因的表达。 laci基因：laci的产物称为lac阻遏蛋白，与操纵区结合后能减弱或阻止其调控的基因转录。cap位点：被camp活化的cap与cap位点结合，可以使得转录效率大幅提高。 操纵子的正调控和负调控。 laci基因在其自身的启动子pi控制下，低水平、组成性表达产生阻遏蛋白r，r与操纵子ｏ结合，阻碍了rna聚合酶与启动子plac的结合，阻止了基因的转录起动。r的阻遏作用不是绝对的，r与ｏ偶尔解离，使lac基因得以转录。 当有乳糖存在时，乳糖受β-半乳糖苷酶的催化转变为别乳糖，与r结合，使r失去与ｏ的亲和力，与ｏ解离，从而解除了阻遏蛋白的作用，基因转录开放。 当葡萄糖存在时，降低了camp的浓度，使得cap无法与cap位点结合，基因转录无法高效进行。 7.如果一种突变的菌株合成的σ因子与核心酶不易解离，对rna合成可能产生什么影响。rna聚合酶全酶与dna模板的结合比核心酶紧密得多。rna合成起始之后，突变的σ因子不能及时解离，极大地降低了rna聚合酶沿模板移动的速度。因此该突变株的rna合成比野生型慢得多。 2.简述真核生物和原核生物mrna转录过程在启动子结构、启动子识别、转录终止和转录后加工方面的差异。 （1）原核生物mrna以多顺反子的形式存在，真核生物mrna一般以单顺反子形式存在。真核生物mrna有5'端帽子结构和3'端的poly（a）尾巴，真核细胞的前mrna有许多内含子（会被加工剪接为成熟的mrna）。 （2）原核生物中rna聚合酶可以直接起始转录合成rna，真核生物那么不能。在真核生物中，三种rna聚合酶都必须在蛋白质转录因子的协助下才能进行rna的转录。 （3）原核细胞转录终止需要一种终止因子ρ的帮助。真核dna转录单元的3'端均含富含有at的序列，在相隔0～30bp之后又出现tttt顺序（通常是3～5个t），这些结构可能与转录终止或者与3'端添加多聚a顺序有关。 （4）原核生物mrna的转录与翻译一般是偶联的，真核生物转录的mrna前体需经过转录后加工，加工为成熟的mrna与蛋白质结合生成信息体后才开始翻译。 （5）原核生物mrna半衰期短。真核生物mrna的半衰期较长。 3.简述真核生物和原核生物蛋白质翻译过程在mrna结构、起始密码子识别方面的差异。 结构。原核生物mrna一般5'端有一段不翻译区，3'端有一段不翻译区，中间是蛋白质的编码区，一般编码几种蛋白质。真核生物mrna（细胞质中的）一般由5'端帽子结构、5'端不翻译区、翻译区（编码区）、3'端不翻译区和3'端poly（a）尾巴构成。真核生物mrna通常都有相应的前体。从dna转录产生的mrna前体经过加工为成熟的mrna。 起始密码子识别：（1）真核生物核糖体是80s（40s+60s）；起始因子种类多；起始氨酰-trna不需甲酰化，mrna没有sd序列；mrna在小亚基上需5'端帽子结构和帽结合蛋白；mrna先于氨酰-trna结合到小亚基上.（2）原核生物核糖体是70s（30s+50s）；起始因子种类少；起始氨酰-trna需甲酰化；有sd序列；小亚基与起始氨酰-trna结合后，才与mrna结合. 7.请结合自己所在实验室的研究工作，说明分子生物学在本专业领域的应用。 在分子水平上研究生命现象的科学。通过研究生物大分子（核酸、蛋白质）的结构、功能和生物合成等方面来说明各种生命现象的本质，如遗传信息的传递，基因的结构、复制、转录、翻译、表达调控和表达产物的生理功能，以及细胞信号的转导等。 分子生物学理论及技术在各个研究过程中具有重要作用，例如pcr技术。在实验中pcr技术主要用于在生物体外扩增特定的dna片段，鉴定目的条带等，这种方法简便、快速。 pcr主要由变性--退火--延伸三个根本反响步骤构成：①模板dna的变性：使模板dna双链解离为单链，以便与引物结合；②模板dna与引物的退火：模板dna经加热变性成单链后，降低温度使引物与模板dna单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反响原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保存复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的半保存复制链，重复循环变性--退火--延伸三个过程就可获得更多的“半保存复制链〞，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～ 4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。从而可以用电泳进行 真核生物。翻译与转录不偶联，mrna在核内合成、经加工修饰到胞液指导蛋白质合成，mrna半寿期约4-6小时（最短1小时，最长48小时）较稳定，易别离。mrna为单顺反子，只有一个起始及一个终止点，一个mrna分子只合成一种蛋白质；中间有内含子。（插入顺序）需加工剪掉；起始与肽链延长均需要gtp和atp。延伸阶段gtp水解后可被atp再磷酸化，两种延伸因子可同时与核蛋白体结合，gtp水解后ef-1不掉下来无mrna时小亚基先与起始甲酰蛋氨酰，只有一种终止因子，为二聚体，能识别终止密码并与gtp相互作用。合成速度慢。 原核生物。翻译与转录偶联，边转录，边翻译，边降解。mrna半寿期1-3分钟，不稳定，不易别离。为多顺反子，一个mrna分子合成几种蛋白质，需要gtp，。gtp水解后ef-tu从核蛋白体上掉下来。有三种终止因子。合成速度快。 3.蛋白翻译是怎么终止的。 蛋白质翻译的根本过程为：识别、水解、解离 肽链的延伸过程中，当终止密码子出现在核糖体的a位时，没有相应的aa-trna能与之结合，而释放因子能识别这些密码子并与之结合，水解p位上多肽链与trna之间的二酯键。接着，新生的肽链和trna从核糖体上释放，核糖体大、小亚基解体，蛋白质合成结束。 7.简要说明沉默突变、致死突变、渗漏突变、进化突变的原因 ⑴沉默突变：主要因为密码子的简并性，点突变不引起氨基酸的变化；或者个别氨基酸改变为结构和性质相似的氨基酸，那么不影响表形，即基因型（genotype）改变表现型（phenotye）不变。⑵致死突变：关键氨基酸改变，如酶的活性中心突变，或者发生无义突变，使编码的蛋白质功能丧失，影响生物存活。 ⑶渗漏突变。某个氨基酸改变，但基因产物并无重大改变，如酶的km和vmax改变。可使生物适应环境或丧失某些功能，可产生新种。 ⑷进化突变。发生了有利于物种生存的结果，使生物进化。 9.dna复制中都包括那些酶系统和蛋白因子，这些酶在复制中的各自作用是什么。是通过那些试验现象发现的。 （1）解旋酶：dna复制时，解旋酶在atp的作用下可促使dna母链不断解开形成单链； 单链dna结合蛋白：防止单链dna形成发卡结构，保持伸展状态，保护单链dna不被水解；dna拓扑异构酶i：使dna磷酸二酯键单链断裂断裂，形成dnanick，使dna可以旋转以释放解链时的张力； dna拓扑异构酶ii：使dna复制完毕后“互锁〞的两个子代环状dna解离； 引物酶：引物酶以单链dna为模板，利用核糖核苷酸合成rna作为dna合成的引物；