标签蛋白酶切位点.doc

氨基酸的简写符号 名 称 三字母符号 单字母符号 名 称 三字母符号 单字母符号 丙氨酸（alanine） Ala A 亮氨酸（leucine） Leu L 精氨酸（arginine） Arg R 赖氨酸(lysine) Lys K 天冬酰胺（asparagine） Asn N 甲硫氨酸（methionine） Met M 天冬氨酸（aspartic acid） Asp D 笨丙氨酸（phenylalanine） Phe F 半胱氨酸（cysteine） Cys C 脯氨酸（proline） Pro P 谷氨酰胺（glutanine） Gln Q 丝胺酸（serine） Ser S 谷氨酸（glutamic acid） Glu E 苏氨酸（threonine） Thr T 甘氨酸（Glicine） Gly G 色氨酸（tryptophan） Trp W 组氨酸（histidine） His H 酪氨酸（tyrosine） Tyr Y 异亮氨酸（isoleucine） Ile I 颉氨酸（valine） Val V 表 5 融合蛋白的剪切方法 剪切的方法 剪切位点序列 注释 化学法 溴化氰 Met^ 需要70%甲酸，室温 羟胺 Asn^Gly 在pH为9条件下，需要加热，45℃ 甲酸 Asp^Pro 70%甲酸，需要加热 酶法 肠激酶 Asp-Asp-Asp-Asp-Lys^ 重组的蛋白酶，为内切酶，如果在赖氨酸后为脯氨酸则不能剪切，在其它的碱性氨基酸残基后有非特异性剪切，具有活性的pH范围为4.5到9.5，温度范围为4℃到45℃ 凝血因子Ⅹa蛋白酶 Ile-Glu/Asp-Gly-Arg^ 如果在精氨酸后为脯氨酸和精氨酸则不能剪切，为内切酶，在Gly-Arg后存在非特异性剪切 凝血酶 Leu-Val-Pro-Arg^Gly-Ser 牛来源的含有其它蛋白质，为内切酶，存在非特异性的剪切，生物素化后可用链霉抗生物素蛋白亲和层析清除 PreScission蛋白酶 Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln^Gly-Pro GST融合的鼻病毒3C蛋白酶，为内切酶，4℃具有最优活性 rTEV蛋白酶 Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln^Gly 重组的烟草蚀纹病毒蛋白酶，具有8个氨基酸识别位点，高特异性，为内切酶，在宽的温度范围里具有活性，与His-tag融合后，酶切后使用金属螯合亲和层析清除 二肽基氨基肽酶 (Xaa)2n^Xaa-Pro, (Xaa)2n^Xaa- Xaa –Pro, (Xaa)2n^Lys/Arg/Gln 为外切酶，当终止氨基酸为Gln时，可在谷氨酰胺环转移酶和焦谷氨酰胺肽酶的作用下去掉Gln，可产生天然的目标蛋白质，特异性强