小鼠口服急性毒性试验等.ppt

食品毒理学食品毒理学 实验实验 课程简介：课程简介：本实验课程主要面向“食品质量与安全”等本实验课程主要面向“食品质量与安全”等专业本科生，是食品类专业课程专业本科生，是食品类专业课程食品毒理学食品毒理学的实践环节，共有学时数的实践环节，共有学时数1616学时，教学内容包括学时，教学内容包括“小鼠口服急性毒性试验”等。实验教学中主要“小鼠口服急性毒性试验”等。实验教学中主要为技能型实验环节，以提高学生应用毒理学基本为技能型实验环节，以提高学生应用毒理学基本实验测试食品及药品毒性的动手操作应用能力。实验测试食品及药品毒性的动手操作应用能力。目录目录 实验实验1 毒理学实验动物基本操作技术训练毒理学实验动物基本操作技术训练 实验实验2 小鼠口服急性毒性试验小鼠口服急性毒性试验 实验实验3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 实验实验4 小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验 实验实验1 1 毒理学实验动物基本操作技术训练毒理学实验动物基本操作技术训练 1、了解常用实验动物的种类、特性；、了解常用实验动物的种类、特性；2、掌握大鼠、小鼠、家兔的捉拿与固定技术；、掌握大鼠、小鼠、家兔的捉拿与固定技术；3、学会大、小鼠性别的辨认；、学会大、小鼠性别的辨认；4、掌握大、小鼠灌胃染毒技术，家兔被皮技术；、掌握大、小鼠灌胃染毒技术，家兔被皮技术；5、熟悉大、小鼠生物材料采集方法；、熟悉大、小鼠生物材料采集方法；6、掌握大鼠断头处死、小鼠脱颈椎处死方法；、掌握大鼠断头处死、小鼠脱颈椎处死方法；7、对大、小鼠进行常规解剖，辨认各脏器及正常、对大、小鼠进行常规解剖，辨认各脏器及正常解剖位置解剖位置 【实验目的实验目的】【实验内容与方法实验内容与方法】（一）实验动物的捕捉固定（一）实验动物的捕捉固定【实验内容与方法实验内容与方法】（二）实验动物性别鉴定（二）实验动物性别鉴定（三）染毒技术（三）染毒技术 （四）动物的麻醉与外死（四）动物的麻醉与外死 （1）颈椎脱臼法 （2）断头法 （3）击打法 （4）急性大出血法 （5）药物致死法 实验实验2 2 小鼠口服急性毒性试验小鼠口服急性毒性试验 【实验目的实验目的】1、学习急性毒性试验的试验设计原则，、学习急性毒性试验的试验设计原则，2、学会经口灌胃技术、随机分组方法，、学会经口灌胃技术、随机分组方法，3、掌握主要的、掌握主要的LD50计算方法和急性毒性分计算方法和急性毒性分级标准。级标准。选择健康的试验动物，根据体重按随机分组的方选择健康的试验动物，根据体重按随机分组的方法，依据法，依据LD50计算的设计原则将动物分成数个染计算的设计原则将动物分成数个染毒组。一次或毒组。一次或24h内多次给予受试物后，了解动物内多次给予受试物后，了解动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试物毒性反的特征以及可能的死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死量（应与剂量的关系，求出半数致死量（LD50），并），并根据根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。值将受试物进行急性毒性分级。【实验原理实验原理】健康小鼠或大鼠的选择，性别的辨认。健康小鼠或大鼠的选择，性别的辨认。称重、编号和随机分组方法。称重、编号和随机分组方法。受试化学物溶液的配制。受试化学物溶液的配制。小鼠和大鼠经口灌胃技术。小鼠和大鼠经口灌胃技术。毒性体征的观察、毒性体征的观察、LD50计算和毒性分级。计算和毒性分级。【实验内容实验内容】LD50LD50计算计算 根据受试物的种类由指导教师事先确定采根据受试物的种类由指导教师事先确定采用何种方法用何种方法(改进寇氏法，霍恩法等改进寇氏法，霍恩法等)进行进行计算，并在试验前设计剂量分组和每组动计算，并在试验前设计剂量分组和每组动物数。选择适宜的方法求出物数。选择适宜的方法求出LD50及及95的可信限范围。如毒性反应存在性别差异，的可信限范围。如毒性反应存在性别差异，应分别求出不同性别动物的应分别求出不同性别动物的LD50值。值。结果评定结果评定 根据实验动物中毒体征、死亡时间和特征、根据实验动物中毒体征、死亡时间和特征、LD50，接受试物种类，分别参照相应的，接受试物种类，分别参照相应的经口急性毒性分级标准进行评定，判断该经口急性毒性分级标准进行评定，判断该受试物的毒性大小及毒性特征。受试物的毒性大小及毒性特征。实验实验3 3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 【实验目的实验目的】1、了解骨髓细胞微核实验及毒理学意义 2、掌握实验原理其实验方法。外来化学物干扰细胞的有丝分裂或使染色体发生断裂损伤，使细胞在有丝分裂后期受损的染色体或其片断不能及时进入细胞核，而留在细胞质中，形成大小为主核1/20 至1/5 的微核。骨髓嗜多染红细胞为刚刚成熟排出主核的细胞，细胞中如果有微核形成则会很清晰观察到。检测的遗传学终点：染色体分离改变或完整性改变。毒理学意义：由于微核是骨髓细胞染色体断裂后产生，所以可用来检测化学物是否具有致突变作用。【实验原理实验原理】（一）实验动物的处理 （二）微核分析片准备 （三）固定 （四）染色 【实验方法与步骤实验方法与步骤】（五）（五）结果观察与计算结果观察与计算 先于低倍镜下选择细胞分布均匀、染色均匀，细胞无损区域，再在油镜下计算500个嗜多染细胞的微核率。微核出现率微核出现个数/细胞数100 正常对照正常对照 实验示范实验示范 （六）结果评价（六）结果评价 将各组微核率进行X2检验，判断其影响程度，还可进行剂量反应关系评价 实验实验4 4 小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验 【实验目的实验目的】1、掌握小鼠精子畸形试验方法：包括动物选择、剂量分组、取材、制片、染色、观察整个过程；2、熟悉畸形精子形成的原因：控制精子形态的基因受损、精子发生过程受影响、能量提供不足、精子膜受损等。二、实验器材、试剂二、实验器材、试剂 （一）器材 生物显微镜、解剖剪、镊子、表面皿、离心管、小漏斗、吸管、滴管、载玻片、擦镜纸等。（二）试剂 1、1%伊红染色液：称取伊红1g溶于100ml蒸馏水中。2、生理盐水、甲醇（A.R）1、剂量设计 2、染毒 3、制片 4、固定 5、染色 6、观察与计数 【实验内容与步骤实验内容与步骤】结果统计与分析结果统计与分析