§5.3《血红蛋白的提取和分离》导学案班级：高二（）班姓名：【学习目标】1.概述凝胶色谱法、电泳法分离大分子的基本原理。2.知道缓冲溶液的作用。3.尝试对血液中血红蛋白进行提取和分离,体验从复杂体系中提取生物大分子的基础过程和方法。4.掌握对样品的预处理、色谱柱制作及装填等操作,进行样品的加入和洗脱并最终分离出血红蛋白。【自主学习】一、基础知识1.蛋白质的分离依据:蛋白质特性的差异,如分子的形状和_____、所带_____的性质和多少、溶解度、_________和对其他分子的亲和力等。2.凝胶色谱法:(1)概念:也称做___________,是根据____________________分离蛋白质的有效方法。(2)凝胶的特点形态:微小的_________组成:大多数由_____________构成结构:内部有许多___________(3)常用凝胶:_______和琼脂糖。(4)分离原理。①相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程_____,移动速度_____,通过凝胶的时间_____。②相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶_____移动,路程_____,移动速度_____,通过凝胶的时间_____。3.缓冲溶液:(1)作用:在一定范围内,缓冲溶液能够抵制______________对溶液pH的影响,维持pH基本不变。(2)配制:通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的_________就可以制得____________________的缓冲液。(3)意义:为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程,保持_____________与体内环境中的pH基本一致。4.电泳:(1)概念:带电粒子在_____的作用下发生_____的过程。(2)原理。①带电粒子:许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有_______的基团,在一定的pH下,这些基团会带上___________。②迁移动力与方向:在电场的作用下,带电分子会向着与其_____________的电极移动。③分离依据:电泳利用了待分离样品中各种分子________________以及分子本身的_____、_____的不同,使带电分子产生_______________,从而实现样品中各种分子的分离。(3)常用的电泳方法:___________电泳和________________电泳。二、实验操作第1页共4页1.样品处理:(1)红细胞的洗涤。①目的:去除_______。②方法:_______________。③标准:直至上清液不再呈现_____。(2)血红蛋白的释放。(3)分离血红蛋白溶液。①方法:混合液分层。②分层结果(自上而下):第1层:无色透明的_______。第2层:脂溶性物质的_______——白色薄层固体。第3层:_________的水溶液——_____透明液体。第4层:其他杂质的暗红色沉淀物。③结果处理:将试管中的液...
