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细胞工程 一、植物细胞工程 （一）植物组织培养技术 1、理论基础（原理）：_____________ 细胞具有全能性的原因：_______________________________________ 全能性表达的难易程度：受精卵、生殖细胞、干细胞、体细胞；植物细胞、动物细胞,请排序____________________________________________________ 2、过程：离体的植物器官、组织或细胞（又称_______） ―→ 愈伤组织 ―→胚状体―→试管苗 ―→植物体 愈伤组织的特点：____________________________________________________ 脱分化：___________________________________________ 再分化_________________________________________________________________________ 3、用途： A植物繁殖 微型繁殖：可以高效快速地实现种苗的大量繁殖 作物脱毒：采用茎尖组织培养来除去病毒（因为植物分生区附近的病毒极少或没有） 人工种子：以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经人工薄膜包装得到的种子。优点：完全保持优良品种的遗传特性，不受季节的限制；方便储藏和运输。 B作物新品种培育 c单倍体育种： 1、过程：植株（AaBb）通过减数分裂得到花粉（AB、Ab、aB、ab四种类型）；对花粉进行__________（技术是植物组织培养）；得到单倍体植株；对其幼苗时期进行__________处理；得到了正常的_________植株（AABB、AAbb、aaBB、aabb四种类型）。 2、优点：_______________ （二）植物体细胞杂交技术 1、过程： 2、植物诱导融合的方法：物理法包括 等。化学法一般是用________作为诱导剂。 3、注意：a生理基础：_______________ ，_______________ b植物细胞融合前需用___________ 和___________ 除去细胞壁 4、意义：__________________ ____ 。 二、动物细胞工程 （一）动物细胞培养 （1）动物细胞培养的流程： 取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用__________处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行_______培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续_________培养。 （2）动物细胞培养需要满足以下条件： ①无菌、无毒的环境：培养液应进行 处理。通常还要在培养液中添加一定量的 ，以防培养过程中的污染。此外，应定期 ，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 ②营养物质：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入等天然成分。 ③温度和PH：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4。 ④气体环境：95%空气＋5%CO2。O2是 所必需的，CO2的主要作用是 。 (3)动物细胞培养与组织培养的主要区别是_________________________________________。 （二）动物体细胞核移植技术和克隆动物 1、哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。 2、选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富； 。 3、体细胞核移植的大致过程是：（右图） 注意：(1)__________ ________ (2)原理：_________ 全能性； 克隆羊性别：________ （三）动物细胞融合 1、动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素________ _______________等。 2、动物细胞融合的意义：克服了__________________，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。 3、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：（重点记忆） 细胞工程 植物体细胞杂交 动物细胞融合 理论基础 细胞的全能性、细胞膜的流动性 细胞增殖、细胞膜的流动性 融合前处理 酶解法去除细胞壁（纤维素酶、果胶酶） 注射特定抗原，免疫处理正常小鼠 诱导手段 物理法:离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG） 物理法:离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇 生物法：灭活的病毒（灭活的仙台病毒） 诱导过程 第一步：原生质体的制备 （酶解法） 第二步：原生质体融合 （物、化法） 第三步：杂种细胞的筛选和培养 第四步：杂种植株的诱导与鉴定 正常小鼠免疫处理 动物细胞的融合 （物、化、生法） 杂交瘤细胞的筛选与培养 专一抗体检验阳性细胞培养 单克隆抗体的提纯 用途和意义 克服远缘杂交的不亲和障碍，大大扩展杂交的亲本组合范围 应用：白菜-甘蓝等杂种植株 （1） 制备单克隆抗体 （2） 诊断、治疗、预防疾病，例如“生物导弹”治疗癌症 4.单克隆抗体 （1）a.抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种_____________。 从血清中分离出的抗体 。 b.B淋巴细胞特点：可以产生________ ，但不能 ； 骨髓瘤细胞特点：能__________ ，但不能 。 （2）单克隆抗体的制备过程： 注入小鼠 细胞融合 分离 抗原注入小鼠体内 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 细胞培养养 选择培养细胞 培养基 体内培养 体外培养 从腹水提取 从培养液提取 单克隆抗体 （3）杂交瘤细胞的特点：既能大量______，又能产生_________________。 （4）单克隆抗体的优点：_______________________________________________。 （5）单克隆抗体的作用： ① 作为诊断试剂：准确识别各种物质的细微差异，并跟 发生特异性结合，具有 的优点。 ② 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“ ”（_____________________________），也有少量用于治疗其它疾病。 补充： 淋巴因子中的干扰素是治疗病毒的特效药，通常只能从体内获得，且数量非常的少，为了在体外获得大量的干扰素，我们可以用鼠的效应T淋巴细胞与其骨髓瘤细胞进行融合，进而从小鼠的腹水中或从培养液中提取。 干扰素是由效应T淋巴细胞产生的，所以在进行细胞融合时，选用的是效应T淋巴细胞和骨髓瘤细胞。 4