细菌简单染色法.doc

生物实验简单染色 峰峰高中生物组 适用微生物染色原理 简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。 常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷)，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。 其它情况分析： 常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。 使用草酸铵结晶紫染色液，染色迅速，着色深，菌体呈紫色。 一|、步骤 1、涂片 1. 取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央滴一小滴生理盐水； 2. 用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔； 3. 将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。 注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。 2、干燥 将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。也可用电吹风低温吹干。 3、固定 手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次。 原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。 注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。 4、染色 将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。 染色时间：吕氏碱性美蓝染色1~2min；石炭酸复红染色约1min；草酸铵结晶紫染色约1min。 5、水洗 将细菌涂片上染液倒入废液缸中；手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。 注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。 6、干燥 自然干燥：平放于室温，自然干燥； 吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干； 吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。 二、配方 1、吕氏碱性美蓝染液 溶液A 美蓝0.6克；95%乙醇 30毫升 溶液B 氢氧化钾0.01克；蒸馏水 100毫升 分别配制溶液A和B 配好后混合即可。 2、石碳酸复红液：称取碱性复红10g，研细，加95％乙醇100ml，放置过夜，滤纸过滤。取该液10ml，加5％石碳酸水溶液90ml混合，即为石碳酸复红液。再取此液10ml加水90ml即为稀石碳酸复红液。 3、草酸铵结晶紫染液 A液：结晶紫(crystal violet) 1g，95%酒精20ml B液：草酸铵(ammonium oxalate) 0.8g，蒸馏水80ml 混合A、B二液，静置48小时后使用。