2023年清开灵注射液中14种胆汁酸的HPLCESIMS_MS快速鉴定.doc

年版中 2023 方 组 君臣佐使的 根、黄 子、板 蓝 栀 、 热 味中 8 花 药 银 鉴 律；快速 规 应 准提高供 标 量 定胆汁 鉴 个厂 8 为 个 11 些特征 这 行快速 进 成分 类 MS/MS ， ESI 律 规 裂解 MS/MS ， 清开灵注射液中 1 4 种 胆汁酸的 HPLC，ESI，MS/MS 快 速鉴定 图 翻开文本 片集 [ ] 目的：争 辩 清开灵注射液中胆汁酸 类 成分的 ESI 及其快速 识别 方法。 术 类 方法：接受 HPLC ， ESI ， MS/MS 技 争 辩 5 种胆汁酸 成分的 裂解 规 律，并 对 8 个生 产 厂家清开灵注射液中的胆汁酸 鉴别 。 结 果： 5 种胆汁酸 类 成分具有相像的 ESI ， MS/MS 裂解特征；利用 从清开灵注射液中快速 鉴 定了 14 个胆汁酸 类 成分；其中 家注射液共有成分， 3 个存在于个 别 厂家 产 品中。 结论 术 质 ：利用 HPLC ， ESI ， MS/MS 技 可以从 简单 物 体系中快速 酸 类 成分，并 为 中 药 复方制 剂 的 简单 物 质 基 础阐 明与 质 了有效的方法。 [ 关 键词 ] 清开灵注射液；胆汁酸；液 质联 用； ESI ， MS/MS 裂解 定 清开灵注射液是 传统 名方 “ 安 宫 牛黄丸 〞 的改进 剂 型，由胆酸、珍宝母 栀 蓝 〔粉〕、猪去氧胆酸、 子、水牛角〔粉〕、板 根、黄芩苷、金 [1 2] ， 组 成 。 临 床上广泛用于 热 病、中 风 偏 瘫 、神志不清、急性肝炎、上呼吸 [3 4] ， 道感染等，是中医急 诊 科室必 备 中成 药 。方中胆酸、猪去氧胆酸清 镇 窍 热 冷静 银 惊、开 ，水牛角、珍宝母解 、 、安神，金 花、 [5] 芩苷清 热 解毒、除 烦 ， 诸药 相加，共奏良效 。依据中 药 论 为 药 药 理 ，胆酸和猪去氧胆酸 方中君 ，起主要的 效作用。 品溶液。 比照 液，然后配成混合 备 的 g·L 1 甲醇制成 品均接受色 各 溶液制 2.1.1 储 约 谱纯 比照 备 比照 -1 溶液制 2.1 备 方法 2 。 F8 ～ F1 为 号 编 个厂家清开灵注射液 8 。 自成都普瑞法科技开 〕 >98% 度 定用， 氧胆酸〔供含量 发 购 纯 测 院；去 辩 定争 检 品 药 自中国食品 购 〕均 9003 ， 0755 定用，批号 测 酸〔供含量 〕、熊去氧胆 202304 ， 110806 定用，批号 测 去氧胆酸〔供含量 鹅 〕、 202310 ， 100087 定用，批号 测 〕、猪去氧胆酸〔供含量 200414 ， 100078 定用，批号 〕；胆酸〔供含量 USA ， MO ， Louis St. 〔 Aldrich Sigma 自 〕，乙酸 USA 测 购 ， NJ ， Lawn Fair 〔 Scientific Fisher 自 购 和甲醇均 腈 乙 谱级 所用色 。 化系 水 统 纯 超 Q ， Milli 〕； Switzerland ， Sartorius 子分析天平〔 BS110S ， BP211D 纯 电 器〕； 仪 医用数控超声波清洗器〔昆山市超声 300DE ， KQ 接； HPLC 〕接口与 ESI 离〔 ，通 系 离子阱 Plus 联 过电喷雾电 统 质谱仪 电喷雾 XCT Agilent 器； 检测 ELSD ，配有 统 高效液相系 series 1100 Agilent 材料 1 工作。 辩 量把握争 和 基 一步丰富清开灵注射液物 以期 质 础 质 进 方法， 辩 定争 鉴 MS/MS ， ESI ， HPLC 成分，本文建立了一种快速、灵敏的 类 清开灵注射液中的 辩 了更深化地争 。 种 5 成分未超 的胆汁酸 该 为 过 类 [9] 定 鉴 的文献中， 辩 定性争 MS ， LC 成分 类 ，并且少量涉及胆酸 辩 定量争 ， 8] [6 胆酸和猪去氧胆酸的 针对 多，但大多是 较 成分的文献 类 中的胆酸 药 液君 清开灵注射 辩 。当前，争 成具有重要的意 明其中的物 尽量多地 义 质组 阐 效的，因此 发挥药 的作用模式 〞 多成分、多靶点 “ 复方是基于 药 于中 鉴 的。 药 种成分的提取物入 2 准中，胆酸和猪去氧胆酸是以主要含 的清开灵注射液 典收 国 这 标 载 药 条件 MS/MS ， ESI ， HPLC 3.2 选择 。 辩 行初步的定性争 清开灵注射液中的胆汁酸 ELSD ， HPLC 接受 进 对 择 选 辩 。因此，本争 辩 成分的争 类 的成分如胆汁酸 显 于紫外吸取特征不明 用 ，尤其适合 范 物化学成分的 了 大大拓 ， 灭 〕的消 ELSD 〔 应 围 检测 药 宽 那么 器 检测 光散射 发 。蒸 难 格外困 检测 有末端吸取， 仅 ，由于胆酸 时 性定量 定 UV ， HPLC 大。而接受 较 条件等影响 应 色反 显 差，受其他成分及 较 属性 些方法 行定性和定量分析，但 成分 胆汁酸 描法 和薄 专 这 进 类 对 层扫 ， 12] [11 层鉴别 、薄 中，通常接受紫外分光光度法 规检验 和常 辩 物争 药 在以往 [10] 选择 条件 ELSD ， HPLC 3.1 果 3 结 。 mL·min 0.25 -1 器的流淌相 入 ；流淌相接受柱后分流方式， 800 ～ 100 m/z 质谱检测 进 围 描范 扫 ； 100% 〕 level drive trap 水平〔 驱动 ；离子阱 50% 为 〕 stability compound 定性〔 ；化合物 400 量数 ；目 eV 500 3 管 ；毛 稳 标质 电压 细 ℃ 350 化温度 雾 ； Pa 35 力 压 化室 雾 ； L·min 11 〕；枯燥气流速 >99.99% 度 -1 纯 氦气〔 为 〕，碰撞气 >99.99% 度 纯 氮气〔 为 化气和枯燥气均 雾 离子模式： 负 条件 质谱检测 2.3 ，不分流模式。 L·min 1.5 化气〔空气〕流速 ， 110 管温度 雾 ℃ -1 器参数漂移 检测 ELSD ； ℃ 30 ；柱温 mL·min 1.0 ，流速 B 81% ～ 64% ， min -1 60 ～ 45 ， 64%B ～ 49% ， min 45 ～ 36 ， B 49% ～ 45% ， min 36 ～ 10 ， B 45% ～ 30% ， min 10 ～ 0 〕的混合溶液，梯度洗脱， 1 ： 3 ，甲醇〔 腈 乙 为 B 乙酸溶液， 0.2% 18 A 〕；流淌相 μm 5 ， mm mm×250 4.6 柱〔 色 C Luna Phenomenex 为 谱 条件 谱 液相色 2.2 定。 测 行 谱仪进 液注入液相色 膜，取 的微孔 μm 0.22 清开灵注射液， 溶液制 供 2.1.2 续滤 滤 过 备 试 碰撞， He 离子与离子阱内的碰撞气 [M-H] 中， - 结 ， 408 为 量 质 分子 对 ，可确定其相 [2M-H] 和 - 2H O] 2 果 见图 3 。在二 级质谱谱图 发 应 产 生 CID ， MS/MS 反 并 + [M-H 443 m/z ，加合离子 [M-H] 407 m/z 出了准分子离子 给 中 - - 级质谱谱图 律：其一 规 裂解 MS/MS ， ESI 化合物的 该类 辩 例，争 为 以胆酸 。 值 的背景 谱图 离子流色 总 可降低成分 还 的准分子离子峰， [M-H] 的 认 于辨 - ，既可得到易 离子模式 果说明， 。 辩 行了争 律 裂解 检测时 选择负 结 进 规 谱 去氧胆酸、熊去氧胆酸的 胆酸、猪去氧胆酸、去氧胆酸、 首先 质 鹅 对 试验 裂解特征 MS/MS ， ESI 3.3 〕 B 〔 injection Qingkailing and 〕 A 〔 standards reference mixed of chromatograms HPLC Fig.1 ELSD ， HPLC 〕 B 〕和清开灵注射液〔 A 品〔 混合 1 图 比照 图 同〕。 2 图 去氧胆酸〔 4. 去氧胆酸； 鹅 3. 猪去氧胆酸； 2. 胆酸； 1. 熊去氧胆酸； S. 。 2 ， 1 果 。 别 成分同分异构体的有效分 汁酸 见图 结 类 胆 水相，可以更好地 乙酸溶液作 0.2% 有机相，以 〕混合溶液作 1 实现 为 为 ： 3 ，甲醇〔 腈 确定以乙 过优选 出的成分偏少。因此，通 检 致 导 峰中， 谱 的色 峰易被掩盖于含量高 ，局部含量偏低的色 ，水系 的影响。接受乙 谱 统时 腈 大 较 光貌有 风 整 谱图 色 统对 果说明，不同的流淌相系 试验结 重要。 为 尤 成分 该类 区分 MS ， LC 于 对 别 分 谱 由于大量同分异构体的存在，前期的色 有利。 成格外 组 成分的 类 明注射液中胆汁酸 阐 于 对 多， ELSD 成分的数量都比 类 到的胆汁酸 离子模式， 是 是正离子模式 格外灵敏，无 的响 检测 负 还 论 应 成分 类 于胆汁酸 对 MS ， LC 果说明， 试验结 工具。 检测 体系最有效的 质 物 简单 合在一起，是分析 结 属性有机地 专 的高灵敏度、高 质谱 力量与 别 分 秀的 ，其将高效液相色 分析技 成熟的在 是当前已 MS ， LC 谱优 术 线 经进展 用。 应 中的 辩 以克