一般毒性作用(2).ppt

第六章第六章 一般一般毒性作用毒性作用 General toxic effects 一一.概述概述 二二.急性毒性作用急性毒性作用 三三.局部毒性作用局部毒性作用 四四.短期、亚慢性和慢性毒性作用短期、亚慢性和慢性毒性作用 （蓄积性与耐受性）（蓄积性与耐受性）一般毒性：一般毒性：1.1.急性毒性急性毒性 （acute toxicityacute toxicity）2.2.局部毒性局部毒性 （local toxicity）3.3.亚急性毒性亚急性毒性 （subacute toxicitysubacute toxicity）4.4.亚慢性毒性亚慢性毒性 （subchronic toxicitysubchronic toxicity）5.5.慢性毒性慢性毒性 （chronic toxicitychronic toxicity）重复暴露毒性重复暴露毒性 特殊毒性：特殊毒性：1.1.致癌致癌 （carcinogenicity）2.2.致突变致突变 （mutation）如：小鼠微核试验（如：小鼠微核试验（mouse micronucleus test）小鼠显性致死试验（小鼠显性致死试验（mouse dominant lethal test）大鼠染色体畸变试验（大鼠染色体畸变试验（rat chromosome aberration test）3.3.致畸致畸 （teratogenesis）4.4.生殖发育毒性生殖发育毒性 （r reproductive and developmental toxicity）5.5.药物依赖性药物依赖性 （drug dependence)一、一般毒性作用概念和意义一、一般毒性作用概念和意义 一般毒性评价主要目的：一般毒性评价主要目的：1.1.确定受试物毒作用表现与性质；确定受试物毒作用表现与性质；2.2.确定受试物毒作用的剂量与反应关系；确定受试物毒作用的剂量与反应关系；获得的参数有：获得的参数有：LDLD5050、LOAELLOAEL、NOAELNOAEL 3.3.确定毒作用靶器官；确定毒作用靶器官；4.4.评价毒性损害的可逆性；评价毒性损害的可逆性；5.5.了解化学药物毒作用的影响因素等。了解化学药物毒作用的影响因素等。第一节第一节 概概 述述 二、一般毒性试验的动物选择二、一般毒性试验的动物选择 （一）实验动物选择（一）实验动物选择 1.1.物种物种 选择原则：选择原则：与人体生物学特征相似的动物；与人体生物学特征相似的动物；自然寿命不太长的动物；自然寿命不太长的动物；易于饲养与实验操作的动物；易于饲养与实验操作的动物；经济并易于获得的动物。经济并易于获得的动物。（一般选择两个物种进行试验）（一般选择两个物种进行试验）2.2.品系品系 一般在毒理学系列研究中应使用同一品系。一般在毒理学系列研究中应使用同一品系。3.3.级别（级别（质量质量）级（清洁级）或级（清洁级）或级（级（SPFSPF级）的动物级）的动物 4.4.性别性别 受试物毒性如果有性别差异，应选择敏感的性别，受试物毒性如果有性别差异，应选择敏感的性别，若没有应选择两种性别进行试验（若没有应选择两种性别进行试验（/各半各半）。）。5.5.年龄与体重年龄与体重 急性试验急性试验-选择成年动物；慢性试验选择成年动物；慢性试验-刚断乳动物。刚断乳动物。同一性别动物的起始体重差异同一性别动物的起始体重差异平均体重平均体重20%20%。6.6.生理与健康状况生理与健康状况 不选择怀孕、哺乳其动物，须选择健康动物（不选择怀孕、哺乳其动物，须选择健康动物（健健康观察期康观察期5 5-7 7天天）。）。（二）染毒方式（二）染毒方式 选择原则：选择原则：一般选择受试物实际与人接触的途径。一般选择受试物实际与人接触的途径。1.1.呼吸道染毒呼吸道染毒 有：气管注入染毒有：气管注入染毒 吸入染毒（静式与动式两种）吸入染毒（静式与动式两种）2.2.消化道染毒消化道染毒 有：灌胃法、喂饲法和胶囊法。有：灌胃法、喂饲法和胶囊法。3.3.经皮染毒经皮染毒 有：表皮涂药、浸尾法。有：表皮涂药、浸尾法。4.4.注射途径注射途径 有：静脉、腹腔、肌肉、皮下、皮内等。有：静脉、腹腔、肌肉、皮下、皮内等。一、急性毒性概念一、急性毒性概念 是指是指1 1次接触或次接触或2424小时内多次接触外源化学物小时内多次接触外源化学物在短期内所产生的健康损害作用和致死效应。在短期内所产生的健康损害作用和致死效应。实验效应观察期：实验效应观察期：2 2周。周。2424小时多次染毒：小时多次染毒：毒性很低或溶解度很低的受试物。毒性很低或溶解度很低的受试物。一般规定：一般规定：3 3次次/24/24小时，每次间隔小时，每次间隔4 4小时以上。小时以上。第二节第二节 急性毒性作用急性毒性作用 二、急性毒性试验的目的二、急性毒性试验的目的 1.1.评价急性毒性大小评价急性毒性大小 求出求出LDLD5050、LDLD100100、LDLD0101、LDLD0 0或或MTDMTD、LOAELLOAEL、NOAELNOAEL等。等。2.2.了解急性毒性特征（了解急性毒性特征（中毒症状与体征中毒症状与体征）3.3.为亚急性、亚慢性、慢性、致癌等试验提为亚急性、亚慢性、慢性、致癌等试验提供剂量设置的依据。供剂量设置的依据。4.4.为毒作用机制研究提供初步线索。为毒作用机制研究提供初步线索。用用LDLD5050作为剂量参考依据的毒性试验作为剂量参考依据的毒性试验 试验类别试验类别 剂量设组要求剂量设组要求 蓄积毒性试验蓄积毒性试验 1/201/20-1/51/5 LDLD5050范围设组范围设组 亚慢性试验亚慢性试验 1/201/20-1/51/5 LDLD5050作最高剂量作最高剂量 慢性慢性(致癌致癌)试验试验 1/10 1/10 LDLD5050作最高剂量作最高剂量 三、急性毒性试验方法要点三、急性毒性试验方法要点 （一）经典急性毒性试验（一）经典急性毒性试验 （即传统即传统LDLD5050法法）基本要求基本要求:（OECDOECD）1.1.检疫观察检疫观察3 3-5d5d，成年健康动物（，成年健康动物（大鼠首选大鼠首选）；）；2.52.5-7 7个剂量组，每组个剂量组，每组1010只动物以上（只动物以上（/各半各半）；）；3.3.剂量组距合适，一般为等比级数；剂量组距合适，一般为等比级数；4.4.给药途径尽量与实际接触一致；给药途径尽量与实际接触一致；（隔夜禁食（隔夜禁食（1212-14h14h），给药后再禁食），给药后再禁食3 3-4 4小时）小时）5.5.毒性观察期至少毒性观察期至少2 2周以上，每天观察周以上，每天观察1 1次。次。LDLD5050计算方法：计算方法：曲线拟合法曲线拟合法 （概率单位法或（概率单位法或BlissBliss法）法）插值法插值法 累积法累积法 寇氏法寇氏法 移动平均法移动平均法 霍恩霍恩(Horn)(Horn)法法-查表法查表法 WeilWeil查表法查表法等等 剂量设置依据：剂量设置依据：参考同系物或类似物的急性毒性资料；参考同系物或类似物的急性毒性资料；最大耐受致死量（最大耐受致死量（LDLD0 0）测定；）测定；WHOWHO规定给药剂量：经口规定给药剂量：经口 5000mg/kg5000mg/kg 经呼吸道经呼吸道 5000ppm5000ppm 经皮肤经皮肤 2000mg/kg2000mg/kg 预试验测定致死剂量范围预试验测定致死剂量范围 即死亡率从即死亡率从0%0%100%100%（10%10%90%)90%)-LorkLork法（法（改良法的组距为改良法的组距为1.31.3-1.51.5）-组距法组距法 改良改良LorkLork简化剂量设计方案简化剂量设计方案 公式：公式：i=i=（lgLDlgLD9090-lgLDlgLD1010）/（n n-1 1）或或 i=i=（lgLDlgLD100100-lgLDlgLD0 0）/（n n-1 1）式中：式中：i i-为组距为组距 n n-为设计的剂量组数为设计的剂量组数 组距法确定各组剂量组距法确定各组剂量 假定某化学药物假定某化学药物LDLD100100为为20002000mg/kg,mg/kg,LDLD0 0为为500500mg/kg,mg/kg,设设6 6 个剂量组个剂量组，各染毒组的剂量是多少各染毒组的剂量是多少？1 1.按公式求出对数剂量组距按公式求出对数剂量组距（I）公式：公式：I=I=（lgLDlgLD100100-lgLDlgLD0 0）/（n n-1)1)=（lg2000lg2000-lg500lg500）/(6/(6-1)1)=（3.3013.301-2.6992.699）/5/5 =0.120=0.120 2.2.确定各组实际剂量（见下表）确定各组实际剂量（见下表）实例实例 某化学药物急性毒性试验剂量设置某化学药物急性毒性试验剂量设置 组别组别 剂量对数剂量对数 剂量剂量（mg/kgmg/kg）1 2.701 502.3 2 2.821 662.2 3 2.941 873.0 4 3.061 1150.8 5 3.181 1517.1 6 3.301 2000.0 注：剂量对数组距注：剂量对数组距=0.12=0.12，剂量组间的等比级数，剂量组间的等比级数=1.318=1.318 要求：要求：5 56 6个剂量组，每组动物数相等；个剂量组，每组动物数相等；死亡率呈正态分布；死亡率呈正态分布；最低剂量组死亡率最低剂量组死亡率20%20%；最高剂量组死亡率最高剂量组死亡率80%80%，各组剂量呈等比级数各组剂量呈等比级数（一般为一般为1.21.2-1.51.5）。）。特点：特点：计算结果简便（按公式计算）计算结果简便（按公式计算）精确度高精确度高 1.1.改良寇氏改良寇氏 (Karber)(Karber)法法 点斜法点斜法 LDLD5050(或或LCLC5050)计算计算 公式：公式：lgLDlgLD5050XkXki(i(p p0 0.5 5)pqpq S Si i n n LDLD5050的的9595%可信限可信限(LD(LD50501 1.9696 S)S)LDLD5050计算公式：计算公式：式中：式中：m m-lgLDlgLD5050;i i-组间对数剂量差值；组间对数剂量差值；XkXk-最大剂量的对数值；最大剂量的对数值；q q-存活率（存活率（q=1q=1-p p）；）；p p-各剂量组死亡率总和；各剂量组死亡率总和；n n-每组动物数。每组动物数。应用实例应用实例 npqiSmpiXkm)5.0(公式：公式：lgLD50=1.4961-0.08(2.3-0.5)=1.3521 lgLD50及其及其95%可信限为可信限为1.35211.960.0213=1.31041.3938 LD50及其及其95%可信限为可信限为22.5 mg/kg（20.4424.76 mg/kg）要求：要求：4 4个剂量组，每组动物数相等（个剂量组，每组动物数相等（4 4只或只或5 5只只）雌雄分开试验雌雄分开试验 每组剂量为固定倍数递增（每组剂量为固定倍数递增（2.152.15倍，倍，3.163.16倍倍）特点：特点：动物用量少动物用量少 结果查表可得（结果查表可得（查表可得查表可得LDLD5050及及95%95%可信限范围可信限范围）精确度不高精确度不高 2.2.霍恩霍恩(Horn)(Horn)法法 又称剂量递增法又称剂量递增法 霍恩霍恩(Horn)(Horn)法查表法查表-2.15倍组距倍组距 例如：全活例如：全活-全死剂量范围为全死剂量范围为200200-1500mg/kg1500mg/kg 剂量组选择剂量组选择215,464,1000,2150(t=2)215,464,1000,2150(t=2)霍恩霍恩(Horn)(Horn)法查表法查表-3.16倍组距倍组距 例如：全活例如：全活-全死剂量范围为全死剂量范围为180180-3500mg/kg3500mg/kg 剂量组选择剂量组选择10