IgM捕捉ELISA法(MacELISA)检测出血热IgM抗体.doc

附件 1 I IgMgM 捕捉捕捉 ELISAELISA 法（法（MacELISAMacELISA）检测出血热）检测出血热 IgMIgM 抗体抗体 本试剂盒系采用抗人 链捕获人血清 IgM 抗体，加辣根过氧化物酶病毒抗原标记物，用以检测出血热特异性 IgM 抗体。具有较高的敏感性、特异性和重复性。特别适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。本试剂盒为 96人份/包装。试验材料：试验材料：（1）抗人 IgM 抗体（链）：用 pH9.5 的包被液包被酶标板（2）冻干阳性血清/冻干阴性血清 1 支，0.2ml/支，工作浓度为 1：10；（3）冻干辣根过氧化物酶病毒抗原标记物 1 支，0.5ml/支，工作浓度为1：20；（4）冻干小牛血清 1 支，1ml/支；（5）浓缩洗液（10 倍浓缩）1 瓶，50ml；（标本稀释液为含 5%小牛血清原倍洗液）；（6）A/B 显色液和终止液各 1 瓶。（冻干试剂先用相应量的去离子水溶解，然后临用前根据所需按工作浓度稀释使用，余下的放-20保存）（7）终止液：4N H2SO4（8）酶标仪。检测步骤检测步骤：（1）将待检血清用稀释液 100 倍稀释，加入已包被抗人 链抗体的酶标板一孔中，100l/孔，同时加入已 1：10 稀释的阳性血清/阴性血清对照各一孔，100l/孔，置 37水浴孵育 1 小时。（2）弃去血清，用 PBST 漂洗 5 遍，甩干。（3）将冻干辣根过氧化物酶病毒抗原标记物 1：10 稀释后，加入反应板相应孔内，100l/孔，37水浴孵育 1 小时。（4）弃去酶标抗体，用洗涤液洗涤 6 次，甩干。（5）加显色液:于各反应孔内加 A/B 液各一滴，37，避光 35 分钟。（6）加终止液（4NH2SO4）于每反应孔，一滴/孔。结果判断：结果判断：（1）目测方法：阳性对照孔呈明显蓝色，阴性对照孔呈无色，对照成立；若待检血清孔呈明显淡蓝色或深蓝色（TMB），则标本为出血热 IgM 抗体阳性，反之阴性。（2）酶联免疫检测仪检测：于 450nm（TMB）阳性对照孔 OD 值/阴性对照孔 OD 值,即 P/N2.1，对照成立；若待检血清孔 OD 值与阴性对照孔 OD 比值2.1，则标本为流行性出血热 IgM抗体阳性，反之阴性。（阴性对照孔 OD 值小于 0.05 按 0.05 记，若大于 0.05 按实际数值计算）意义：意义：阳性结果，表明患者新近汉坦病毒感染，用于出血热早期诊断。