ELISA检测乙肝抗体.pptx

ELISAELISA检测乙肝抗体检测乙肝抗体 组员：李家成（1520150102）林其聪（1520150103）付 强（1520150104）郑海军（1520150105）管 汝（1420151143）分工 汇报：林其聪 PPT制作：李家成，付强 ELISA检测乙肝抗体 肝表面抗体ELISA检测 实验目的实验目的 1.掌握ELISA的原理和操作方法。2.熟悉酶标仪的使用方法。免疫标记技术免疫标记技术 免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。细胞1 细胞2 标记物标记物 分类 荧光素 放射免疫技术 放射性核素 免疫荧光技术 酶 免疫酶技术 免疫酶技术 用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可用酶标测定仪测定光密度(OD）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到ngpg/ml。细胞1 标记物标记物 DH+HO D+2H2O 酶具有高效催化性：可加快化学反应的速率；在反应前后没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用 酶免疫技术 酶联免疫吸附试验 酶免疫组化法 用于检测可溶性用于检测可溶性抗原或抗体抗原或抗体 用于检测组织或细胞用于检测组织或细胞表面的抗原表面的抗原 酶联免疫吸附试验-ELISA ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记：加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物；产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。酶联免疫吸附实验ELISA 实验原理 抗原或抗体吸附到固体相载体表面后，以及抗原抗体与酶连接后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应第底物时，在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法有三个必要的试剂：（1）免疫吸附剂（2）结合物（3）酶反应的底物 ELISA的类型 间接法（测抗体）双抗体夹心发（测大分子抗原）竞争发（测小分子抗原）竞争法 用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面，经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液，而另一组加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差即为所要测定的未知抗原的量。这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可，因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点就是快，因此只有一个保温洗涤过程，但常需用较多的酶标记抗原。操作步骤 1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟。2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。3.每孔加酶结合物1滴（孔上方悬空滴加，无气泡），混匀，空白孔不加，置37度温箱30分钟。4.取出反应板，弃液，拍干。5.每孔注满洗条液，（不要溢出）静置5秒后弃液，拍干，重复洗条5次，拍干。6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。待1 待2 待2 阳性 阴性 空白