分享
BCA蛋白定量.doc
下载文档

ID:107235

大小:50.50KB

页数:2页

格式:DOC

时间:2023-02-24

收藏 分享赚钱
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,汇文网负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。
网站客服:3074922707
BCA 蛋白 定量
凯基BCA蛋白含量检测试剂盒 Cat Number:KGPBCA For Research Use Only Store at -20℃ for one year Expire date: 一、   试剂盒说明 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成,实现了蛋白浓度测定的简单,高稳定性,高灵敏度和高兼容性。检测浓度下限达到25微克/毫升,最小检测蛋白量达到0.5微克,待测样品体积为1~20微升。 二、   试剂盒组份 组 份 Cat: KGPBCA试 (100 assay酶标板/20assay 1mL比色杯) Cat: KGPBCA (250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯) 蛋白标准溶液(0. 5 μg/μL ) 2 mL 5 mL BCA试剂A 20 mL 25 mL×2 BCA试剂B 0.4mL 1mL 三、      操作步骤 A.   酶标板操作 1.      标准曲线的绘制:取一块酶标板,按照下表加入试剂 孔号 0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液(μL) 0 1 2 4 8 12 16 20 去离子水(μL) 20 19 18 16 12 8 4 0 对应蛋白含量(μg) 0 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 2.      根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀; 3.      各孔加入200μL BCA工作液; 4.      把酶标板放在振荡器上振荡30sec,37℃放置30分钟,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线; 5.      稀释待测样品至合适浓度,使样品稀释液总体积为20μL,加入BCA工作液200μL,充分混匀,37℃放置30分钟后,以标准曲线0号管做参比,在562nm波长下比色,记录吸光值; , 6.      根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg),除以样品稀释液总体积(20μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:μg/μL)。 B.   分光光度计测定 1.        标准曲线的绘制:各管按照下表加入试剂 孔号 0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液(μL) 0 5 10 20 40 60 80 100 去离子水(μL) 100 95 90 80 60 40 20 0 对应蛋白含量(μg) 0 2.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 2.        根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀; 3.        各管加入1000μL BCA工作液; 4.        各管充分混匀,37℃放置30分钟,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线; 5.        稀释待测样品至合适浓度,样品稀释液总体积为100μL,加入BCA工作液1000μL,充分混匀,37℃放置30分钟后,以标准曲线0号管做参比,在562nm波长下比色,记录吸光值; 6.        根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg),除以样品稀释液总体积(100μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:μg/μL)。 四、     注意事项 1. 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。 2. 加入BCA工作液后,也可以在室温放置2小时,或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或延长孵育时间。 3. 待测样品浓度在50~2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。 4. BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇低于1mM,β-巯基乙醇低于1mM.不适用BCA法时建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。 5. 操作时要带手套。

此文档下载收益归作者所有

下载文档
你可能关注的文档
收起
展开