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网站客服:3074922707
BCA
蛋白
定量
凯基BCA蛋白含量检测试剂盒
Cat Number:KGPBCA For Research Use Only
Store at -20℃ for one year
Expire date:
一、 试剂盒说明
BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成,实现了蛋白浓度测定的简单,高稳定性,高灵敏度和高兼容性。检测浓度下限达到25微克/毫升,最小检测蛋白量达到0.5微克,待测样品体积为1~20微升。
二、 试剂盒组份
组 份
Cat: KGPBCA试 (100 assay酶标板/20assay 1mL比色杯)
Cat: KGPBCA (250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯)
蛋白标准溶液(0. 5 μg/μL )
2 mL
5 mL
BCA试剂A
20 mL
25 mL×2
BCA试剂B
0.4mL
1mL
三、 操作步骤
A. 酶标板操作
1. 标准曲线的绘制:取一块酶标板,按照下表加入试剂
孔号
0
1
2
3
4
5
6
7
蛋白标准溶液(μL)
0
1
2
4
8
12
16
20
去离子水(μL)
20
19
18
16
12
8
4
0
对应蛋白含量(μg)
0
0.5
1.0
2.0
4.0
6.0
8.0
10.0
2. 根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀;
3. 各孔加入200μL BCA工作液;
4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec,37℃放置30分钟,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线;
5. 稀释待测样品至合适浓度,使样品稀释液总体积为20μL,加入BCA工作液200μL,充分混匀,37℃放置30分钟后,以标准曲线0号管做参比,在562nm波长下比色,记录吸光值;
, 6. 根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg),除以样品稀释液总体积(20μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:μg/μL)。
B. 分光光度计测定
1. 标准曲线的绘制:各管按照下表加入试剂
孔号
0
1
2
3
4
5
6
7
蛋白标准溶液(μL)
0
5
10
20
40
60
80
100
去离子水(μL)
100
95
90
80
60
40
20
0
对应蛋白含量(μg)
0
2.5
5.0
10.0
20.0
30.0
40.0
50.0
2. 根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀;
3. 各管加入1000μL BCA工作液;
4. 各管充分混匀,37℃放置30分钟,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线;
5. 稀释待测样品至合适浓度,样品稀释液总体积为100μL,加入BCA工作液1000μL,充分混匀,37℃放置30分钟后,以标准曲线0号管做参比,在562nm波长下比色,记录吸光值;
6. 根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg),除以样品稀释液总体积(100μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:μg/μL)。
四、 注意事项
1. 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 加入BCA工作液后,也可以在室温放置2小时,或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或延长孵育时间。
3. 待测样品浓度在50~2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
4. BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇低于1mM,β-巯基乙醇低于1mM.不适用BCA法时建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
5. 操作时要带手套。