8-消毒与灭菌.ppt

BEA Confidential.|1 消毒与灭菌消毒与灭菌 微生物控制的意义微生物控制的意义 防止疾病的发生和传播防止疾病的发生和传播 防止食品和物品等的微生物污染防止食品和物品等的微生物污染 防止微生物对原材料的破坏（腐败和变质）防止微生物对原材料的破坏（腐败和变质）灭菌（灭菌（sterilizationsterilization）杀灭所有的微生物，包括细菌）杀灭所有的微生物，包括细菌的芽孢；的芽孢；消毒（消毒（disinfectiondisinfection）杀灭病原微生物；）杀灭病原微生物；防腐（防腐（antisepticantiseptic）抑制微生物的生长繁殖；抑制微生物的生长繁殖；化疗化疗(Chemotherapy)(Chemotherapy)：化疗是指利用具有选择毒性的：化疗是指利用具有选择毒性的化学物质如磺胺、抗生素等对生物体内部被微生物感化学物质如磺胺、抗生素等对生物体内部被微生物感染的组织进行治疗，以杀死组织内的病原微生物，但染的组织进行治疗，以杀死组织内的病原微生物，但对机体本身无毒害作用的治疗措施。对机体本身无毒害作用的治疗措施。无菌（无菌（asepsisasepsis）不含活菌不含活菌 无菌技术（无菌技术（aseptic techniqueaseptic technique）在进行外科手术在进行外科手术或分离转接及培养时防止其它微生物污染实验材料或或分离转接及培养时防止其它微生物污染实验材料或实验材料污染环境的操作方法。实验材料污染环境的操作方法。消毒、灭菌的方法一般可分为：热力灭菌法热力灭菌法 辐射杀菌法辐射杀菌法 物理学方法物理学方法 滤过除菌法滤过除菌法 超声波杀菌法超声波杀菌法 干燥和低温抑菌法等干燥和低温抑菌法等 化学方法化学方法 消毒消毒 防腐防腐 （一一）热力灭菌法 分类：干热灭菌法 湿热灭菌法 1 1 干热灭菌法 A A 焚烧：B B 烧灼：C C 干烤：D D 红外线灭菌：一 物理消毒灭菌法 焚烧焚烧 动物尸体，废弃物。动物尸体，废弃物。烧灼烧灼 金属制品（镊子，接种环等）。金属制品（镊子，接种环等）。干烤灭菌干烤灭菌 （1 1）160/2h160/2h烤箱（烤箱（ovenoven）（2 2）适用于耐高温物品。）适用于耐高温物品。（3 3）温度下降至）温度下降至9010090100时方可开启箱门，时方可开启箱门，否则干烤物品会骤冷，破碎或可燃物燃烧。否则干烤物品会骤冷，破碎或可燃物燃烧。2 2.湿热灭菌法 A A 巴氏消毒法：63/30min，72/15-30s，82/3s B B 煮沸消毒法：100100，30min 30min 难以杀灭芽胞难以杀灭芽胞 C C 流通蒸气消毒法：100100，1515-3030min min 难以杀灭芽胞难以杀灭芽胞 D D 间歇蒸汽灭菌法：100100，1515-3030minmin，3737过夜过夜培养培养（3 3次）E E 高压蒸气灭菌法:（1 1）含糖培养基）含糖培养基:113:113（8Ib/in2 8Ib/in2），），2030min2030min （2 2）一般耐高温物品一般耐高温物品(如培养基如培养基)：121.3 121.3，103.46kPa103.46kPa（15 Ib/in2 15 Ib/in2），），1530min1530min 高压蒸汽灭菌 Hirayama 高压灭菌锅高压灭菌锅 全自动高压蒸汽灭菌锅全自动高压蒸汽灭菌锅 湿热与干热灭菌效果的比较 热型热型 温度（温度（）时间）时间 布层内的温度（布层内的温度（）灭菌效果）灭菌效果 （h h）2020层层 4040层层 100100层层 湿热湿热 9090-105.3 3 101 101 101.5 105.3 3 101 101 101.5 完完 全全 干热干热 130130-140 4 86 72 70.5 140 4 86 72 70.5 不不 完完 全全 湿热比干热灭菌好的原因：1 1 细菌蛋白质在有水的情况下易于 凝固变性 2 2 湿热穿透力强 3 3 湿热蒸气有潜热存在，水蒸气凝固 成水释放潜热，迅速提高被灭菌物 体的温度 湿湿热对热对一般一般营营养体和养体和孢孢子的子的杀灭杀灭条件：条件：多数细菌和真菌的营养细胞：在多数细菌和真菌的营养细胞：在6060左右处理左右处理5 5-1010分钟；分钟；酵母菌和霉菌的孢子：用酵母菌和霉菌的孢子：用8080以上温度处理；以上温度处理；细菌的芽胞：细菌的芽胞：121121处理处理1515分钟以上；分钟以上；影响热力灭菌法的因素 1、温度与作用时间 2、微生物因素 3、灭菌对象的性质（二）光线与射线的消毒作用 1 1 日光与紫外线 机理：细胞细胞DNADNA吸收能量，形成胸腺嘧啶二聚体，干吸收能量，形成胸腺嘧啶二聚体，干扰扰DNADNA复制和蛋白质合成。复制和蛋白质合成。特点：穿透力弱穿透力弱,只适用于物体表面和空气；产生对只适用于物体表面和空气；产生对人有害的臭氧人有害的臭氧 2 电离辐射：包括X射线和射线 机制：干扰DNADNA的合成；破坏细胞膜；产生过氧化氢等 特点：穿透力强，不升高温度 （四）（四）超声波的消毒作用 可裂解细菌，尤其对G+更敏感 主要用于粉碎细胞，提取细胞组分或制备抗原等 (五五）渗透压渗透压 高渗引起细胞脱水产生质壁分离。高渗引起细胞脱水产生质壁分离。常用盐腌，糖渍来保存食品。常用盐腌，糖渍来保存食品。（三）（三）滤过除菌法 a.a.适用于不耐热、不能用化学方法处理的液体和气体：适用于不耐热、不能用化学方法处理的液体和气体：抗生素、维生素、酶、血清、病毒溶液、毒素溶液、细抗生素、维生素、酶、血清、病毒溶液、毒素溶液、细胞培养液胞培养液 b.b.不能除去病毒和支原体不能除去病毒和支原体 c.c.常用膜滤器：常用膜滤器：0.220.450.220.45 m m 二 化学消毒灭菌法 机制：1 1、使微生物蛋白质凝固变性、使微生物蛋白质凝固变性,发生沉淀发生沉淀.如酒精等如酒精等.2 2、破坏菌体的酶系统、破坏菌体的酶系统,影响菌体代谢影响菌体代谢.如过氧化氢等如过氧化氢等.3 3、降低微生物表面张力、降低微生物表面张力,增加细胞膜的通透性增加细胞膜的通透性,使细使细胞发生破裂或溶解胞发生破裂或溶解.如来苏儿等酚类物质如来苏儿等酚类物质.消毒剂的主要种类、浓度及用途 1 1 酚类：酚类：作用：菌体蛋白凝固；损伤细胞膜；灭活酶类 浓度：石炭酸为3 3%-5 5%、来苏儿为2 2%用途：地面、器具表面和皮肤的消毒 2 2 醇类醇类 ：作用机制：使菌体蛋白变性与凝固；干扰细菌代谢 浓度：乙醇7070%-7575%用途：用于皮肤的消毒和体温计等的 浸泡 3 3 重金属盐类重金属盐类：使细菌发生变性和沉淀；酶活性丧失 （1 1）2 2%红汞：皮肤、粘膜和小创伤 （2 2）0 0.0505-0 0.0101%升汞：非金属器皿 4 4 氧化剂氧化剂：氧化作用；使蛋白质变性 （1 1）0 0.1 1%高锰酸钾：皮肤、尿道、水果 （2 2）3 3%过氧化氢：创伤、皮肤粘膜 （3 3）2 2%-2 2.5 5%碘酒：皮肤消毒 （4 4）0 0.2 2ppmppm-0 0.5 5ppmppm氯：饮水和游泳池 （5 5）1010%-2020%漂白粉：地面、厕所等 5 表面活性剂：损伤细胞膜；灭活氧化酶等酶的活性；蛋白质沉淀（1 1）0 0.0505%-0 0.1 1%新洁尔灭：皮肤粘膜、手术器械（2 2）0.05%0.05%-0.1%0.1%杜灭芬：伤口冲洗，金属器械、塑料、橡皮类 6 6 烷化剂：烷化剂：使菌体蛋白和核酸的烷基化（1 1）1010%甲醛：物品表面、空气（2 2）2 2%戊二醛：精密仪器、内窥镜等 缺点：有一定的毒性 消毒剂的应用 1 1 病人的排泄物：等量的20%20%漂白粉、5%5%石炭酸或2%2%来苏儿、搅拌均匀，作用2小时 2 2 皮肤：2.5%2.5%碘酒、70%70%酒精、2%2%红汞 3 3 粘膜：1%1%硝酸银、3%3%过氧化氢、0.1%0.1%高锰酸钾等 4 4 饮水:氯气、漂白粉 5 5 厕所：生石灰 6 6 空气：甲醛熏蒸 7 7 手：2%2%来苏儿、2%2%碘酊、70%70%酒精 影响消毒剂灭菌的因素 消毒剂的性质、浓度与作用时间 微生物的种类与数量 温度 酸碱度 有机物 三、化学疗剂（一）一）抗代谢物抗代谢物 有些化合物在结构上与生物体所必需的代谢物很有些化合物在结构上与生物体所必需的代谢物很相似，以至可以和特定的酶结合，从而阻碍了酶相似，以至可以和特定的酶结合，从而阻碍了酶的功能，干扰了代谢的正常进行，这些物质称为的功能，干扰了代谢的正常进行，这些物质称为抗代谢物抗代谢物(Antimetabolite)(Antimetabolite)。叶酸对抗物（磺胺）、叶酸对抗物（磺胺）、嘌呤对抗物（嘌呤对抗物（6 6-巯基嘌呤）、巯基嘌呤）、苯丙氨酸对抗物（对氟苯丙氨酸）、苯丙氨酸对抗物（对氟苯丙氨酸）、尿嘧啶对抗物（尿嘧啶对抗物（5 5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶）胸腺嘧啶对抗物（胸腺嘧啶对抗物（5 5-溴胸腺嘧啶）溴胸腺嘧啶）等等等等 二氢蝶啶二氢蝶啶 +对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸 二氢叶酸二氢叶酸 四氢叶酸四氢叶酸 辅酶辅酶F F 磺胺药磺胺药 核酸合成核酸合成 二氢叶酸合成酶二氢叶酸合成酶 二氢叶酸还原酶二氢叶酸还原酶 细菌需要利用对氨基苯甲酸合成生长所需的叶酸：细菌需要利用对氨基苯甲酸合成生长所需的叶酸：（二）抗生素（二）抗生素(Antibiotic)(Antibiotic)是由某些生物合成或半合成的一类次级代谢产物是由某些生物合成或半合成的一类次级代谢产物或衍生物，它们在很低浓度时就能抑制或影响它或衍生物，它们在很低浓度时就能抑制或影响它种生物的生命活动，如杀死微生物或抑制其生长。种生物的生命活动，如杀死微生物或抑制其生长。最小抑菌浓度最小抑菌浓度（MICMIC）:表示抗生素的抗菌活性，单位是表示抗生素的抗菌活性，单位是 g/mlg/ml，MICMIC可以在液体试管或固体平板上测定可以在液体试管或固体平板上测定 抗菌谱：抗菌谱：抗生素的作用对象有一定范围，这种作用范围称该抗生素的作用对象有一定范围，这种作用范围称该抗生素的抗菌谱。广谱：对多种微生物有作用（如：土霉素、抗生素的抗菌谱。广谱：对多种微生物有作用（如：土霉素、四环素）；窄谱：仅对某一类微生物有作用（如：多粘菌素）四环素）；窄谱：仅对某一类微生物有作用（如：多粘菌素）抑制细胞壁的合成；抑制细胞壁的合成；如：青霉素如：青霉素 破坏细胞膜功能；破坏细胞膜功能；如：多粘菌素可作用于膜磷脂使膜溶解如：多粘菌素可作用于膜磷脂使膜溶解 抑制蛋白质合成；抑制蛋白质合成；如：氯霉素，四环素、链霉素等如：氯霉素，四环素、链霉素等 干扰核酸代谢；干扰核酸代谢；如：利福霉素、新生霉素、丝裂霉素、灰黄霉素如：利福霉素、新生霉素、丝裂霉素、灰黄霉素 抗生素作用机制抗生素作用机制 抗菌药物的使用与细菌的耐药性的关系 无直接关系，抗菌药物只起到一种选择和扩大耐药菌株的作用 控制耐药性的策略 (1)(1)第一次使用的药物剂量要足；第一次使用的药物剂量要足；(2)(2)避免在一个时期或长期多次使用同种抗避免在一个时期或长期多次使用同种抗生素；生素；(3)(3)不同的抗生素不同的抗生素(或与其他药物或与其他药物)混合使用；混合使用；(4)(4)对现有抗生素进行改造或筛选新的更有对现有抗生素进行改造或筛选新的更有效的抗生素，这样既可以提高治疗效果，又效的抗生素，这样既可以提高治疗效果，又不会使细菌产生抗药性。不会使细菌产生抗药性。思考题 1.控制微生物生长繁殖的主要方法及原理有哪些?2.消毒、灭菌、防腐、无菌的概念;3.干烤灭菌、巴氏消毒法、高压蒸汽灭菌法的条件及适用性；4.紫外线灭菌原理及适用性；5.滤过除菌法适用性。