96孔板种细胞经验.doc

做实验将近一年，从丁香园上学到了很多东西，感谢很多战友给予的帮助，现将我在实验过程中的一点儿小小的经验拿出来和大家分享，希望对种96孔板子的战友有帮助。 刚开始用96孔板种细胞时细胞总是分布不均匀，第二天就会发现有些地方出现堆积性生长，而还有不少地方细胞则很稀疏，细胞密集的地方因细胞与细胞之间的接触抑制影响细胞的生长，这样就很难评价干预因素对细胞的作用，因此将96孔板种均匀也是进行后续实验的前提，现将我以前用的老办法和最后用的新方法比较一下，以让大家看看各自优缺。 1、老方法：这个是从丁香园上学的，就是种过板子后，用手将96孔板平拿起，左右晃动几下，然后再前后晃动几下，不过这种方法5个复孔中总有2-3个孔中细胞分布不均匀，多数情况下是孔的中间出现成堆分布，为此苦恼了一阵子。还又一次见一师姐将种好的板子放在摇床上摇了几分钟，结果更惨了，细胞全部跑到中间了。 2、新方法：这种方法简直是太好了，种的很均匀。先用抢将吹打均匀的细胞吸起来，让后将枪头紧贴着孔的一侧壁（注意枪头的尖不要接触孔底），然后将枪头中的细胞缓缓的打下去，种好之后千万不要摇晃板子，直接放到显微镜下看就可以了，此方法可以说是100%的有效吧。 希望对大家有帮助。 从6孔板到96空板要细胞分散均匀，先用培养基把细胞稀释好，再把培养板放在适当的位置，加入细胞时和加入细胞后不移动培养板；如果空中有的地方没有培养基可吹打，但不要移动培养板，加入细胞后静置20－30分钟再移入培养箱。这样细胞一般都能长的很均匀。当然，前提是细胞消化的很好。