人重组白细胞介素-8在大肠杆菌的表达、鉴定【摘要】目的利用PCR技术扩增hIL-8cDNA，将其连接于原核表达载体pKpL-3a（含PL启动子）中,并在大肠杆菌中表达、鉴定。方法PCR技术扩增hIL-8cDNA获取目的基因，将该基因重组到大肠杆菌表达载体pKpL3a质粒中，重组DNA分子转化到Pop2136大肠杆菌中，利用其所产生的温度敏感性λ阻遏蛋白来调控外源基因表达，经ELISA反应检测其表达水平。结果带hIL-8基因的重组pKpL3a质粒成功转化到Pop2136大肠杆菌中，经诱导，表达了IL-8并经ELISA反应检测了其表达水平。结论：hIL-8成功在大肠杆菌中表达。【关键词】hIL-8PCR重组基因表达正文趋化因子（Chemokine）是一组具有趋化作用的细胞因子，能吸引免疫细胞到免疫应答局部，参与免疫调节和免疫病理反应。白细胞介素-8（Interleukin-8）属于趋化因子家族成员，其分子中含有Cys-X-Cys的三联氨基酸序列，因而属于CXC趋化因子亚家族（α家族）。IL-8的重要生物学功能是对中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和T细胞具有区划作用，并可促进中性粒细胞的活化，在炎症反应中是一种重要的炎症因子。另外，IL-8还具有促进造血细胞增殖及新生血管生成作用，在伤口愈合和肿瘤生长及转移的过程中发挥重要作用。由于天然来源的IL-8含量极低，难以大批量制备，因而只能利用基因工程技术进行表达和生产。其基本过程是：获取目的基因；表达载体的选择和构建；目的基因与表达载体的拼接；重组DNA分子转化到大肠杆菌；使其复制转录并合成重组的免疫分子。利用重组技术,可使大肠杆菌成为生产IL-8的生物工厂。这种生物工厂一旦建造成功,只要供给大肠杆菌适当的生长条件,就可提供取之不尽的IL-8。1材料与方法1.1主要材料1.1.1菌株与载体Pop2136大肠杆菌和含pKpL-3a质粒的大肠杆菌由本实验室提供。1.1.2工具酶与试剂TaqDNA聚合酶及其buffer购于北联生物医学工程公司。dNTPmix购于Takara公司。Klenow酶购于北联生物医学工程公司。内切酶StyⅠ、XbaⅠ购于Takara公司。T4DNA连接酶及其buffer购于Takara公司。1.1.3PCR引物的设计、合成上游5ˊ引物：agtgctaaagaacttagatgt；下游3ˊ引物：ccgtctagattatgaattataagccctct(内含XbaⅠ酶切位点和TAA终止密码)由Takara公司合成。1.1.4主要仪器PCR仪，微量加样器（20μl、200μl、1000μl），高速台式离心机，DYY-10型电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统，水浴摇床，孵箱，酶标仪，一次性酶标板等。1.2试验方法1.2.1PCR技术扩增hIL-8cDNA在Eppendorf管中依次加入下列成份...
