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中国药科大学本科毕业论文（设计） 中国药科大学 本 科 毕 业 论 文 论文题目 云南黄果冷杉化学成分研究 英文题目 Studies on the chemical constituents of Abies ernestii. var. salouenensis 专 业 中药学 院 部 中药学院 学 号 0844822 姓 名 余舒乐 指导教师 殷志琦 副教授 课 题 完成场所 中药学院天然药化教研室 论文工作时间： 2012年 03月 至 2012年 06月 云南黄果冷杉的活性成分研究 目 录 中文摘要………………………………………………………………………2 Abstract………………………………………………………………………..2 前言……………………………………………………………………………3 第一章 冷杉化学成分和药理作用研究进展………………………………..5 1.1 化学成分………………………………………………………………….5 1.2 药理作用………………………………………………………………….10 第二章 实验部分 ……………………………………………………………13 2.2 仪器与实验材料………………………………………………………….13 2.3 提取分离………………………………………………………………….13 第三章 化合物的结构鉴定 …………………………………………………14 参考文献………………………………………………………………………16 致谢……………………………………………………………………………18 附录…………………………………………………………………………....19 云南黄果冷杉的活性成分研究 0844822 余舒乐 摘要：目的：对松科植物冷杉Abies ernestii. var. salouenensis 中的化学成分进行系统的研究,为了解冷杉药理作用的物质基础，寻找新的活性成分以及进一步开发提供理论依据。方法：采用高浓度的乙醇提取，提取液浓缩加水混悬后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取。采用硅胶、反相、凝胶、大孔树脂、MCI等现代色谱方法对其中的氯仿、乙酸乙酯部位进行系统的化学成分研究。通过 UV, MS, NMR等光谱方法确定其化学结构。结果：从中分离得到3个化合物，经确定分别为(+)-儿茶素、山柰酚、槲皮素。 关键词：云南黄果冷杉；松科；黄酮类；抗肿瘤 Studies on the chemical constituents of Abies ernestii. var. salouenensis Abstract：Objective: To carry out systematically the chemical constituents from Abies ernestii. var. Salouenensis, provide the theoretical basis for the material foundation of its pharmacological activities and search for the new active ingredients. Methods: The compounds were separated and purified by column chromatography on silica gel and Sephadex LH-20, and identified on the basis of physico-chemical properties and spectroscopic methods. Results: Three compounds were isolated and identified as (+)-catechin, kaempferol and quercetin. Keywords：Abies ernestii. var. salouenensis; Pinaceae; flavonoid; anti-tumor 前言 冷杉属(Abies)是松科(Pinaceae)的一个重要属，大约有50种，分布于亚洲、北美、欧洲、中美及非洲北部的高山地带，中国有19种及3个变种。根据现代药理研究表明，该属植物具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗炎、抗溃疡、抗真菌、降压、镇咳、昆虫保幼以及中枢神经系统方面的一些活性[1]。 由于冷杉属植物分部广泛并且具有良好的药理活性，从1938年至今，国内外许多研究者对该属植物开展了系统的化学成分研究，已经从冷杉属植物中分离鉴定了约400个化合物，结构类型主要为萜类、黄酮、木脂素以及酚类、甾体、脂肪酸等。虽然我国有着丰富的冷杉植物资源，但我国研究者仅从2006年才开始对中国产的7种冷杉属植物进行比较系统的研究，从中分离鉴定约100个化合物，其中不乏新型骨架的二萜、黄酮[2-4]。 近年来，对冷杉属植物的药理活性研究主要集中在抗肿瘤活性方面。张卫东等研究长苞冷杉不同部位的药理活性[8]，发现其氯仿部位对A549(人肺癌细胞), LOVO(人结肠癌细胞), QGY-7703(人肝癌细胞)和6T-CEM(人T淋巴细胞白血病细胞)等肿瘤细胞株有较好的增殖抑制作用，通过进一步研究发现了大量抗肿瘤、抗炎的新化合物。其中从秦岭冷杉中分离出的三萜内酯类化合物Neoabieslactonee F、Neoabieslactonee E 对人体肿瘤细胞体外增殖具有较好的抑制作用，其IC50值与阳性对照阿霉素的相当。此外，对小鼠S180肉瘤(实体型)疗效实验有显著抑瘤作用，具有良好的临床应用价值。 通过文献查阅，我们发现产自云南西北部及西藏东南部海拔2600-3200米地带的云南黄果冷杉(Abies ernestii. var. salouenensis)是中国特有的树种，而且资源丰富，但是并未见其化学成分和药理活性研究的相关报道。为了寻找结构新颖的抗肿瘤活性先导化合物，我们对云南黄果冷杉进行了初步的化学成分预实验和药理活性测试。研究结果发现，其醇提取物的氯仿萃取部位富含三萜类化合物，乙酸乙酯萃取部位富含二萜类化合物，初步的抗肿瘤活性实验显示2个萃取部位均有较好的抗肿瘤活性。值得一提的是，其氯仿部位活性优于乙酸乙酯部位。这与文献报道的其他种冷杉植物抗肿瘤活性实验结果有差别。 因此，我们拟首次开展云南黄果冷杉的系统化学成分研究工作，填补国内外其化学研究工作的空白，进一步丰富冷杉属化学成分研究内涵，考察其中分离得到的单体化合物的抗肿瘤活性，以期明确其抗肿瘤活性的化学物质基础，为进一步深入开发利用该植物资源提供科学依据。 根据植物形态学，松科分为冷杉亚科，松亚科和落叶松亚科。2000年Xiao-Quan Wang等通过细胞遗传学研究，提出云杉属应该从冷杉亚科中分出，作为一个单独的亚科。通过对冷杉属植物进行系统的植物化学研究，并与云杉属中的化合物进行比较，可以从植物化学分类学方面进一步确认该分类的合理性。云南黄果冷杉作为中国的特有树种，我们的化学成分研究工作对其分类学研究具有重要的科学意义。 第一章 冷杉化学成分及药理作用研究进展 1.1 化学成分研究 对冷杉属植物的化学成分研究始于 20 世纪 40 年代，从冷杉属植物中已分离鉴定了大约 277 个化合物，化合物的类型主要为萜类，尤其是三萜。此外还包括黄酮，木脂素以及少数酚类、甾体、脂肪酸和脂肪醇等。而最新研究表明，香豆素、降二萜也广泛存在于冷杉中，进一步丰富了冷杉中化合物的种类。2008 年至今，文献又相继报导从冷杉中分离鉴定了大约100个化合物，其中不乏骨架新颖的倍半萜、黄酮[1]。 1.1.1萜类 1.1.1.1 三萜类 三萜是冷杉中的一类主要成分。从冷杉中分离得到的三萜主要有两类：羊毛脂甾烷型(lanostane)和环阿尔廷烷型(cycloartane)。而近两年分离得到的三萜也都属于这两种类型，值得一提的是近两年从秦岭冷杉和库页冷杉种分离得到的三萜多为侧链为内酯环的三萜。到目前为止，已报道的三萜约有88个[2]。 1.1.1.2 二萜类 此前报导的二萜主要是松香烷型二萜(abietane)和劳单烷型二萜(labdane)，Kaneko等人还报道过从日本冷杉中得到的一个海松烷型二萜(pimarane)。最近两年发现的二萜类化合物主要来自于长苞冷杉和秦岭冷杉。 1.1.1.3 降二萜类 降二萜类化合物是杨献文等人首次从冷杉植物中分离得到的类型，此类化合物主要以松香烷型居多，其中又以降三碳(C-15, 16, 17)的podocarpenes居多，其次是降一碳(C16或C18)松香烷化合物。此外还有降二碳(C-14, 15)的劳丹烷型二萜[3]。 1.1.1.4 倍半萜类 到目前为止，倍半萜是分离得到的骨架类型最多的一类化合物，而这类化合物主要是挥发性成分。目前报道的倍半萜多为从主要类型有链状型(acyclic)，吉码烷型(germacrane)，蛇麻烷型(humulane)，雪松烷型(himachalane)，愈创木烷型(guaiane, dodecane)，没药烷型(bisabolane)，桉烷型(eudesmane)，杜松烷型(cadinane)。但是近两年报导的该类成分并不多。 1.1.2黄酮类 冷杉属植物分离得到的黄酮类化合物主要含黄酮，黄酮醇，查尔酮及其苷，主要来源于A. amabilis，A. pindrow。此外还首次发现C4-C4相连的双黄烷醇abiesanol A[9]。 化合物1-46是从冷杉属植物中分离得到的53个黄酮类化合物。1-13为双黄烷醇类(diflavanols)，14-31是黄酮及黄酮苷类(flavones)；32-34为黄酮醇类(flavonols)； 35-41是二氢黄酮类(flavanones)；42-47为二氢黄酮醇及其苷类(flavanonols)；48-50是黄烷-3-醇类(flavan-3-ols)；51-53为查尔酮类(chalcones)。 R1 R2 4 H OH 5 OH H 6 OH OH R1 R2 R3 1 H OH H 2 OH H H 3 H OH OH R1 R2 7 H OH 8 OH H 9 H H 10 OH OH 11 R=α-OH 12 R=β-OH 18 R=H 19 R= TPC TPC= 17