单核细胞增生李斯特菌.doc

单核细胞增生李斯特菌 形态特征： ①革兰氏阳性的类球形杆菌 ②大小约为0.4~0.5µm x 0.5～2.0µm ③两端钝圆 ④在有些培养基中稍弯，单个、成V形或成对平行排列 ⑤在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性 ⑥兼性厌氧，无芽孢，一般不产生荚膜 ⑦ 在20~25℃时以4根周毛运动，在37℃时只有较少的鞭毛或1根鞭毛 培养特性： ①需氧和兼性厌氧 ②生长范围为2-42℃ ③最适温度为35-37℃ ④pH中性至弱碱性（pH9.6） ⑤在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。 ⑥在20-25℃培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。 ⑦在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。 ⑧在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。 ⑨在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。 生化特性：（甘露醇、木糖为阴性，其他为阳） 1.该菌触酶阳性，氧化酶阴性。 2.发酵多种糖类，产酸不产气。 发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。 不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。 3.不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解。 4.吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。 5.MR-VP试验和精氨酸水解阳性。 生化试验： ①动力试验+ 原理：有动力的细菌扩散生长，培养基浑浊，无动力的细菌培养基澄清。（结果：有动力，呈伞状生长，底为弯月牙形） ②过氧化氢酶试验（触酶试验）+ 原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。（结果：汽包产生为+） 应用：葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。 ③MR-VP试验+ 原理：葡萄糖→丙酮酸→大量混合酸→pH4以下→（+甲基红指示剂）→培养基变红 V-P试验：葡萄糖→丙酮酸(脱羧)→乙酰甲基甲醇(强碱+V-P试剂)→二乙酰(胍基)→培养基变红 糖发酵试验 葡萄糖和麦芽糖发酵试验+ 原理：有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸产气，培养基由紫（蓝）变黄（指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（－），培养基仍为紫（蓝）色。（结果：黄+） 七叶苷水解试验+ 原理：某些细菌（如类肠球菌）可水解七叶苷，生成葡萄糖和七叶素。七叶素可与培养基中的柠檬酸铁试剂的二价铁离子反应生成黑色化合物沉淀，是培养基变黑。（结果：黑+，黄-） 甘露醇发酵试验- 原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖类的能力各不相同，有的能分解多种糖类，有的仅能分解1~2种糖类，还有的不能分解。细菌分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点鉴别细菌。（结果：黄+，绿-) 木糖发酵试验- 原理：某些细菌能利用D-木糖作为碳源。木糖本身有抗细菌和霉菌的功能，尤其是革兰氏阴性菌及白色念珠菌。(结果：黄+） 鼠李糖发酵试验+ 原理：鼠李糖在细菌中以多糖或脂多糖存在与细胞表面。（结果：黄+） 培养基 形态 PALCAM琼脂 典型菌落为小的圆形灰绿色菌落，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹陷 李斯特氏菌显色琼脂 蓝色菌落，菌落周围有一不透明环（西尔李斯特氏菌-菌落周围没有不透明环） 检 样 25g(ml)样品+LB1增菌液225ml，均质 36±1℃，24~48h 报告 鉴定 木糖-，鼠李糖+ 接种木糖、鼠李糖，36±1℃， 24h;同时于TSA-YE平板划线纯化，30±1℃， 24~48h PALCAM琼脂 李斯特氏菌显色培养基 30±1℃，18~24h 30±1℃，24h 0.1ml+10mlLB2增菌液