利康保对断奶仔猪生产性能、肠道菌群及免疫水平影响的研究.doc

利康保对断奶仔猪生产性能、肠道菌群及免疫水平影响的研究         （四川农业大学）   摘要：选用72头28±2日龄断奶杜×长大三元杂交仔猪，随机分为四个处理，每个处理三个重复，每一重复6头猪((♂3、♀3))，自由采食和饮水。结果表明：日粮中添加低利康保对断奶仔猪平均日增重(ADG)、腹泻率有明显的影响(P<0.05)；与对照组相比，添加利康保能极显著的降低仔猪肠道大肠杆菌的浓度(P<0.01)，抑制其他病原菌的生长。所有的试验组都能显著(P<0.05)促进结肠、盲肠和直肠中双歧杆菌的增殖。不同利康保添加量对结肠中乳酸杆菌的增殖效果与对照组相比，差异不显著(P>0.05)；但对盲肠、直肠乳酸杆菌的增殖效果不一致；与对照组相比，添加利康保没有显著提高血清猪瘟抗体效价、免疫球蛋白A以及免疫球蛋白M(P>0.05)，但是能显著提高血清免疫球蛋白G的含量(P<0.05)。 关键词：利康保；断奶仔猪；生长性能；抗体水平；肠道菌群   饲用抗生素的应用在带给人们极大利益的同时, 它的滥用也给人类带来了越来越大的麻烦：滥用抗生素会使细菌产生抗药性、长期使用抗生素造成畜禽机体的免疫力下降，从而对疫苗的接种产生不良影响、长期用抗生素可引起畜禽内源性感染、会在畜产品和环境中造成残留。 随着微生态学理论的发展，人们发现肠道有益菌群如双歧杆菌、乳酸杆菌等与宿主在免疫、营养、急性和慢性感染等方面都有密切的联系。许多研究表明，利康保具有促进双歧杆菌等动物体内有益菌增殖、抑制有害菌及减少肠内腐败物质等多种生理性功能，从而从多方面改善宿主动物健康。本实验研究的目的，主要是考察不同利康保添加水平对断奶仔猪生产性能、肠道菌群、免疫水平的影响，找出利康保的最适添加量，为利康保在饲粮中的应用提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 试验品  试验材料为重庆雨润生物制品有限公司生产的利康保。 1.2 试验动物及分组  试验选用72头28±2日龄杜×长×大仔猪按照单因素4处理3重复随机设计，各组基础日粮相同。实验从28日龄断奶时开始，为期42天。具体分组情况如下： A．基础日粮+ 2‰金霉素预混剂2kg/t；B．基础日粮＋利康保4%； C．基础日粮＋5%利康保；　D．基础日粮＋利康保6%； 每个处理3个重复，每个重复6头仔猪 (3♂、3♀)，A为对照组，B、C和D为试验组。 1.3 基础日粮  试验基础日粮的配置参照中国瘦肉型猪饲养标准（GB8471～87），结合猪场实际情况设计而成，试验日粮为粉料，饲料原料配比及营养水平见表1： 表1    基础日粮配比和主要营养水平 原料 配比（%） 营养水平 玉米Corn 52 消化能DE（MJ/kg） 15.41 脂肪粉Fat 3.0 粗蛋白CP（%） 21.04 豆粕Soybean 20.0 赖氨酸Lys（%） 1.35 鱼粉Fish meal 7.0 蛋氨酸+胱氨酸Met+Cys（%） 0.85 预混料Premix 8.0 钙Ca（%） 0.82     有效磷AP（%） 0.63 代乳粉Milk placer 10.0     合计Total 100.0 饲料单价Cost：3.5元/千克 预混料为每公斤全价料提供: VA5500IU, VD32200IU, VE50mg,VK32.2mg, VB1228 mg, 核黄素5.0mg, 硫胺素1.5mg, 尼克酸25mg, D-泛酸12mg, 胆酸800mg, Cu220mg, Fe110mg, Mn30mg, Zn160mg, I20.3mg, Se0.3mg, 赖氨酸1350mg, 蛋氨酸500mg。 1.4 饲养管理  试验于2005年3月10日至2005年4月22日在四川农大试验猪场进行。试验在同一保育舍内，用自动食槽，每日加料一次，准确记录投料量，每天清洗猪栏2次，每周消毒一次，观察试验猪只生长、采食情况，记录腹泻头数和死亡头数，常规防疫。 1.5 测定指标与方法 1.5.1 生产性能  试验开始和试验结束早饲前个体空腹称重，以计算日增重，以栏为单位测定采食量，根据采食量及增重计算料重比。 1.5.2 腹泻频率  试验开始后，每日观察仔猪排粪情况，记录腹泻个体和持续时间，最后以每重复仔猪发生腹泻的头日数除以总的饲养头日数计算出腹泻频率。 1.5.3 肠道菌群  1.5.3.1 取样  试验最后一天，每重复随机挑取一头健康仔猪进行屠宰，立即剖腹并结扎所取肠段的两头（分别为结肠、盲肠和直肠），用酒精棉球消毒各结扎口后，放入已灭菌塑料袋中，运回实验室备用。 1.5.3.2 稀释  样品运回实验室后，立即在超净工作台上称取1.0g左右肠内容物于无菌试管中，加入先配好并已灭菌的稀释液9ml，加入玻璃珠振荡30秒钟，此为10-1；静置一段时间，吸取上清液1ml于盛有9ml稀释液的试管中进行10-2稀释，振摇3～4秒钟，并依次进行10-3～10-7倍稀释。 1.5.3.3 接种与培养 大肠杆菌  用微量取液器分别取结肠、盲肠和直肠内容物10-4～10-6稀释液0.1ml涂布接种于麦康凯NO.3培养基平皿上（各稀释度设3个重复，并编号），置37℃培养箱中有氧培养24小时后，选取粉红色或红色，表面光滑、凸起，边缘整齐不透明，质地软、粘，直径1.0～3.0mm的菌落进行计数，并进一步作理化鉴定。 乳酸杆菌  用微量取液器分别取结肠、盲肠和直肠内容物10-5～10-7稀释液0.1ml涂布接种于Rogosa琼脂培养基平皿上（各稀释度设3个重复，并编号），置37℃培养箱中有氧培养48小时后，选取乳白色，稍偏黄，表面光滑、凸起，边缘整齐不透明，质地软，直径0.6～2.7mm的菌落进行计数，并进一步作理化鉴定。 双歧杆菌  用微量取液器分别取结肠、盲肠和直肠内容物10-5～10-7稀释液0.1ml涂布接种于双歧杆菌分离选择性培养基（罗泽民，1995）平皿上（各稀释度设3个重复，并编号），置37℃培养箱中厌氧培养48小时后，选取乳白色，表面光滑、凸起，边缘整齐不透明，质地软，直径0.7～2.5mm的菌落进行计数，并进一步作理化鉴定。 沙门氏菌  挑取各肠段的10-1稀释液各一环于装有氯化镁孔雀绿增菌培养基的试管中进行增菌，37℃培养18小时以后，用微量取液器取0.1ml涂布接种于SS琼脂培养基上，37℃培养24小时后进行菌落计数。 1.6 猪瘟抗体效价  在仔猪断奶后的第21天皮下注射猪瘟弱毒活苗，并于注射前和注射后第14天前腔静脉采血，取血清，采用正向间接血凝试验测定猪瘟抗体效价。 1.5 血清IgG、IgA、IgM  于试验结束时，每重复随机挑取1头仔猪，前腔静脉采血，用免疫比浊仪测定血清中IgG、IgA和IgM的含量。 1.7 统计分析  试验数据采用SPSS10.0统计软件进行方差分析和邓肯氏多重比较, 记录平均值和标准差, 并检查各处理间的差异是否达到显著水平。 2 结果与分析 2.1 利康保对仔猪生长性能的影响  通过42d的饲养试验，测定了利康保对断奶仔猪ADG、ADFI、F/G以及腹泻频率的影响，结果见表2. 表2   利康保对仔猪生长性能的影响 项目 A组 B组 C组 D组 始重（Initial BW） 7.50±1.21 7.60±1.03 7.55±0.85 7.58±0.88 末重（End BW） 23.80±1.90a 25.20±1.26a 27.20±0.80b 25.50±1.70a 增重（Gain of BW） 16.30±0.42a 17.60±0.34a 19.65±0.28b 17.92±0.44a 平均日增重（ADG） 388±20a 420±30b 469±40c 427±30b 料重比（F/G） 1.75:1±0.17a 1.65:1±0.22a 1.45:1±0.12b 1.68:1±0.15a 日采食量（ADFI） 679±56.32a 691±47.25a 678±58.61a 717±67.54b 由表2可知： 增重与料重比性状C组与其他各组差异显著（P<0.05），平均日增重性状差异极显著（P<0.01），其比A、B、D组ADG分别提高17.27%，10.44%，8.96%； 同时B组提高断奶仔猪日增重8.2%，D组提高断奶仔猪日增重10%。在料重比性状上，C组与其他3组差异显著（P<0.05），A、B、D之间差异不显著。在日采食量性状上，D组与其他3组差异显著（P<0.05），A、B、C之间差异不显著。 表3  利康保对仔猪腹泻的影响 项目 A组 B组 C组 D组 样本数 18 18 18 18 腹泻猪头数 15 12 6 15 腹泻猪饲养日 200 48 28 196 试验日数 42 42 42 42 腹泻指数 0.2646±0.02a 0.0635±0.01b 0.0370±0.02b 0.2593±0.03a 在腹泻指数性状上，B、C组都能显著降低猪腹泻发病率（P<0.05），B组降低断奶仔猪腹泻发病率60.7%(绝对值)，降低腹泻频率77.88%。C组降低断奶仔猪腹泻发病率80.3%(绝对值)，降低腹泻频率90.3%。D组虽然降低断奶仔猪腹泻发病率5%(绝对值)，降低腹泻频率13.3%，但与对照组差异不显著。由此可以看出，利康保6%的添加量可能过量，从而导致腹泻。 2.2利康保对断奶仔猪肠道菌群的影响  利康保对断奶仔猪肠道菌群的影响结果见表4。 表4   利康保对断奶仔猪肠道菌群的影响 项目 A组 B组 C组 D组 大肠杆菌E.coli         结肠Colon 7.25±0.05 A 6.15±0.01B 6.19±0.04B 6.41±0.01C   盲肠Cecum  7.23±0.22A 6.10±0.09B 6.33±0.20C 6.33±0.05C 直肠Rectum 7.20±0.01A 6.22±0.11B 6.43±0.07B 6.46±0.32B 双歧杆菌Bifidobacterium         结肠Colon 8.67±0.03 a 8.65±0.18 a 9.08±0.07 b 9.04±0.16 b 盲肠Cecum 8.17±0.07 a 8.89±0.03 b 8.73±0.07 b 7.85±0.13 a 直肠Rectum 8.59±0.02 a 8.94±0.09 a 9.34±0.06 b 9.37±0.06 b 乳酸杆菌Lactic bacteria         结肠Colon 8.24±0.19 8.65±0.14 8.30±0.04 8.21±0.11  盲肠Cecum 8.18±0.05 a 8.17±0.15 a 8.67±0.02 b 8.87±0.10b 直肠Rectum 8.64±0.01b 8.27±0.23 a 8.44±0.02 a 8.02±0.04 a 2.2.1 利康保对大肠杆菌的影响   健康仔猪小肠中大肠杆菌一般为l05.9个，大肠中为107.1个。从表中可以看出，不同利康保添加量都能极显著(P<0.01)抑制结肠、盲肠和直肠中大肠杆菌的增殖，B、C组的利康保添加量效果最好。在对照组中，由于金霉素主要对革兰氏阳性菌有效，而大肠杆菌为革兰氏阴性菌，因此其对大肠杆菌的抑制不明显。 2.2.2 利康保对双歧杆菌的影响  据报道猪的结肠、盲肠、直肠内定居的正常微生物群占优势的菌群中，双歧杆菌就是其一，每克肠内容物所含不同菌群的菌数对数值均达到8.0-8.5。从表中可以看出，不同利康保的添加量都能极显著（P<0.01）抑制