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地中海贫血检测相关问题地中海贫血检测相关问题 周向阳 广西壮族自治区临床检验中心 广西医学检验质量控制中心 广西壮族自治区人民医院 -地贫基因缺失示意图-a a3.7-a a4.2-SEA a2a2 a1a1 a2a2 a1a1 1 1 地贫的基因型与表型 Normal(/)正常正常 +thal trait(/-3.7)(/-4.2)静止型单一静止型单一基因缺失或丧失功能基因缺失或丧失功能 临床无任何症状，一般血液学检查无异样，仅临床无任何症状，一般血液学检查无异样，仅平均红细胞体积平均红细胞体积(MCV)(MCV)位于正常值下限。出生位于正常值下限。出生时脐带血时脐带血Hb Barts Hb Barts 可达可达1%1%-2%2%，但很快消失。，但很快消失。地贫的基因型与表现型 Hb H disease(-3.7/-SEA)(-4.2/-SEA)o Thal trait(/-SEA)(-/-)标准型标准型2个个基因缺失或丧失功能基因缺失或丧失功能 临床无症状，血液学检查出现轻微贫血，红细胞大临床无症状，血液学检查出现轻微贫血，红细胞大小不均一，小不均一，平均红细胞体积平均红细胞体积(MCV)(MCV)及平均血红蛋白及平均血红蛋白含量含量(MCH)(MCH)轻度下降。出生时脐带血轻度下降。出生时脐带血Hb Barts Hb Barts 可可达达5%5%-15%15%血红蛋白血红蛋白H病病3个个基因缺失或丧失功能基因缺失或丧失功能 肝脾肿大，中度贫血。肝脾肿大，中度贫血。HbHHbH含量较高含量较高（0.8%0.8%-40%40%），易发生溶血，有些病例需不定期输血，重者需切脾易发生溶血，有些病例需不定期输血，重者需切脾。a地贫的基因型与表现型 Hb Barts Hydrops(-SEA/-SEA)Hb Barts胎儿水肿综合症胎儿水肿综合症 4个个a a基因缺失或丧失功能基因缺失或丧失功能 患胎于妊娠晚期或产后数小时内死亡，全身水患胎于妊娠晚期或产后数小时内死亡，全身水肿，肝脾肿大肿，肝脾肿大，可有四肢和外生殖器畸形，可有四肢和外生殖器畸形。由。由于胎儿无法合成于胎儿无法合成a a亚基，脐血血红蛋白亚基，脐血血红蛋白（Hb Barts，4）含量高含量高（80%80%-90%90%）。Hb Constant Spring (Hb CS)基因突变：基因突变：a a2珠蛋白基因珠蛋白基因142位终止密码子位终止密码子TAACAA突突 变变，其其mRNA不稳定不稳定，降解加速降解加速，导致导致Hb CS合合成减少成减少，Hb CS 在功能上相当于一个在功能上相当于一个a a-地中海贫地中海贫血血2 2基因基因。Hb Quong Sze (Hb QS)基因突变：基因突变：a a2珠蛋白基因珠蛋白基因125 位密码子位密码子CTGCCG突突 变变，导致导致Hb QS(a a125(H8)Leu Pro)。Hb QS高度不稳定高度不稳定，合成后迅速降解合成后迅速降解。Codon 41-42（TCTT）IVS-II-654 （CT）Codon 17 （AT）-28（AT）Codon 71-72（+A）Codon 26（GA）常见的基因突变类型：常见的基因突变类型：Codon 43（G）Codon 27/28（）IVS-I-1（GA）IVS-I-5（G）2011第一次地贫基因检验第一次地贫基因检验EQA 一、背景：1、广西与卫生部合作项目，开展地贫防治工程；2、基因检测在指导有地贫携带基因夫妇进行产前检查，防止重度地贫孩子出生方面具有重要意义。已建立三大地贫检测中心。二、目的：了解广西各医疗机构开展地贫基因检测的质量情况，进一步规范地贫基因检测、保证质量。三、参加实验室：广西各级医疗机构、人口服务中心共23个实验室（调查摸底34家，报名25家，已发质控品，自愿退出2家）。四、质控品：选取已确诊地贫接收治疗患儿，治疗时抽取的全血，用枸橼酸钠抗凝，交公司分装加工成质控品，每支0.5毫升。样本冻于-20，低于4运送到各实验室。五、质控品发放：共发放10个血样（其中-地中海贫血基因分析和-地中海贫血基因分析各5个血样，不同实验室收到的血样不完全相同，避免抄袭结果。每个病人的血样均留足备份保存于-80，用作破损后的补发和参考实验室确定参考结果。六、检测要求：1、-地中海贫血基因分析：包括中国人群常见的东南亚缺失（-SEA）、右侧缺失（-3.7）、左侧缺失（-4.2）三种缺失型基因检测，以及Hb WS,Hb QS,Hb CS三种三种2珠蛋白基因突变的珠蛋白基因突变的检测。检测。2、-地中海贫血基因分析：包括中国人群常见的8个位点突变CD41-42-TCCT(41-42M)、IVS-2-654 C变T(654M)、CD17 A变T(17M)、-28 A变G (28M)、CD26 G变A(EM)、CD71-72加A(71-72M)、CD43 G变T(43M)、-29 A变G(29M)的检测，以及少见的9个位点突变、CD14-15加G(14-15M)、CD27-28加C(27-28M)、-32 C变A(32M)、-30 T变C(30M)、IVS-1-1 G变T(IVS-1-1M)、IVS-1-5 G变C(IVS-1-5M)、CD31减C(31M)、CAP-40-43-AACC)(CAPM)、起始密码子ATG变AGG(IntM)的检测。七、评价方法：各样本的参考答案由专家组根据参评实验室检测结果、参考实验室检测结果和患儿病历资料确定，有异议时可取出血样再次检测。参考实验室名单：广西医科大学儿科实验室儿科实验室 自治区妇女儿童医院优生遗传科实验室 自治区人民医院PCR实验室 解放军303医院血液科PCR实验室 八、本次质评发现的问题：（一）a-地贫：1、有一家实验室完全错误，参考答案为 -SEA/cs的标本，做成了“/”。2、7家实验室未做2珠蛋白基因突变的检测珠蛋白基因突变的检测，导致所涉及的三个样本CS突变未检出。3、报告格式不规范：参考答案为-SEA/的标本，其他格式有：“/-SEA”，“-SEA/”，“-/”，“东南亚缺失型地贫-1”，“1.检出东南亚缺失型-地中海贫血 2.未检出-3.7，-4.2缺失型-地中海贫血 3.未检出QS,CS,WS点突变”（二）-地贫：1、有一家实验室两个标本检测错误，参考答案为“28M/28M”的报告为“71-72/71-72”，参考答案为“43M/71-72M”的报告为“71-72M/n”;2、另一家实验室参考答案为“28M/71-72M”的报告为“-28/-28”；3、报告格式混乱，参考答案为“28M/28M”的报告格式有：“-28m/-28m”，“-28/-28”，“-28N位点突变纯合子”，“-28纯合子”，“CD28”，“28位点突变（纯合子）”，”珠蛋白基因28位点突变纯合子，其余位点未见突变”。九、提醒：1、地贫基因检测不同于其他检验项目，要求100%准确。2、目前检测的突变为中国人常见已知突变，覆盖90%，检测最好不遗漏 3、报告格式需要规范。遵循原则：信息完整，表述规范，尽量简洁。4、室内质控。谢谢！