外周血PBMC的分离.doc
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外周血
PBMC
分离
外周血PBMC的分离
原 理
n 外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。
1.093
外周血
红细胞
粒细胞
单个核细胞
血小板
淋巴细胞
单核细胞
1.030~1.035
1.075~1.090
Ficoll：1.077±0.001
(PBMC)
1.092
1500rpm, 20℃ , 30min
PBMC
红细胞粒细胞
Ficoll
稀释外周血
Ficoll
稀释的血浆、血小板
实验步骤
n 1.采血，稀释
（外周血：稀释液=1：2）
n 2.在离心管中加入Ficoll，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll：稀释血=1：2）
n 3.18℃，1500r/min，离心30min
n 4. 轻轻吸取PBMC层移入另一试管中
n 5.加足量稀释液充分洗涤，1800 r/min离心5min ，弃上清。
注意事项
n 每毫升外周血液大约可获1×106单个核细胞
n Ficoll应适量，外周血应充分稀释
n 温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果
n 在Ficoll上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面
n 吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染
