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尿素
测定
方法
实 验 十 七
实验名称:尿素的测定
实验目的与要求:掌握测定血清尿素的基本原理
实验仪器、试剂:半自动生化分析仪、尿素测定试剂盒
实验原理:
尿素经脲酶水解生成NH3与CO2,在谷氨酸脱氢酶(GLDH)的作用下,氨与α-酮戊二酸及还原型辅酶Ⅰ(NADH)反应生成谷氨酸和NAD+,NADH在340nm处的吸光度下降速率与待测样品中尿素的含量成正比。
操作方法:
1、将试剂R1:R2=4:1混合,即为工作液
2、按下列顺序加入各试剂
单位ml 空白 标准 样本
蒸馏水 0.01 — —
样本 - - 0.01
标准液 - 0.01 -
工作液 1.0 1.0 1.0
3、混匀各管,340nm,空白管调零,延时30秒,读取初始吸光度A1,60秒后读取A2,计算ΔA
实验现象与数据:记录ΔA
结果分析与结论:尿素=ΔA样/ΔA标×C标 (8.32 mmol/l)
参考范围:1.7-8.3mmol/l
临床意义:
实 验 十 八
实验名称:血清尿酸的测定
实验目的与要求:掌握尿酸酶-过氧化物酶耦联法测定尿酸的基本原理
实验仪器、试剂:尿酸测定试剂盒,722E/723分光光度计
实验原理:尿酸酶氧化尿酸,生成尿囊素和过氧化氢,在过氧化物酶催化下,过氧化氢使ESBmT和4-氨基安替比林缩合成有色化合物,其在546nm吸光度与尿酸浓度成正比。
操作方法:
按以下步骤操作
单位ml 标准 测定 空白
样本 - 0.025 -
标准液 0.025 - -
蒸馏水 - - 0.025
酶试剂 1.0 1.0 1.0
混匀 37℃温浴5min,以空白管调零。546nm,0.5cm比色杯,测定各管的A
实验现象与数据:记录各管的A
结果分析与结论:血清尿酸浓度=A样/A标×C标 (357μmol/l) 参考值:男202-416μmol/L,女 142-339μmol/L
临床意义:
思考题:P223 第2题